肠源性激素的分泌及其糖尿病干预研究进展

糖尿病是一种高血糖为临床特征的代谢紊乱慢病,近年来世界范围内罹患糖尿病的人数持续增加。糖尿病症状进一步发展会导致心血管疾病、心脏病、肾衰竭、视网膜病变等一系列并发症的产生。因此,以降低血糖、控制体重和预防胰岛素抵抗为目的的糖尿病管理变得尤为重要。目前临床上控制糖尿病的相关药物很多,如:磺酰脲类、α-糖苷酶抑制剂、噻唑烷二酮等,但是在控制糖尿病的同时,药物带来的毒副作用也不可忽视。科学家致力于找到一种无毒副作用的天然有效成分,具有控制体重、减低血脂、调节血糖水平、改善胰岛功能等功效。研究表明肠源性激素在调节糖脂代谢中发挥重要的作用,肠促胰岛素功能受损是糖尿病发病机制中的一个重要因素。在过去十几年中,基于肠促胰岛素的代谢干预作用,开发了一系列肠促胰岛素治疗药物。本文主要对营养素影响肠源性激素的分泌机制、对糖尿病的干预作用以及胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)促分泌物、二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)抑制剂在糖尿病干预中的研究进展进行了综述。     

高糖-氧化应激相关信号通路对各系统疾病的影响

高糖对机体健康具有较大影响.血糖浓度偏高会引起机体氧化应激,而信号通路调控紊乱是高糖引起氧化应激的主要原因之一.随着糖尿病患病率的持续增高,由高糖引起的相关疾病广受关注.目前有关高糖引起的氧化应激及其相关细胞信号通路在各系统疾病中的研究尚未见报道.本文从细胞类型出发,结合糖尿病及其相关并发症给机体不同系统带来的影响,对...     

金雀异黄素通过AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路缓解免疫抑制大鼠的疲劳作用

目的：探讨金雀异黄素（genistein,GEN）缓解免疫抑制大鼠的疲劳作用及其作用机制。方法：96 只雄性SD大鼠随机分为6 组（每组16 只）,分别为空白对照组、免疫抑制模型组与金雀异黄素低、中、高剂量组以及阳性对照组。除空白对照组外,其余组腹腔注射环磷酰胺40 mg/kg mb,连续3 d,建立免疫抑制大鼠模型。金雀异黄素低、中、高剂量组分别灌胃10、20、40 mg/kg mb金雀异黄素,阳性对照组灌胃贞芪扶正颗粒3.125 g/kg mb,空白对照组灌胃等量花生油。实验结束后,记录大鼠力竭游泳时间;采用比色法检测大鼠血清中肌酸激酶（creatine kinase,CK）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力;酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）质量浓度;采用实时荧光定量技术检测大鼠骨骼肌中腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）、沉默信息调节因子1（silent information regulator 1,SIRT1）、过氧化物酶增殖活化受体γ辅激活因子1α（peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator 1α,PGC-1α）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptor γ,PPARγ）mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测大鼠骨骼肌中p-AMPK、SIRT1、PGC-1α和PPARγ的蛋白表达水平。结果：与免疫抑制模型组相比,补充GEN后极显著延长了大鼠力竭游泳时间（P＜0.01）;与免疫抑制模型相比,高剂量GEN能够显著降低血清中CK活力（P＜0.05）和LDH活力（P＜0.01）,极显著提高大鼠血清中IgG、TNF-α质量浓度（P＜0.01）,同时显著提高大鼠骨骼肌中p-AMPK、SIRT1、PGC-1α和PPARγ基因及蛋白表达水平（P＜0.05、P＜0.01）。结论：GEN具有缓解免疫低下大鼠疲劳的作用,其机制可能与激活骨骼肌AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路及改善大鼠运动耐力、能量产生及免疫调节能力有关。     

食用菌功能活性蛋白通过TLRs信号通路的免疫调节作用研究进展

食用菌是含有多种生物活性物质的大型真菌,广泛分布于自然界中。许多研究表明,食用菌中的生物活性蛋白具有免疫调节、抗肿瘤、抗菌等功能,尤其是免疫调节活性备受关注。Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)信号通路能将细胞外的信号传递到免疫系统中,激活细胞内丝裂原活化蛋白激酶和核因子-κB信号通路。本文综述了食用菌中免疫调节蛋白、凝集素、核糖体失活蛋白、糖肽等生物活性蛋白通过TLRs信号通路调节机体免疫的作用机制,为深入了解食用菌活性蛋白的功能活性,开发食用真菌保健食品或药品提供参考。     

