利用重组酶高效转化制备稀有人参皂苷C-Mc1和C-Mc

为了高效制备稀有人参皂苷C-Mc和CMc1,调取了Terrabacter ginsenosidimutans中的人参皂苷酶基因,构建载体GST-bgpA,并转化到Escherichia coli C41(DE3)中表达,得到人参皂苷3-O-β-D-葡萄糖苷酶。该酶分子质量为72.4 kDa,转化人参皂苷Rc的最适pH为7.0,最适温度为40℃,米氏常数K_m值为6.25 mmol/L,V_m值为19.6 mmol/(h·L)。为了降低成本,利用粗酶转化人参皂苷Rc制备C-Mc1和C-Mc。粗酶制备C-Mc1的反应条件：20 g/L的人参皂苷Rc在40℃下酶反应24 h;制备C-Mc的反应条件：5 g/L的人参皂苷Rc在40℃下酶反应60 h。此条件下,粗酶转化制备并分离纯化得到C-Mc1和C-Mc的单体,并经HPLC检测,其纯度均在90%以上。C-Mc1的酶转化制备：产物得到C-Mc和C-Mc1,其摩尔得率分别为74.9%和11.1%。C-Mc的酶转化制备：C-Mc的摩尔得率为93.2%。该研究为稀有人参皂苷C-Mc和C-Mc1产业化提供了依据。     

稀有人参皂苷C-K转化菌株的筛选鉴定及其转化特性

以原人参二醇型皂苷混合物为底物对10种霉菌进行筛选,发现3.26号菌株能够将高含量的原人参二醇型皂苷Rb1、Rb2、Rc等转化为具有抗肿瘤活性的稀有人参皂苷Compound K(C-K)。经形态学和ITS序列分析鉴定,该菌株属于附球霉属(Epicoccum)真菌。从该菌株培养液中分离出人参皂苷水解酶粗酶E-I,确定其最适pH值和最适温度分别为pH 5.0和40℃。用EI分别转化人参皂苷Rb1和Rb2、Rc,发现它既能水解人参皂苷Rb1,也能水解Rb2和Rc,但是对Rb1的水解活性更强。上述结果说明:3.26号菌株产生的糖苷酶具有广泛的底物专一性,但是对葡萄糖苷键的专一性更高;该菌的生物转化途径为人参皂苷Rb1、Rb2、Rc→Rd→F2→C-K。     

酶法转化原人参二醇型皂苷为稀有人参皂苷C-K的研究

通过比较PDA培养基和V8汁培养基对卵形孢霉产酶的影响,确定V8汁培养基培养卵形孢霉,糖苷酶活性更高。在该条件下培养卵形孢霉,通过DEAE-纤维素柱层析和30%～80%（NH4）2SO4沉淀,从其培养液中部分纯化出一种能够高效转化原人参二醇型皂苷为稀有人参皂苷C-K的糖苷酶GE-I。该酶转化人参皂苷Rb1、Rb2、Rc的途径分别为:Rb1→Rd→F2→C-K,Rb2→C-O→C-Y→C-K,Rc→Mb→Mc→C-K。GE-I最适pH为5.0,最适温度为45℃,在pH4.0～12.0和温度30～75℃范围内具有良好的稳定性。本研究为酶法制备稀有人参皂苷C-K奠定了一定的基础。      

人参皂苷酶Ⅲ型转化制备人参稀有皂苷Gyp17和Gyp75

为了高效制备稀有人参皂苷Gyp17和Gyp75,利用大肠杆菌克隆表达人参皂苷酶Ⅲ型酶,转化低活性人参皂苷Rb1,制备稀有人参皂苷Gyp17和Gyp75。结果表明,将20 g/L的Rb1皂苷在37℃酶反应24 h,4 g Rb1底物制备了3.1 g稀有皂苷Gyp17,其摩尔得率为90.8%。5 g/L的皂苷Rb1在37℃酶反应60 h,4 g Rb1底物制备了2.1 g Gyp75单体和0.45 g Gyp17单体,其摩尔得率分别为74.2%和13.1%。经HPLC检测,所得到Gyp75和Gyp17皂苷单体纯度均在90%以上。该研究为人参稀有皂苷Gyp17和Gyp75的产业化提供依据。     

