Asp,NigerNo.3单宁酶纯化及性质的研究

Ａｓｐ．ＮｉｇｅｒＮｏ．３单宁酶通过超滤、ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ离子交换层析,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０柱层析以及Ｓｅｐｈａｒｏｓ－６Ｂ柱层析四步纯化后,经过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定显现－条蛋白质带,酶的总活力回收率达到１１％,纯化倍数为１１３．５;     

低聚果糖合成酶──果糖转移酶的部分酶学性质研究

研究从土壤中筛选得到的黑曲霉ＡＳ００２３菌株所产的β－果糖转移酶的一些酶学性质。该酶的最适ｐＨ为５．０，最适温度为５０℃，有较好的热稳定性和较宽的ｐＨ（３．５～１０）适宜范围；并研究了１２种化学物质对酶活的影响和底物的特异性。结果显示，钴离子对该酶有一定的激活作用；底物分子越大其反应速度越慢。该酶的米氏常数Ｋ＿ｍ＝４７ｍｍｏｌ，葡萄糖是酶反应的竞争性抑制剂，其Ｋ＿ｉ＝３３０ｍｍｏｌ．当５０％（Ｗ／ｖ）蔗糖与酶在ｐＨ５．０和５０℃作用１６ｈ时，得到５２％（产物／总糖）低聚果糖。     

酶法改变甘草苷糖醛酸基提高其甜度的研究(Ⅱ)——能水解甘草苷糖醛酸基酶的提纯与酶性质研究

以酶法改变甘草苷糖醛酸基提高其甜度为目的,对新分离筛选的甘Ｍ－２和甘Ｍ－６霉菌产的β－葡萄糖醛酸苷酶进行了分离提纯和酶学方面的研究。结果表明,两株菌产的β－葡萄糖醛酸苷酶被６０％饱和硫酸铵沉淀较好,经ＤＥＡＥ－ＣｅｌｕｏｓｅＤＥ５２离子交换层析柱梯度洗脱,得到纯酶,提纯倍数分别为１０．６７和６．１５倍,收率分别为３３．０％和２４．２％,其中甘Ｍ－２菌产β－葡萄糖醛酸苷酶只能将甘草苷水解成甘草次酸（ＧＡ）;甘Ｍ－６菌产β－葡萄糖醛酸苷酶水解甘草苷主要变成甜度很高的单葡萄糖醛酸基甘草苷（ＧＡＭＧ）;两种酶在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳都得到电泳单点,其酶蛋白相对分子质量分别为６００００和４２０００;酶反应最适ｐＨ分别为５．０和６．０,最适温度均为４０℃,均在ｐＨ４．０～８．０和２０～７０℃范围内相对稳定。     

黑曲霉β-D甘露聚糖酶的纯化及基本性质

设计了利用硫酸铵分级沉淀，凝胶过滤层析和羟基磷灰石吸附层析相结合及二次羟基磷灰石吸附层析二种分离方案，使一种黑曲霉β－Ｄ甘露聚糖酶得到纯化，纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示基本为单一蛋白带。凝胶过滤法测的全酶相对分子质量为４９０００，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测得相对分子质量为５１０００．聚丙烯酰胺等电聚焦测得此纯化酶等电点为３．８．     

顶青霉木聚糖酶的分离纯化与鉴定

使用硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶色谱脱盐、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０离子交换色谱等分离纯化技术,从顶青霉（Ｐｅｎｃｉｌｉｕｍｃｏｒｙｌｏｐｈｉｌｕｍ）培养液中分离到３种木聚糖酶组分,分别称为ＰａｒｔＡ、ＰａｒｔＢ和ＰａｒｔＣ．ＰａｒｔＢ和ＰａｒｔＣ经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶过滤色谱和ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和色谱进一步分离纯化,分别得到２个纯木聚糖酶组分．ＰａｒｔＢ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为单带,相对分子质量为２４２００;ＰａｒｔＣ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定基本为单带,相对分子质量为４８３００     

龙虾多酚氧化酶的纯化及其部分生化特性

通过凝胶过滤层析和离子交换层析从龙虾体内纯化得到一种活力较强的多酚氧化酶,纯化倍数为３６倍,分子量为３３ＫＤ,最适ｐＨ为６．３,最适反应温度为３７℃,以多巴为底物,该酶专一性常数Ｖｍａｘ／Ｋｍ’为３５．２。     

黑曲霉N5-5单宁酶的纯化及酶学性质测定

采用中空纤维膜超滤和葡聚糖凝胶层析相结合的方法对黑曲霉N5-5单宁酶进行纯化,然后对纯酶性质进行测定。结果显示,黑曲霉N5-5单宁酶用该方法纯化后,可纯化近20倍,酶活力可回收23.30%。对纯酶作十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可知黑曲霉N5-5单宁酶为分子质量64.2 k D的单肽链蛋白。纯酶的酶促反应最适温度为45℃,且在25~45℃范围内热稳定性良好;酶促反应最适p H值为5.0,且在p H 5.0~5.5范围内酸碱稳定性良好。另外,反应动力学测定结果表明,该酶对底物没食子酸丙酯的米氏常数K_m为0.916 mmol/L,最大反应速率vmax为0.877 mmol/(L·min)。     