稳定表达甜味受体蛋白T1R2/T1R3的HEK293细胞系的建立

以小鼠舌组织为对象,提取总mRNA,并以此为模板,使用自行设计的引物通过RT-PCR扩增Gα15、T1R2和T1R3目的片段。构建重组质粒pEGFP-C1-Gα15、pDsRed1-N1-T1R2、pcDNATM6.2/N-YFP-DEST-T1R3。以脂质体介导的方法转染HEK293细胞,经抗性筛选后,通过极限稀释法获得稳定表达T1R2/T1R3的HEK293细胞系,最后通过RT-PCR,荧光显微镜及Western blot方法在基因及蛋白质水平上对建立的稳定表达细胞系进行鉴定。基因及蛋白质水平上的结果均表明,目的基因Gα15、T1R2/T1R3成功导入HEK293细胞中,并且稳定表达。该细胞系的建立为细胞水平上甜味机理的体外研究(如甜味识别热动力学等)提供了稳定的细胞来源。     

凝集素与TLRs信号通路的免疫调节作用

凝集素在自然界中分布广泛、种类众多,多种凝集素已经被分离提取出来。近年来,随着对凝集素研究的不断深入,凝集素的多种生物活性被发现。凝集素具有抗肿瘤、调节免疫、促进有丝分裂、抗病毒、抗病虫害等功能,尤其是抗肿瘤和调节免疫方面引起了学者们的广泛关注。Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)存在于免疫细胞表面,在免疫调节过程中发挥重要的作用。本文介绍凝集素、概述TLRs信号通路以及两者之间的免疫调节作用,为凝集素在免疫调节、保健品等方面的开发与利用提供参考。     

p-辛弗林通过激活AMPK-FoxO1信号通路抑制肝细胞葡萄糖生成

目的：探讨p-辛弗林对肝细胞葡萄糖生成的影响及其作用机制。方法：采用MTS法检测p-辛弗林对HepG2肝细胞株的细胞活力的影响,确定受试物的作用浓度后,比色法测定葡萄糖的生成、葡萄糖-6-磷酸酶（glucose-6-phosphatase,G6Pase）和磷酸烯醇丙酮酸羧基激酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK）活力,Western blot蛋白印迹法检测腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、乙酰辅酶A羧化酶（acetyl coenzyme A synthetase,ACC）、磷酸化ACC（p-ACC）、叉头框转录因子1（forkhead box class O1,FoxO1）以及磷酸化FoxO1（p-FoxO1）的表达;利用AMPK选择性抑制剂Compound C和AMPK siRNA作用HepG2肝细胞株后,检测p-辛弗林对HepG2肝细胞株葡萄糖的生成、G6Pase和PEPCK活力的影响。结果：p-辛弗林能剂量依赖性地抑制肝细胞葡萄糖的生成,激活AMPK信号通路,促进p-AMPK、p-ACC和p-FoxO1水平增加,极显著抑制G6Pase和PEPCK的活性（P＜0.01）。p-辛弗林的这些影响部分地被Compound C和AMPK siRNA所抑制（P＜0.01）。结论：p-辛弗林能够通过激活AMPK-FoxO1信号通路抑制肝细胞葡萄糖生成。     

果蔬中多酚类化合物双向调控Nrf2/Keap1信号通路的研究进展

果蔬中含有丰富的多酚类化合物,其含有的酚羟基中邻位酚羟基极易被氧化,有较强捕捉活性氧等自由 基的能力,因此能够清除自由基和淬灭活性氧。Nrf2（NF-E2-related factor 2）信号通路是增强机体抗氧化功能最 重要的保护性信号途径,在细胞抵御氧化应激机制中有着重要的地位,是抗氧化研究领域的热点。本文通过阐述 Nrf2/Keap1（Kelch-like ECH-associated protein 1）信号通路及其调节方式,讨论Nrf2在肿瘤化学预防和促进癌症发 生中的双重作用,重点介绍和归纳了果蔬中几种典型的多酚类物质对Nrf2/Keap1信号通路双向调控作用的分子机 制,以期为利用果蔬多酚开发健康绿色食品和药品提供一定的理论依据。     

