硅胶固定化胰蛋白酶的工艺及特性研究

以硅胶为载体,戊二醛为交联剂,进行了胰蛋白酶固定化的研究.以光度比色法测定蛋白酶活力为指标,优化了戊二醛浓度、pH和酶用量等固定化参数,研究了固定化酶的基本特性、最适作用温度和pH及其对酪蛋白的酶解.结果表明:经优化,制备功能化载体的戊二醛最适浓度为1%,固定化pH为8.0,酶与载体比例为50mg/g.固定化胰蛋白酶比活力为4.89×105U/g,最适作用温度和pH范围分别为60℃和6.0～10.0.50℃水解酪蛋白,水解60min,重复使用8次,回收酶活力约为90%.     

硅胶固定化胰蛋白酶的工艺及特性研究

以硅胶为载体,戊二醛为交联剂,进行了胰蛋白酶固定化的研究。以光度比色法测定蛋白酶活力为指标,优化了戊二醛浓度、pH和酶用量等固定化参数,研究了固定化酶的基本特性、最适作用温度和pH及其对酪蛋白的酶解。结果表明:经优化,制备功能化载体的戊二醛最适浓度为1%,固定化pH为8·0,酶与载体比例为50mg/g。固定化胰蛋白酶比活力为4·89×105U/g,最适作用温度和pH范围分别为60℃和6·0～10·0。50℃水解酪蛋白,水解60min,重复使用8次,回收酶活力约为90%。      

壳聚糖膜固定化葡萄糖氧化酶的特性研究

研究了以壳聚糖膜为载体、戊二醛为交联剂的固定化葡萄糖氧化酶的特性。结果表明：固定化酶、溶液酶的最适pH均为5．5；固定化酶、溶液酶的最适温度分别为40℃，35℃；固定化酶的Km值为12．16mmol／L，溶液酶的Km值为20．86mmol/L；固定化酶比溶液酶更耐热，且贮藏稳定性及操作稳定性也有所提高；该固定化酶重复使用率较高。     

几丁质固定化无花果蛋白酶的研究

载体几丁质通过甲酸和戊二醛活化共价偶联无花果蛋白酶，固定化反应在给酶量为１．０ｍｇ／ｇ载体，ｐＨ７．５，４℃进行１５ｈ。制备的固定化酶表观Ｋｍ值（酪蛋白）为０．９５ｍｇ／ｍｌ，溶液酶的Ｋｍ值为０．３８ｍｇ／ｍｌ，固定化酶的最适ｐＨ范围变宽，由溶液酶的最适ｐＨ７．５－７．８变为在ｐＨ６－８范围内酶活性保持稳定；固定化酶的最适温度由溶液酶的６０℃变为３７℃。重复水解酪蛋白７次后，固定化酶保持原酶活性５     

海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊二步法固定化β-葡萄糖苷酶的制备

以二步法制备的ACA微胶囊为载体,对β-葡萄糖苷酶进行固定化,以固定化β-葡萄糖苷酶的酶比活力和酶的稳定性为考查指标,对影响二步法制备固定化β-葡萄糖苷酶的各因素及其性质进行了探讨。ACA微胶囊二步法固定β-葡萄糖苷酶的优化条件是:3.5%海藻酸钠溶解0.15g酶,逐滴滴入到2%的CaCl2溶液中引发25min,所形成微球先在0.4%壳聚糖(0.5%(v/v)醋酸溶解)溶液中进行成膜反应,再在0.2%海藻酸钠进行覆膜反应,然后用1%戊二醛交联4h(4℃)。用上述最适条件制备固定化酶,总酶活的回收率为68.3%。4℃下贮藏,固定化β-葡萄糖苷酶的酶活力在一个月内保持稳定,重复使用3次后其活力仍保持在原来的80%以上。固定化酶反应的最适温度是60℃,最适pH是4.6。     

介孔分子筛SBA-15固定糖化酶的研究

以介孔分子筛SBA-15为载体,戊二醛为交联剂,对糖化酶进行了固定化.考察固定化温度、时间、给酶量、pH值以及戊二醛浓度等因素对固定化效果的影响,并对固定化酶的酶学性质进行了研究.结果表明,糖化酶最佳固定化条件是:酶与载体比例50mg/g、固定化温度25℃、固定化时间4h、pH 5.1、戊二醛体积分数7.5%,此条件下固定化酶活力回收率为56%.固定化酶的最适作用温度为70℃,比游离酶高10℃.最适作用pH 4.1,比游离酶降低0.5个单位.米氏常数Km由原来的0.032mol/L降为0.022mol/L.用超声波对固定化酶进行处理,其酶活力提高了18%.所得最佳超声参数是:超声功率100W,温度70℃,时间5min.     