人参中稀有人参皂苷转化工艺研究进展

近年来人参保健食品的开发呈上升趋势,稀有人参皂苷是具有更强生物活性的人参皂苷次级代谢物,在天然植物中含量极少。本文综述了稀有人参皂苷的转化工艺,为人参的进一步合理开发提供理论基础及技术参考。     

生物转化三七茎叶皂苷研究进展

三七茎叶资源丰富,研究发现三七茎叶皂苷是其防治疾病的主要生物活性物质,功效日益受到瞩目.近年来,随着生物技术的不断发展,生物技术在中药资源的加工、药理研究以及分离纯化方面取得了突破性进展.本文总结了近年来三七茎叶皂苷生物转化技术的研究成果,为综合利用三七茎叶及其特色食品、保健食品和新药开发等提供新的途径,为中药学与生物...     

三七茎叶中皂苷类成分研究进展

三七茎叶与三七为同一植物的不同药用部位,其皂苷类成分与三七有区别.随着检测技术的进步,目前从三七茎叶中鉴别出226种皂苷类成分,本文重点介绍近年来从三七茎叶中发现的皂苷类成分及活性单体皂苷,为三七茎叶的研究与开发提供参考.     

三七茎叶总皂苷提取工艺及抗氧化活性研究

目的 为高效提取三七茎叶总皂苷,建立并优化了乙醇热回流提取三七总皂苷的工艺条件。方法 以人参皂苷Rb3的提取率和纯度为指标,通过部分因子实验设计和中心组合实验设计,对乙醇浓度、液料比、提取时间、提取温度4个因素进行考察,筛选最佳提取工艺参数,并进一步用c对四种不同提取方法所获三七皂苷的抗氧化效果进行评价。结果 最佳提取工艺参数为乙醇浓度50%、液料比10.7 ml/g、提取时间1 h和提取温度60 ℃,该提取方法所获皂苷的抗氧化效果高于其它提取方法。结论 该工艺流程在保证获得较高人参皂苷Rb3纯度和含量的基础上,具有经济、快速、高效的特点,为后续三七茎叶的进一步开发奠定了理论基础。     

人参茎叶总皂苷对心理应激荷瘤小鼠肿瘤生长及化疗效果的影响

探讨了人参茎叶总皂苷(GSLS)对心理应激状态荷瘤小鼠肿瘤的生长及化疗效果的影响。对C57/BL小鼠移植性肿瘤Lewis肺癌鼠施以6h/日束缚模拟心理应激,测定GSLS对小鼠肿瘤抑制率和对免疫器官质量的影响以及对化疗药环磷酰胺(CTX)治疗效果的影响。结果束缚应激组小鼠与对照组比较,肿瘤质量增加40.82%(P0.01),表明束缚应激状态下肿瘤生长明显;GSLS100mg/kg、200mg/kg组与CTX联用组瘤重明显低于NS+束缚模型对照组(P0.05-0.01),表明GSLS与化疗联用组肿瘤抑制率明显提高。GSLS+束缚应激组胸腺和脾脏质量分别增加13.41%、7.06%,表明GSLS对免疫器官有增重作用。人参茎叶总皂苷与化疗药物联用后对束缚应激状态的动物移植肿瘤有明显抑制作用,其可明显增强化疗药物对肿瘤的抑制效应,机制可能与其抗心理应激、增强免疫及抗肿瘤的综合作用有关。     