益生菌混合物通过抑制NF-κB信号通路发挥抗溃疡性结肠炎功效的研究

本文从NF-κB信号通路出发,探讨益生菌混合物对人工诱发溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用,为治疗人类肠炎提供一种安全可靠的方法。给予溃疡性结肠炎小鼠一定剂量的益生菌混合物,通过Western-blotting、ELISA实验法,分别测定小鼠组织及血清中关键标志物中的表达水平。结果表明:与肠炎空白组小鼠相比,益生菌联合疗法使UC小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低（p<0.05）,并降低NF-κB的蛋白表达,增加IκB的蛋白表达。益生菌混合物通过抑制NF-κB信号通路的活化从而发挥抗溃疡性结肠炎功效,益生菌混合物抑制了NF-κB与IκB的分离,阻塞游离的NF-κB进入细胞核,从而无法调控IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性细胞因子的表达,最终抑制机体过度的活化。益生菌混合物对溃疡性结肠炎具有较好的治疗作用,具有应用于临床医学的潜力。      

萝卜硫素通过抑制PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬减轻力竭运动诱导的骨骼肌损伤和疲劳

目的 评价萝卜硫素（SFN）对力竭运动所致小鼠骨骼肌损伤和疲劳的影响。方法 将60只雄性昆明小鼠随机分成对照组（Control）、力竭运动组（EE）、SFN低剂量组（SFN-L,20 mg/kg/d）、SFN中剂量组（SFN-M,40 mg/kg/d）和SFN高剂量组（SFN-H,60 mg/kg/d）,每组12只。共给药4周,然后进行力竭运动。测定各组小鼠肌酸激酶（CK）、乳酸（LA）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）水平。苏木精-伊红染色观察组织病理学改变。透射电镜观察线粒体超微结构。通过测定柠檬酸合成酶（CS）、琥珀酸脱氢酶（SDH）及肝脏和股四头肌糖原含量来评估能量水平。用RT-qPCR和Western blot检测骨骼肌中与线粒体自噬相关的mRNA和蛋白表达水平。结果 与EE组相比,SFN-L组、SFN-M组和SFN-H组的CK、LA、LDH和MDA水平显著降低,而SOD和CAT活性显著升高（P<0.05）。SFN明显减轻了EE小鼠的骨骼肌损伤并改善了线粒体形态。与EE组相比,SFN-L组、SFN-M组和SFN-H组的肝糖原和肌糖原含量、CS表达和SDH活性显著升高（P<0.05）。与EE组相比,SFN-L组、SFN-M组和SFN-H组小鼠股四头肌组织中PINK1、Parkin、Lc3-Ⅱ、p62和ubiquitin的蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与EE组相比,SFN-L组、SFN-M组和SFN-H组小鼠股四头肌组织中PINK1和Parkin的mRNA表达水平显著降低（P<0.05）。结论 SFN通过抑制PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬来发挥抗疲劳作用。     

海参废渣皂苷通过核苷酸结合寡聚化结构域样受体信号通路抵抗环磷酰胺诱导小鼠的免疫抑制

在我国海参是一种具有多种生物活性的传统滋补品。本实验系统性地研究了2.5、5.0、10.0 mg/（kg mb·d）海参废渣皂苷（saponins extracted from sea cucumber residues,SCRSS）对免疫抑制小鼠的调节作用。结果表明,与模型对照组相比,5.0 mg/（kg mb·d）SCRSS使小鼠的体质量、脾脏指数和胸腺指数分别增加了15.3%、23.8%和39.8%;5.0 mg/（kg mb·d）SCRSS也极显著增加了免疫抑制小鼠的吞噬指数（P＜0.01）。此外,与模型对照组相比,各剂量SCRSS均明显地增加了血清中细胞因子的水平,并促进了脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的增殖活性。其中,中等剂量（5.0 mg/（kg mb·d））SCRSS可以更有效地上调免疫抑制小鼠核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1、核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2、受体相互作用蛋白-2和核因子-κB的表达。结论：SCRSS具有作为提高免疫力的功能性食品补充剂的潜力。     

香叶木素保护对乙酰氨基酚诱发的急性肝损伤

为探究香叶木素对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝脏损的保护作用及机制,体外实验人非肿瘤性肝细胞LO2设置空白组及不同浓度香叶木素(Dios)预处理组处理6 h后,给予APAP(10 mM)孵育24 h。体内实验40只C57BL/6 J小鼠随机分为正常组、APAP组、Dios 30 mg/kg和Dios 60 mg/kg剂量组。每组10只,Dios组小鼠给予不同剂量的Dios灌胃1次,连续7 d。实验末期,除正常组其余各组给予APAP300mg/kg建立急性肝损伤模型,测定小鼠血清ALT、AST;肝GSH、MDA水平;HE染色;Westernblot法检测Nrf2的表达;PCR检测m Nqo1,m G6pdx,m SOD2的表达。结果表明在LO2细胞中,与APAP组相比,Dios预处理组可以恢复细胞活力和GSH含量。高剂量组可以明显降低小鼠血清ALT、AST水平,下调肝组织MDA表达并提高GSH含量,进而诱导Nrf2转位入核,其下游相关基因Nqo1、G6pdx、SOD2也显著上升。高剂量组可保护APAP引起的急性肝损伤,并且该保护作用与激活抗氧化应激Nrf2/ARE信号通路有关。     

