青霉素G酰化酶的固定化研究进展

青霉素G酰化酶是一种重要的工业催化剂,每年催化制备20 000 t的6-氨基青霉烷酸,同时也用于β-内酰胺抗生素的合成.有效地回收和重复利用能够大大提高工业催化剂的应用性能,人们越来越关注青霉素G酰化酶的固定化研究.综述了青霉素G酰化酶的常用固定化方法,主要包括吸附法、包埋法、共价结合法、交联法等,以及该领域的最新研究进展.     

丝素膜作为固定化酶载体的研究：丝素膜固定化青霉素酰化酶性质的研究

本文以丝素蛋白膜和ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ（交联琼脂糖）为载体固定青霉素酰化酶（ＰＡ），详细研究了固定化前后酶性质的变化。结果表明与自由酶相比，固定化酶的热稳定性及ｐＨ值稳定性有很大的提高；固定化酶的表现米氏常数比自由酶仅有很小的增加；此外研究发现用丝素蛋白膜为载体比用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ为载体制备的固定化酶具有更高的热稳定性。     

戊二醛交联几丁质固定化青霉素G酰化酶及其性质研究

目的 以几丁质为载体,戊二醛为交联剂固定化粪产碱杆菌青霉素G酰化酶.方法 单因素优化固定化条件,以交联度、pH、温度、酶量4因素3水平正交试验,确定最佳固定化条件,并研究固定化酶的最适反应温度、pH及批次稳定性.结果 最佳固定化条件为几丁质0.3 g,酶量6.0 mL,交联度1.5%,温度37℃,pH 8.0,时间48 h,固定化酶最高比活性为62.3 U/g湿载体,最适反应温度为65℃,最适pH 9.0,重复使用8批活性基本稳定.结论 戊二醛交联几丁质固定化青霉素G酰化酶稳定性较好,具有一定的丁业应用前景.     

戊二醛交联几丁质固定化青霉素G酰化酶及其性质研究

目的以几丁质为载体,戊二醛为交联剂固定化粪产碱杆菌青霉素G酰化酶。方法单因素优化固定化条件,以交联度、pH、温度、酶量4因素3水平正交试验,确定最佳固定化条件,并研究固定化酶的最适反应温度、pH及批次稳定性。结果最佳固定化条件为几丁质0.3 g,酶量6.0 mL,交联度1.5%,温度37℃,pH 8.0,时间48 h,固定化酶最高比活性为62.3 U/g湿载体,最适反应温度为65℃,最适pH 9.0,重复使用8批活性基本稳定。结论戊二醛交联几丁质固定化青霉素G酰化酶稳定性较好,具有一定的工业应用前景。     

壳聚糖-铜(Ⅱ)配合物固定化青霉素G酰化酶

目的壳聚糖与CuSO4络合为壳聚糖铜后以高分子配位键法固定化青霉素G酰化酶,考察固定化酶的性质。方法单因素优化固定化条件,对Cu^2＋浓度、络合时间、pH、温度、加酶量进行L16（4^5）的正交试验,获得最佳固定化条件,并研究固定化酶的最适反应温度、pH及批次稳定性。结果最佳固定化条件为：壳聚糖直接与Cu^2＋络合制备壳聚糖铜载体,Cu^2＋浓度／0．1g·mL^-1,络合时间16h;载体0．3g,酶量1mL,pH4．9,温度30℃,固定化25h。最高固定化酶活性为65U／g湿载体,固定化酶最适反应温度60℃,最适pH9．0,固定化酶具有较好的保存稳定性。结论壳聚糖-铜（Ⅱ）配合物固定化青霉素G酰化酶的活性高,具有一定的应用潜力。     

交联青霉素G酰化酶聚集体制备及其催化特性研究

目的考察交联青霉素G酰化酶聚集体催化特性,探讨其应用潜力。方法以硫酸铵为沉淀剂获得青霉素G酰化酶蛋白沉淀,戊二醛交联沉淀的蛋白质制备交联酶聚集体,在此基础上研究交联酶聚集体的催化特性。结果交联粪产碱杆菌来源青霉素G酰化酶聚集体的最适反应温度55℃,最适pH9．0,其酸碱和热稳定性均优于游离酶,重复使用13批次几乎无酶活性丢失,反应20批次后仍有50．9％的活性。结论交联酶聚集体的稳定性较游离酶好,具有一定的工业应用前景。     

交联青霉素G酰化酶聚集体制备及其催化特性研究

目的考察交联青霉素G酰化酶聚集体催化特性,探讨其应用潜力。方法以硫酸铵为沉淀剂获得青霉素G酰化酶蛋白沉淀,戊二醛交联沉淀的蛋白质制备交联酶聚集体,在此基础上研究交联酶聚集体的催化特性。结果交联粪产碱杆菌来源青霉素G酰化酶聚集体的最适反应温度55℃,最适pH 9.0,其酸碱和热稳定性均优于游离酶,重复使用13批次几乎无酶活性丢失,反应20批次后仍有50.9%的活性。结论交联酶聚集体的稳定性较游离酶好,具有一定的工业应用前景。     

重组大肠杆菌产青霉素酰化酶的发酵动力学研究

对产青霉素酰化酶重组大肠杆菌M3进行分批发酵动力学研究。根据Logistic和Luedeking-Piret方程,拟合出重组大肠杆菌M3分批发酵过程中菌体生长、青霉素酰化酶合成、基质消耗的动力学模型及模型参数。结果表明,重组大肠杆菌M3产青霉素酰化酶的发酵动态过程能很好的被该模型所表达。     

