酸浓度和pH值对浓香型大曲酯化酶催化活力的影响

研究了己酸、乳酸、丁酸、乙酸的浓度以及pH值对浓香型大曲酯化酶催化合成四种酯（己酸乙酯、乳酸乙酯、丁酸乙酯、乙酸乙酯）的影响。结果表明,大曲酯化酶催化合成四种酯的最适酸质量浓度分别为己酸8 g/L,乳酸1 g/L,丁酸9 g/L,乙酸12 g/L;在同一酸浓度条件下,大曲酯化酶催化合成己酸乙酯、丁酸乙酯、乙酸乙酯最适pH值均为4.5,乳酸乙酯最适pH值为6.0;大曲酯化酶催化相同物质的量浓度混合酸的试验结果表明,己酸乙酯的合成以酯化酶催化反应为主,而乳酸乙酯和丁酸乙酯的合成以化学反应为主。     

离子液体-甲苯溶剂体系中酶催化合成阿魏酰丁酸酯

以三丁酸甘油酯和阿魏酸乙酯为原料,采用酶催化方法合成阿魏酰丁酸酯,通过单因素实验和正交实验研究溶剂体系、脂肪酶种类、溶剂配比、底物(三丁酸甘油酯与阿魏酸乙酯)摩尔比、反应温度、反应时间对阿魏酰丁酸酯转化率的影响,优化反应条件。结果表明:合成阿魏酰丁酸酯的最佳反应条件为脂肪酶Novozym 435为催化剂,酶添加量50 mg/m L,[EMIM][TF2N]-甲苯溶剂体系,[EMIM][TF2N]与甲苯质量体积比1∶1,反应温度50℃,底物摩尔比3∶1,反应时间6 d。在最佳反应条件下,阿魏酰丁酸酯转化率达76.24%。     

响应曲面法优化非水相酶催化合成乳酸乙酯

应用南极假丝酵母脂肪酶B(Novozym 435)在非水相体系(叔丁醇)催化乳酸和乙醇合成乳酸乙酯,通过单因素实验考察了温度、摇床转速、酶添加量、乳酸浓度、酸醇摩尔比(乳酸:乙醇)等条件对乳酸乙酯产率的影响,进一步应用响应曲面法优化了乳酸浓度、酸醇摩尔比、酶浓度等因素,获得乳酸乙酯合成的最佳条件:乳酸含量0.42 mol/L、酸醇摩尔比1:6、酶浓度42 g/mol、温度为50℃、摇床转速为200 r/min,在此条件下乳酸乙酯的实际产率为70.21%±0.2%.     

黑曲霉脂肪酶tglE的基因克隆与生化特征解析

从黑曲霉基因组中克隆了一种新的脂肪酶基因tglE,并在毕赤酵母中成功表达。重组酶具有典型的脂肪酶活性,其最适pH为7. 0,最适温度为40℃;在30～60℃或pH 6. 5～9. 0该酶的酶活力保持在60%以上;在pH 6. 0～8. 0或20～30℃均较为稳定。Cu~(2+)、Mn~(2+)、Ca~(2+)、K~+、Mg~(2+)和Sn~(2+)对tgl E有明显的激活作用; Fe~(3+)、Zn~(2+)和EDTA对重组酶的酶活抑制作用明显,特别是EDTA可抑制重组酶90%的活。tgl E对橄榄油和C_4底物的作用最强,对棕果油和C16底物的作用最弱。以C_4为底物,tglE的Km值为14. 40 mmol/L,Vmax为46. 72mmol/(m L·h)。tgl E具有催化辛酸和乙醇生成辛酸乙酯的酯化活性。     

超临界酶法酯交换合成结构脂质中酶活力的研究

超临界酯交换合成结构脂质的反应中使用脂肪酶Lipozyme RM IM,不同的工艺条件对脂肪酶的催化活性会有影响.当反应温度为45℃,底物摩尔比(辛酸乙酯:鱼油)为15:1,酶用量为底物总量的10%,添加水量为酶量的30%,反应时间为11h,超临界CO2压力为12.5 MPa时,脂肪酶Lipozyme RM IM的催化效果最好,辛酸结合率在反应产物甘三酯中达最大值.肪脂酶Lipozyme RMIM在以上反应体系中重复使用17次,其酯交换活力降低50%.     