姜黄素调节Na/K-ATPase/Src信号通路保护LLC-PK1细胞缺氧复氧损伤

目的:阐明姜黄素作为Na/K-ATPase (NKA)不完全促进剂,通过影响NKA/类固醇受体辅助活化因子(steroid receptor coactivator,Src)受体复合物的活化保护细胞免于缺氧复氧损伤.方法:通过酶筛选实验明确姜黄素对NKA活性和构型的影响,利用缺氧复氧模型模拟细胞氧化应激损伤.姜黄素预保...     

海参皂苷Echinoside A通过uPA信号通路抑制高转移95D细胞转移

研究海参皂苷Echinoside A对高转移人肺巨细胞癌95D细胞增殖和转移的影响及其分子机制。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测Echinoside A对95D细胞生长的影响;采用Transwell实验、黏附实验评价Echinoside A抗95D细胞转移活性;采用鸡胚尿囊膜（chicken chorioallantoic membrane,CAM）实验评价Echinoside A抗血管新生活性;采用逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测95D细胞转移相关基因和蛋白的表达。结果表明,Echinoside A能显著降低95D细胞增殖（P＜0.01）、侵袭（P＜0.01）、迁移（P＜0.01）以及黏附能力（P＜0.01）;还能显著抑制CAM上的血管新生。Echinoside A能显著降低尿激酶型纤溶酶原激活剂（urokinaseplasminogen activator,uPA）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMP）-2、MMP-9 mRNA的表达,显著上调金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP）-1、TIMP-2 mRNA的表达,同时在基因和蛋白水平显著下调血管内皮生长因子的表达。提示Echinoside A可通过调控uPA信号通路,保护细胞外基质结构,从而抑制95D细胞转移。     

余甘子对对乙酰氨基酚(APAP)诱发的肝损伤的保护机制研究

采用体外细胞实验和体内动物实验研究余甘子提取物(PLE)对对乙酰氨基酚(APAP)诱发的的肝损伤的保护效果和相关作用机制。检测了小鼠血清中的谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平、肝匀浆谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平、肝组织病理检测;Westem blot检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2)的表达;PCR检测m Nqo1、mG6pdx、mSOD2的表达。肝细胞HepG2实验表明,PLE组与APAP组相比,经过PLE处理的肝细胞可以保持较高的细胞活力及GSH含量,PLE处理组GSH的含量也显著提高至16.91±4.34和25.19±1.33μmol/mg。动物实验表明PLE含量越高可以将ALT、AST水平降低越明显,PLE处理组血清ALT和AST分别为263.7±87.1IU/L,188.4±45.9 IU/L和640.9±224.6 IU/L,155.9±50.6 IU/L,不仅可以降低肝细胞MDA表达并且可以提高GHS含量,并使Nrf2转位入核,下游相关基因mNqo1、mG6pdx、mSOD2的表达也明显上升。总之高浓度的PLE可以针对APAP引起的肝损伤对肝组织进行保护,该保护作用可能与激活抗氧化应激Nrf2/ARE信号通路有关。     

人参皂苷F2通过PI3K/Akt途径改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗

该研究探讨了人参皂苷F2对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及其机制。将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,用1 μmol/L地塞米松处理48 h,建立胰岛素抵抗模型。用10 μmol/L的罗格列酮（阳性对照）和25、50、100 μmol/L人参皂苷F2处理胰岛素抵抗细胞12 h,检测细胞对2-NBDG的摄取。实验结束后用RT-qPCR检测各组细胞中葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4）和胰岛素底物受体1（IRS-1）mRNA相对表达量,并利用Western blot检测PI3K/Akt信号通路中蛋白表达及其磷酸化水平。结果表明：与模型组相比,25、50、100 μmol/L人参皂苷F2均能促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞对2-NBDG的摄取,分别增加了12.58%、29.07%和34.62%（p<0.05）;人参皂苷F2作用12 h后,GLUT-4和IRS-1 mRNA相对表达量以及PI3K、Akt的磷酸化水平显著提高（p<0.01）。该研究表明人参皂苷F2可通过促进胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中GLUT-4和IRS-1mRNA相对表达,增加PI3K和Akt蛋白磷酸化,从而激活PI3K/Akt信号通路,改善其糖代谢和胰岛素抵抗。