固定化青霉素酰化酶对荧光假单胞菌群体感应的抑制作用

水产品腐败菌的群体感应现象是加速水产品腐败的原因之一。近年来,由于化学保鲜剂的使用导致许多腐败菌产生抗性,并且其安全性也令消费者担忧,因此研究安全、高效的生物保鲜剂是水产保鲜中的重要课题。本研究用固定化青霉素酰化酶来抑制水产品优势腐败菌——荧光假单胞菌的群体感应现象。利用CV026验证固定化青霉素酰化酶对荧光假单胞菌AHLs的淬灭作用;利用光学显微镜和扫描电镜研究酶对生物被膜的影响;利用牛奶琼脂平板验证胞外蛋白酶的活性;通过分子对接预测酶与不同AHLs的相互作用。结果表明,固定化青霉素酰化酶能够降低荧光假单胞菌AHLs的含量,从而减少紫色杆菌CV026紫色菌素的生成,减缓荧光假单胞菌生物被膜和胞外聚合物的形成。同时也干预了胞外蛋白酶的产生,当酶质量浓度为15 mg/mL时无法观察到明显的蛋白抑制圈。分子对接结果显示,该酶与短链和长链的信号分子都能成功对接,然而,更偏向于长链AHLs。3D对接结果显示,C14-HSL被活性中心周围的氨基酸残基全部包裹,相互以氢键连接,氢键的数量较多,结合作用更强。由此说明固定化青霉素酰化酶具有良好的群体感应淬灭活性,可作为新型保鲜剂应用于水产品保鲜。     

酰化和酶水解对菜籽蛋白功能性质和抗氧化活性的影响

研究乙酰化和丁二酰化对菜籽蛋白功能性质和抗氧化活性的影响,以及碱性蛋白酶水解对酰化菜籽蛋白功能性质和抗氧化活性的影响。结果表明,乙酰化和丁二酰化能明显提高菜籽蛋白的水溶性、吸油性和乳化性,但对乳化稳定性和起泡性影响不大,泡沫稳定性略有增加;酰化反应还能提高菜籽蛋白对DPPH自由基的清除率;酶水解酰化菜籽蛋白能显著提高水溶性,同时提高乙酰化菜籽蛋白对DPPH自由基的清除率。     

蚕丝固定化脂肪酶催化猪油水解

研究了蚕丝固定化脂肪酶催化猪油水解的性能。结果表明：在温度为５５℃、ｐ Ｈ 为 ８２ 的条件下,固定化脂肪酶活性最高。底物浓度高达５５％ （ Ｗ ／ Ｖ）时,仍无底物抑制。适宜的搅拌速度是４５０ ｒ／ｍ ｉｎ～５００ ｒ／ｍ ｉｎ。在上述条件下,固定化脂肪酶间歇水解猪油时的操作半衰期约为 ２６０ ｈ。     

Gel Matrix Influence on Hydrolysis of Triglycerides by Immobilized Lipases

The hydrolytic activities and specificities of gel-entrapped C. cylindracae lipase (CCL) and R. arrhizus lipase (RAL) toward olive oil and tributyrin were investigated. Lipases in hydrophobic gels with the longest chain lengths generally displayed highest activity. The optimal temperature was 30–35° for free and 37–40° for gel-entrapped lipases. The ratio of the activity on tributyrin to that of olive oil (expressed as T/O ratio), an indicator of substrate specificity, increased from 0.3 for free lipases to 12.3 ± 2.3 for CCL lipase in ENTP-2000-formed gel and 16.2 ± 0.3 for RAL lipase in ENTP-4000-formed gel.     

Hydrolysis of N-Acetyl-L-Glutamine by Acylase I

Parenteral administration of N‐acetyl‐L‐glutamine (NAQ) produces substantial urinary losses. To evaluate enteral utility, we examined NAQ hydrolysis by acylase I, a critical first step in biological utilization. NAQ was quantitatively hydrolyzed to glutamine in vitro. Enzyme kinetic parameters were compared for NAQ (Km = 11.4 mM, Vmax = 5.54 nmole glutamine/min/μg enzyme) and an approved food additive, N‐acetyl‐L‐methionine (NAM) (Km = 1.36 mM, Vmax = 7.48 nmole methionine/min/μg enzyme). These data indicated preference for NAM in substrate recognition (Km), but similar relative catalytic ability (Vmax). While NAQ is possibly a suitable enteral glutamine source, utility will depend on intestinal acylase I levels and intestinal residence times not yet determined. Keywords: nutrition, N‐acetyl‐L‐glutamine, glutamine, acylase, bioavailability     

酸溶性酶解大豆蛋白的研究

本论文通过酶法改性大豆蛋白,获得了在pH4.0条件下溶解良好的大豆蛋白。实验结果表明在1~3h的反应时间内,蛋白质经酶解达到了最大的的酸溶解性。最佳酶解工艺条件为:大豆分离蛋白浓度5%,酶用量5%(以反应物为100%计),pH8.0,55,反应时间3.5h。在此条件下,大豆蛋白的水解值达到了10.35%。在实验中进一步通过采用SDS-PAGE电泳方法测定大豆蛋白酶解情况及产物分子量范围。