人参茎叶总皂苷对幼年雄性大鼠生殖系统的影响及作用机制

目的：研究人参茎叶总皂苷对幼年雄性大鼠生殖系统的影响及作用机制。方法：将40 只SD幼年大鼠分为对照组及人参茎叶总皂苷低、中、高剂量给药组,灌胃两周后处死,用放射免疫法检测大鼠血清中睾酮的含量,用酶联免疫试剂盒测量大鼠血清中双氢睾酮、促黄体激素和促卵泡素的含量,称量大鼠的睾丸质量,计算体质量增加量、睾丸脏器系数和精子密度。用高效液相色谱仪对比分析高剂量组大鼠血清和对照组血清中成分的差异。将高剂量组大鼠血清和人参茎叶总皂苷溶液,按0%（对照组）、5%、10%、15%的体积分数分别加到培养的大鼠睾丸间质细胞中,用台盼蓝染色法和噻唑蓝法检测细胞存活率和活力,用放免法检测睾丸间质细胞培养液中睾酮的含量,用大鼠环磷酸腺苷酶联免疫试剂盒检测睾丸间质细胞内环磷酸腺苷的变化。用SPSS软件分析各组间差异。结果：人参茎叶总皂苷能剂量依赖性地显著降低幼年大鼠的血清睾酮水平（P＜0.01）、双氢睾酮（P＜0.01）水平和精子密度（P＜0.01）。与对照组相比,高剂量组大鼠血清中含有5 种成分是对照组中所没有的,并且人参茎叶总皂苷给药组的睾丸质量（P＜0.05）和体质量增加量（P＜0.01）显著降低,血清促黄体激素（P＜0.01）、促卵泡素（P＜0.01）和睾丸脏器系数显著上升（P＜0.05）。人参茎叶总皂苷及其含药血清能抑制睾丸间质细胞内内环磷酸腺苷水平和睾酮的合成。结论：人参茎叶总皂苷可能通过抑制蛋白激酶A途径降低大鼠血清中睾酮的生成,从而抑制睾丸发育和精子生成,影响雄性幼鼠生殖系统的发育。     

稀有人参皂苷compound K转化菌株的筛选及转化条件优化

从22种植物病原真菌中筛选出6种能够转化原人参二醇型皂苷为稀有人参皂苷compound K（C-K）的真菌,其中转化效率最高的1.91号真菌经形态学鉴定为卵形孢霉属（Oospora Wallr.）真菌。1.91号真菌生物转化人参皂苷Rb1和Rb2的途径分别为:Rb1→Rd→F2→C-K,Rb2→C-O→C-Y。1.91号真菌生物转化人参皂苷Rb1为C-K的最佳条件为:最佳底物添加时间是孢子预培养12h后,转化最适pH5.0～6.0,转化最适温度是45℃。本研究为稀有人参皂苷C-K的工业制备奠定了一定的基础。      

三七叶总皂苷酶解产物抗抑郁活性的评价

本文研究了三七叶总皂苷酶解产物EP-3的抗抑郁药效。采用强迫游泳、悬尾、获得性无助、利血平拮抗等行为模型以及甩头实验、奔跑实验、打斗实验进行评价。强迫游泳实验,EP-3可以使强迫游泳小鼠的不动时间缩短43.39~52.00%,具有明显的抗抑郁活性。获得性无助实验,EP-3能显著减少获得性无助小鼠的逃避失败次数,测定的第2 d EP-3给药组逃避失败次数减少了16.56~29.96%,测定的第3 d减少了20.06~35.28%,第4 d为29.63~62.82%,呈现出随给药时间延长,作用增强的特点。EP-3可以明显逆转利血平诱导的小鼠肛温下降和拮抗小鼠眼睑下垂,一定程度上缓解小鼠运动不能症状。此外,EP-3显著增加5-HTP诱导的小鼠甩头次数,减少可乐定诱导的小鼠打斗行为,提高L-Dopa诱导的小鼠奔跑速度。但是EP-3对悬尾实验小鼠的不动时间没有影响（P>0.05）。EP-3具有良好的抗抑郁作用,其作用机制可能与5-HT、NE和DA等单胺能神经递质或其受体有关。     

Manipulation of ginsenoside heterogeneity in cell cultures of Panax notoginseng by addition of jasmonates