蒜酶及其动力学研究

用凝胶色谱法从大蒜计中提取蒜酶,以Ｌ-半胱氨酸亚砜作底物研究了蒜酶的反应动力学和最适反应条件,得到符合米氏方程的反应表达式的Ｋｍ＝１．６０。最适条件３２℃和ｐＨ６．４,并认为蒜酶服从酶的一般规律,在底物浓度过高时会产生底物抑制效应,从而为蒜加工过程中抑制蒜酶裂解蒜氨酸产生蒜辣味提供依据。     

克鲁维酵母突变株UV-G-40-3菊粉酶性质的研究

研究了克鲁维酵母突变株（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ－ＵＶ－Ｇ－４０－３）所产菊粉酶的分布为胞外酶∶胞壁酶∶胞内酶比是５．７∶１．６∶１。该酶Ｓ／Ｉ为５．３,最适温度为５０℃,最适ｐＨ为４．５,在５０℃以下、ｐＨ４．５～８的范围内比较稳定,４℃贮存稳定性好,１４ｄ后仍保持７６％活力,为外切型菊粉酶,酶解粗菊糖（洋姜提取液）活性为纯菊糖的４倍。     

中国根霉12菌株抗生物质的分离提纯及分子量测定

中国根霉１２（Ｒ．ｃｈｉｎｅｓｉｓ１２）菌株产生的抗生物质存在于发酵液中，首先经过饱和度为７０％硫酸铵盐析处理，再经半透膜透析去离子后，通过Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ７５凝胶柱层析，浓缩含有活性组分的层析洗脱液，得到抗生物质粗制品。经ＨＰＬＣ和薄板层析法证明为一纯组分。而且用Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ７５凝胶柱层析法测得抗生物质的分子量为４８０００道尔顿     

圆弧青霉碱性脂肪酶发酵和纯化的研究

圆弧青霉变异株ＰＧ３７产酶最适条件：碳源用豆油;氮源用豆饼粉;装液量５０ｍｌ／５００ｍｌ三角瓶,摇瓶转速２５０ｒ／ｍｉｎ,培养温度及时间分别为２８℃和９６ｈｒ,起始ｐＨ７．５。发酵至第３６、５４和７２ｈｒ各流加０．４％豆油,发酵结束脂肪酶１５００Ｕ／ｍｌ。经过滤,硫酸铵盐析以及Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｃｌ－４８Ｂ、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｏｌｗ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７     

用尿素—SDS—PAGE凝胶电泳测定乳球菌肽的分子量

采用尿素－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ不连续缓冲系统凝胶进行电泳，对分子量为０．２５￣２．０ＫＤ范围内的多肽或蛋白质进行分子量测定，结果令人满意，测得Ｎｉｓｉｎ的分子量为３５００ＫＤ和１４０００ＫＤ。     

坎皮纳斯类芽孢杆菌木聚糖酶的纯化以及酶学性质

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-50凝胶过滤、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析对坎皮纳斯类芽孢杆菌（Paenibacillus campinasensis）xy-7发酵液进行分离纯化,获得纯化的木聚糖酶,纯化倍数为26.36,酶活回收率为5.13%。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果为单一条带,分子质量为24.5 ku。酶学性质研究结果表明,该酶的最适反应温度为60 ℃,最适pH值为8.0。K+、Fe2+对酶有激活作用,Zn2+、Cu2+对酶有强烈的抑制作用。以榉木木聚糖为底物时,米氏常数Km=4.733 mg/mL,最大酶反应速率Vm=315.85 μmol/（min·mg）。     

小牛凝乳酶的分离及部分特性研究

用ＮａＣｌ和乙醇的水溶液从小牛皱胃中提取小牛凝乳酶，此粗酶经ＤＥＡＥ－纤维素离子交换柱层析，ｐＨ值，离子强度线性梯度洗得６个蛋白峰，其中峰Ｉ，ⅡⅢ与酶活性重叠。并将峰Ｉ经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５菌聚糖凝胶层析柱又得３个蛋白峰，峰Ⅲ与酶活性峰重叠。合并经ＤＥＡＥ－纤维素离子交换柱洗脱的峰Ｉ，ⅡⅢ酶液，其最适作用温度是５０℃，５５℃范围内酶活性仍稳定，最适ｐＨ为６左右，在ｐＨ值为３～６范围内稳定性较好     