高乳酸乙酯酯化液的制备及其在调味酒生产中的应用

该研究利用筛选自老白干酒醅中的一株高产乳酸干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）发酵制得乳酸发酵液,通过南极假丝酵母（Candida antarctic）脂肪酶B催化乳酸发酵液与酒尾合成乳酸乙酯,并通过单因素试验和正交试验对其催化工艺进行优化,最后通过蒸馏浓缩得到乳酸乙酯调味酒。结果表明,乳酸乙酯合成最佳催化工艺为：酒精度40%vol的酒尾与乳酸发酵液体积比1∶1,pH值3.0,酯化酶添加量0.5%,反应温度30 ℃,反应时间21 d。在此最优催化工艺下,酯化液中乳酸乙酯含量达12.05 g/L。将其浓缩后得到乳酸乙酯含量为17.62 g/L的调味酒（酒精度45%vol）,其清澈透明,酯香突出,适用于勾调冬季或机械化生产中乳酸乙酯含量偏低的基酒,增加酯含量,提升酒的品质。     

黑曲霉脂肪酶Lip A的异源表达与酶学性质分析

脂肪酶在油脂分解和脂质合成方面具有广泛应用，是一种很有前途的生物催化剂。该研究对来源于黑曲霉的脂肪酶Lip A进行了异源表达及催化特性研究。结果表明，该重组脂肪酶的最适温度为50℃,最适pH为8.0,并且在40～60℃和pH 5.0～8.0有较好的稳定性。该酶对有机试剂有较好的耐受性，金属离子Ca²⁺和Mg²⁺对脂肪酶水解活性有促进作用，Fe³⁺、Zn²⁺和Cu²⁺严重抑制该酶活性。反应动力学参数表明，对硝基苯酚乙酸酯是脂肪酶Lip A的最适底物，其反应K_m为(0.228±0.05) mmol/L,催化常数K_cat为(0.023±0.001) s^-1。生物信息学分析表明，脂肪酶Lip A是abH23同源家族Rhizomucor mihei脂肪酶中的一员。黑曲霉脂肪酶Lip A具有催化乳酸和乙醇生成乳酸乙酯特性，为其在酿造领域的应用奠定了基础。     

黑曲霉脂肪酶tabI酶学性质及乳酸乙酯合成能力的研究

乳酸乙酯是白酒的重要风味物质。该研究通过转录组分析得到了在黑曲霉H7中基因转录水平较高且功能未知的新型脂肪酶基因tabI,并成功在大肠杆菌BL21（DE3）中异源表达。对其进行酶学性质解析可知,脂肪酶tabI在40℃、pH 8.0时表现出最高酶活力,以对硝基苯酚乙酸酯为底物测得该酶的K_m值为0.85 mmol/L,V_max值为63.75 mmol/（mL·h）。对脂肪酶tabI合成乳酸乙酯的条件进行了优化,反应12 h乳酸乙酯的合成量达210.24 mg/L,表明该酶具有合成乳酸乙酯的能力,此结果为乳酸乙酯脂肪酶的开发打下了基础。     

无溶剂体系酶促合成甘油中碳酸偏酯

根据中碳酸转化率的大小 ,对 5种不同来源的固定化脂肪酶筛选 ,其中固定化脂肪酶SSW的酶催化转化率最高 ,辛酸和癸酸转化率分别为 91.5 %和 93.5 % ;对脂肪酶SSW酶促合成甘油辛酸偏酯的反应条件优化 ,适宜反应条件为 :敞口反应器中反应温度 5 5℃ ,每克酸加酶量 10 0U/g ,辛酸 /甘油投料摩尔比 1∶1.1,甘油初始加水量 4 % (质量分数 ) .实验范围内中碳酸品种对脂肪酶SSW不显示基质特异性 .     

产脂肪酶菌株的筛选、酶学特性及其接种对酸肉风味物质的影响

从食品来源菌株中筛选出6株产脂肪酶菌株，其中1株表皮葡萄球菌N30(Staphylococcus epidermidis N30)和1株解脂耶氏酵母菌C11(Yarrowia lipolyticaC11)展示出较高酶活力，分别为1.07 U/mL和0.84 U/mL。对二者酶学性质进行考察，发现二者的脂肪酶最适反应温度为50℃，最适pH值为8.0。S. epidermidis N30的最适底物为C₄酯，而Y. lipolytica C11最适底物为C₈酯。采用S. epidermidis N30或Y. lipolytica C11对酸肉接种，结果表明二者的添加均可有效提升酸肉中风味物质的生成，尤其是如丁酸乙酯、己酸乙酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯、壬醛和1-辛烯-3-醇的含量，从而促进酸肉中果香、花香、酒香、蘑菇和脂香等香气的产生。