Manipulation of the heterogeneity of ginsenosides with different pharmacological activities was attempted by adding methyl jasmonate (MJA) or dihydro-methyl jasmonate (HMJA) to suspension cultures of a high-saponin-producing cell line of Panax notoginseng. Compared with HMJA, MJA not only increased ginsenoside content to a large degree but also significantly altered the ratio of Rb to Rg groups of ginsenosides. The ginsenoside Rd was not detected in either control cultures (without MJA addition) or when HMJA was added, but interestingly was detected upon supplementation of MJA. By increasing the concentration of MJA added from 0 to 500 microM, the ratio of Rb to Rg groups also increased from 0.49+/-0.06 to 2.49+/-0.06 (on day 15). The cells exhibited their maximal ginsenoside content when 200 microM MJA was added. The maximal Rb1 content was 3.15+/-0.08 mg/100 mg DW (day 15), which was about ninefold that of the control. The maximal Rg1 and Re contents were 0.90+/-0.01 (day 12) and 0.80+/-0.01 (day 15) mg/100 mg DW, respectively, which were about twofold that of the control. The information obtained will be useful for the exploitation of the diversity of biopharmaceutical molecules and for the large-scale bioprocessing of heterogeneous products.     

酶法制取葡萄糖的工艺研究

随着现代精细工业的发展,葡萄糖作为基料的社会用量日益增大,用途日趋广泛,制取葡萄糖的工艺研究也成为国内外不间断的课题。本文采用酶法水解与目前先进的过滤、离子交换及蒸发浓缩等下游工程技术结合,研究葡萄糖加工的工艺条件与提高产品纯度和得率的实用技术。通过实验确定最佳工艺条件为：液化时,pH6．0～6．5,温度85℃,时间40min,α-淀粉酶用量0．3％,淀粉浆浓度30％;糖化时,pH4．2～4．5,温度60℃,时间48h,糖化酶用量0．6％。      

生物酶法合成单甘酯的研究进展

生物酶法合成单甘酯具有能耗低、产率高、产品安全性能高、反应时间短和无环境污染问题等优点。本文综述了生物酶法合成单甘酯的方法、反应体系和分离提纯方法,同时也介绍了单甘酯在食品中的应用,特别介绍了具有更好乳化性和抗菌性等特性的高含量不饱和脂肪酸单甘酯在食品中的应用。     

米胚芽酶法制备γ-氨基丁酸的研究

研究了利用米胚芽中的谷氨酸脱羧酶转化谷氨酸制备γ-氨基丁酸(GABA)的方法。在最佳的酶反应条件下,米胚芽谷氨酸脱羧酶可以将添加的谷氨酸全部转化为GABA,转化率达到100%,米胚芽中的GABA为20.6g/100g。     

微生物转化人参皂苷Re为人参皂苷Rh1的研究

人参皂苷Re是人参的主要药理活性成分,具有抑制癌细胞增长、阻止癌细胞转移及保护神经等重要生理作用,稀有人参皂苷Rh1在抗癌方面的疗效更为显著。为获得较高含量的Rh1,微生物转化是目前较为有效途径。该研究从人参种植土中筛选可转化常量人参皂苷Re为稀有人参皂苷Rh1的目的菌株S329,以西洋参提取物为反应底物进行微生物发酵实验,利用高效液相色谱（HPLC）法对人参皂苷Re及其发酵产物进行分析。结果表明,通过对菌株形态学观察和18S rDNA测序分析,且通过在NCBI数据库上的Blast比对分析,鉴定高效菌株S329属于溜曲霉（Aspergillus tamarii）,人参皂苷Re转化人参皂苷Rh1的转化率为27.65%。     

三七渣混菌发酵生产蛋白饲料的初步研究

本次研究考察了培养基制备条件对黑曲霉/产朊假丝酵母固态发酵三七渣生产蛋白饲料的影响,并采用正交试验对培养基制备条件进行了优化.研究结果表明,在培养基制备过程中,氮源添加量、水含量和粒径3个因素对发酵培养物中真蛋白含量影响较大;磷源添加量、pH值和Tween-80添加量3个因素对其影响不显著.三七渣需要进行粉碎过筛、适量的补充氮源和调整含水量等预处理后才适合作为固态发酵培养基使用,优化的三七渣培养基制备条件为采用经粉碎后过60目筛的三七渣,添加5％的硫酸铵,基质含水量70％,pH值自然.