重组葡萄糖脱氢酶酶学性质研究

葡萄糖脱氢酶可用于高纯度低聚果糖和葡萄糖酸钙的生产，一种重组葡萄糖脱氢酶表达、纯化后，对该酶酶学性质进行了研究。最适反应pH值8．4，最适反应温度37℃，在温度低于45℃条件下，酶活力稳定性好。在最适温度和pH条件下，以葡萄糖为底物时葡萄糖脱氢酶的米氏常数Km=20．09mmol／L，以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）为底物时的米氏常数Km=0．10mmol／L。     

菊粉酶酶解菊芋提取液的试验

报道黑曲霉ＡＬ－１５４菊粉酶产生和酶解菊芋提取液的适宜条件：５％菊芋提取液,２％玉米浆、０．３％酵母膏的基本培养基,该酶活力达１４６．４ｕ／ｍｌ,是适培养条件为：ＰＨ４．５－５．０,３０℃,时间４８ｈ,酶解菊芋提取液的最适工艺条件为：ＰＨ５．０,６０℃,底物总糖浓度为１０－２０％,酶用量３．０ｕ／ｇ菊糖,酶解时间１０ｈ,底物降解率达９７．２％,酶解产物中果糖占总糖的８６．１％。     

解淀粉芽孢杆菌I型耐热普鲁兰酶的纯化及酶特性分析

对来源于菌株解淀粉芽孢杆菌HxP-21的普鲁兰酶（命名为PulBa）分离纯化，研究其酶学特性，为普鲁兰酶在淀粉加工中的应用提供理论基础。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和葡聚糖凝胶过滤层析从菌株HxP-21发酵液中分离纯化出一种新型的普鲁兰酶。酶的纯化倍数20.8，回收率53.2%，比活力176.5 U/mg。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得PulBa达到电泳纯，分子质量51.2 kDa。PulBa在45～70 ℃和pH 3～6范围内具有较高酶活力，最适反应温度55 ℃、pH 4.5。PulBa有良好的pH值稳定性和热稳定性，40～70 ℃孵育120 min保留最初活性的80%以上；pH 3～7范围内具有很高的稳定性，孵育6 h后仍保留60 U/mL以上活性。PulBa对各种金属离子和化学试剂表现出不同的敏感性，Mg2＋和Ca2＋能够显著增强酶活力。PulBa最适作用底物为普鲁兰糖，对马铃薯支链淀粉、玉米支链淀粉、可溶性淀粉和糖原也有一定水解活性，但对α-环糊精和β-环糊精和直链淀粉无活性。以普鲁兰糖为底物PulBa的Km和Vmax值分别为1.34 mg/mL和24.6 μmol/（min·mg）。研究表明PulBa是典型的I型普鲁兰酶。薄层层析进一步证明，PulBa专一性水解支链淀粉α-1,6-糖苷键，产生麦芽三糖。本研究确定了一种新型的普鲁兰酶，该酶在高热稳定性和酸性环境下具有高活性，在淀粉加工等生物技术产业中有较好的应用潜力。     

绿豆乳酸菌饮料稳定性的研究

本文从绿豆淀粉的糖化、饮料的均质和添加稳定剂等三个方面对绿豆乳酸菌饮料的稳定性进行了研究。实验选用的α－淀粉酶的最适ｐＨ值为６．５～７．０，最适底物浓度为３０％，最佳糖化条件为７０℃、１００ｍｉｎ。绿豆乳酸菌饮料的最佳稳定条件是：ＰＧＡ添加量０．２％；ＣＭＣ添加量０．２％；发酵豆乳的终点ｐＨ值为４．１～４．２；豆乳浓度为１∶１０；２０ＭＰａ压力下均质两遍。     

几丁质固定化无花果蛋白酶的研究

载体几丁质通过甲酸和戊二醛活化共价偶联无花果蛋白酶，固定化反应在给酶量为１．０ｍｇ／ｇ载体，ｐＨ７．５，４℃进行１５ｈ。制备的固定化酶表观Ｋｍ值（酪蛋白）为０．９５ｍｇ／ｍｌ，溶液酶的Ｋｍ值为０．３８ｍｇ／ｍｌ，固定化酶的最适ｐＨ范围变宽，由溶液酶的最适ｐＨ７．５－７．８变为在ｐＨ６－８范围内酶活性保持稳定；固定化酶的最适温度由溶液酶的６０℃变为３７℃。重复水解酪蛋白７次后，固定化酶保持原酶活性５     

酸性脲酶反应动力学研究

用Ｂｅｒｔｈｌｏｔ法测定酸性脲酶酶反应过程产物ＮＨ＋４的浓度变化。实验表明，酸性脲酶反应是按Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ机理进行。其最佳反应条件是ｐＨ＝４．５，反应温度６０℃，反应活化能Ｅａ＝３７．３４ｋＪ／ｍｏｌ，米氏常数Ｋｍ＝０．２８６８ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍ＝０．１７４４ｍｍｏｌ／Ｌ·ｍｉｎ．