海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微胶囊二步法固定化β-葡萄糖苷酶的制备

以二步法制备的ACA微胶囊为载体,对β-葡萄糖苷酶进行固定化,以固定化β-葡萄糖苷酶的酶比活力和酶的稳定性为考查指标,对影响二步法制备固定化β-葡萄糖苷酶的各因素及其性质进行了探讨。ACA微胶囊二步法固定β-葡萄糖苷酶的优化条件是:3.5%海藻酸钠溶解0.15g酶,逐滴滴入到2%的CaCl2溶液中引发25min,所形成微球先在0.4%壳聚糖（0.5%（v/v）醋酸溶解）溶液中进行成膜反应,再在0.2%海藻酸钠进行覆膜反应,然后用1%戊二醛交联4h（4℃）。用上述最适条件制备固定化酶,总酶活的回收率为68.3%。4℃下贮藏,固定化β-葡萄糖苷酶的酶活力在一个月内保持稳定,重复使用3次后其活力仍保持在原来的80%以上。固定化酶反应的最适温度是60℃,最适pH是4.6。      

均相壳聚糖固定化磷脂酶A1(PLA1)的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、酶液,三者均相反应,固定化磷脂酶A1,对它的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究。固定化最佳条件,以脱乙酰度为92.8%,平均分子量为7.84×105,戊二醛浓度为3%缩合后,在0.5mg/100mL酶、pH6.0、25mmol/L CaCl2、4℃条件下固定化酶,酶活力回收可达59%。固定化酶最适温度60℃、最适pH值8.0,Km=9.08mmol/L。     

均相壳聚糖固定化磷脂酶A1(PLA1)的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、酶液,三者均相反应,固定化磷脂酶A1,对它的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究.固定化最佳条件,以脱乙酰度为92.8%,平均分子量为7.84×10 5,戊二醛浓度为3%缩合后,在0.5mg/100mL酶、pH6.0、25mmol/L CaCl2、4℃条件下固定化酶,酶活力回收可达59%.固定化酶最适温度60℃、最适pH值8.0,Km=9.08μmol/L.     

明胶固定化果胶酶的制备及酶学性质研究

以明胶为载体、戊二醛作为交联剂制备固定化果胶酶，对其固定化条件和酶学性质进行了研究。结果表明：以15％明胶为载体、5％戊二醛为交联剂、1g明胶固定果胶酶4mg制备的固定化酶，其酶活力回收率达45．85％：固定化酶的最适温度55℃，最适pH3．4，Km^app值3．48mg／ml；固定化酶的酸碱稳定性与温度稳定性均得到提高，连续使用7次后固定化酶相对活力还剩下47．06％。     

壳聚精固定胰蛋白酶的研究

以自制壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂将胰蛋白酶固定化。5％戊二醛在30℃下处理载体8h,加10ml酶液（0．3mg／ml,pH7．0）固定12h以上,活力回收率达67％－75％。固定化酶的表观米氏常数（酪蛋白）k’m=22．22mg／ml,而游离酶k’m=4.17mg／ml;固定化酶最适温度为80℃,比游离酶提高了30℃;固定化最适pH值为7．5,而游离酶为8．0;固定化酶的贮存稳定性很好,二个多月重复使用,酶活力未见明显下降。     

固定化碱性蛋白酶制备麦胚降血压肽研究

采用中空壳聚糖作为载体,通过双功能试剂戊二醛作偶联剂,将碱性蛋白酶连接到中空壳聚糖,制备固定化碱性蛋白酶。研究固定化碱性蛋白酶的部分性质及水解麦胚蛋白质条件。实验结果显示,1.5% 戊二醛溶液活化的壳聚糖偶联1mg 碱性蛋白酶,酶催化相对活性可达90%;固定化酶最适pH 值为9.5,最适反应温度约65℃,催化水解麦胚蛋白质的水解率达16.5% 约需10min;固定化酶与麦胚蛋白质的比达到1:5 时,一次性获取含降血压肽水解物质的得率为15.6%。     

膨化大豆纤维固定化AS1.398中性蛋白酶

以膨化大豆纤维为载体，采用吸附-交联法固定化AS1.398中性蛋白酶，酶活力回收率为45%，固定化容量为182mg蛋白酶/g载体，比活力为900U/mg，与自由酶相比较有显著提高，固定化酶的最适pH由7.0碱移至7.5，最适温度由原酶的50℃拓宽至50-65℃，固定化酶与底物的亲和力较自由酶有所下降 ，米氏常数由自由酶的0.06%变为0.1%酪蛋白，固定化酶的酸碱稳定性和热稳定性与自由酶相比均有较大幅度的提高。     

几丁质固定化壳聚糖酶的研究

以几丁质为载体,戊二醛为交联剂,固定壳聚糖酶,对壳聚糖酶的固定化条件、固定化酶的性质进行了研究,确定了酶固定的最佳条件为0.1克几丁质与5ml5%戊二醛交联,固定2mg壳聚糖酶,在此条件下酶活力回收可达70％。固定化酶的最适温度和pH分别为60℃和4.0,动力学参数Km值为17.66g/L。将固定化酶于70℃水浴保温150min,酶活力未见明显下降。该固定化酶具有良好的操作和保存稳定性。     

果胶酶在磁性复合载体上的固定化及其酶学性质

通过Fe3O4磁核与海藻酸钠明胶制备磁性复合载体,戊二醛交联后协同对果胶酶进行固定化,并研究固定化酶的酶学性质。利用正交实验优化固定化酶的制备条件,比较研究了固定化酶与溶液酶的酶学性质。结果表明:在Fe2+（5mol/L）∶Fe3+（5mol/L）体积比为0.75∶1的溶液中,制备Fe3O4磁核;3.5%海藻酸钠与3.0%明胶以2.5∶1的体积比,加入3.0mg/m L Fe3O4磁核量,在体积分数4.0%的戊二醛中交联2.5h;以每克载体加入20mg果胶酶,p H4.0下固定60min,制备的固定化果胶酶活力回收率可达78.69%。固定化果胶酶最适p H为4.0,在p H3.0⁷.0内稳定;最适温度50℃,在20⁵0℃具有较好的热稳定性;表观米氏常数Kmapp为3.162mg/m L;重复使用10次后,酶活力还剩51%,4℃下储存10d,酶活力还保留81%。说明以戊二醛交联磁性海藻酸钠明胶为复合载体制备的固定化果胶酶,机械强度大、弹性好,酶活力回收率高,操作稳定性好。      

交联壳聚糖载体固定化柚苷酶工艺

以戊二醛为交联剂,壳聚糖为载体,采用交联-吸附偶联法固定柚苷酶,通过单因素和正交试验优化确定最佳固定化工艺。结果表明,柚苷酶的最佳固定化条件为：以质量浓度为3.5g/100mL的壳聚糖制备的凝胶微球为载体,凝结剂NaOH质量浓度1.0g/100mL、戊二醛体积分数7.0%、交联时间2.0h、pH 4.0、酶液质量浓度2.0mg/mL、25℃时吸附交联3.0h,得到固定化酶最高酶比活力为7.37U/g;与游离酶相比而言,固定化酶最适pH值与最适反应温度均无明显变化;固定化酶在不同温度(40、50、60℃)条件下重复使用7次,相对酶活力仍能保持在70%、60%和50%以上。     

壳聚糖微球固定化葡萄糖氧化酶的研究

以壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂,固定葡萄糖氧化酶,对葡萄糖氧化酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了酶固定的最佳条件为0.1g壳聚糖微球与5ml5%戊二醛交联,固定6mg葡萄糖氧化酶,在此条件下酶活力回收可达60%。固定化酶的最适温度为50℃,最适pH为6.0,通过Lineweaver-Burk作图,确定动力学参数Km值为18.3mmol/L,表观米氏常数较游离酶有所降低,固定化酶的热稳定性较游离酶明显提高,该固定化酶具有良好的操作及保存稳定性。     

磁性复合载体固定生姜蛋白酶的酶学性质研究

文章采用海藻酸钠与明胶为载体,对磁性Fe3O4进行包埋,使其形成磁性复合载体凝胶微球,经戊二醛交联后,固定生姜蛋白酶,得到磁性复合载体固定生姜蛋白酶;在预实验的基础上,确定影响制备固定化生姜蛋白酶的主要因素;并研究在最优条件下,固定化生姜蛋白酶与其游离酶的酶学性质。结果表明:磁性复合载体固定化生姜蛋白酶的酸碱稳定性范围为pH 3.0～7.0,在20～60℃内具有较好的抗热性,其最适pH为4.0,温度为50℃,表观米氏常数Kmapp为3.162 mg/mL;在此条件下固定60min,制备的固定化生姜蛋白酶剩余酶活力可达78.69%。重复使用10次后,酶活力剩余53%;在4℃下储存10d,酶活力仍保留50.66%。说明在最优工艺条件下所制备的固定化酶机械强度大,弹性好,操作稳定性强,酶活力回收率高。     

壳聚糖固定化绿豆乳糖酶的特性及应用的初步研究

以壳聚糖凝胶颗粒为载体,采用共价键偶联法固定绿豆乳糖酶,研究壳聚糖固定化绿豆乳糖酶的酶学性质并对其进行水解牛乳中乳糖的初步应用研究。结果表明：固定化酶的热稳定性在4～55℃范围内;最适温度60℃;最适pH3.5;固定化酶的表观米氏常数Km 为0.04%,溶液酶米氏常数Km 为0.33%,是溶液酶米氏常数Km 的0.12 倍;固定化酶的操作半衰期为30d,较溶液酶长。用固定化酶制备填充床式反应器水解牛奶中乳糖,水解率可达60% 以上。     

壳聚糖固定β-半乳糖苷酶的研究

以壳聚糖微球为载体，戊二醛为交联剂，固定β-半乳糖苷酶，对β-半乳糖苷酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究，确定了酶固定的最适条件为：用pH6．5的P—E-M缓冲液浸泡10h，25℃壳聚糖微球与0．5％戊二醛交联12h以上，4℃下酶与壳聚塘微球固定12h以上酶活力回收可迭67％。固定化酶的最适温度为40℃左右，最适pH7．0。通过双倒数求回归方程，求得动力学参数Km值为0．613μmol／ml。固定化酶稳定性好，可以重复使用。