十二指肠上皮细胞的亚显微结构

本文以健康家兔十二指肠为实验材料,在超薄切片透射电镜观察的基础上,采用冷冻蚀刻技术对十二指肠上皮细胞的亚显微结构及其膜表面特化结构,进行观察分析。实验方法取新鲜材料,经4％戊二醛和1％锇酸双固定后,为了提高样品的反差和较好地显示细胞的膜结构,将样品放入1％单宁酸浸泡60分钟,尔后再用丙酮逐级脱水,EPON812包埋,超薄切片后送H—500电镜观察。冷冻蚀刻样品,系用HFZ—1型冷冻蚀刻装置,按常规操作步骤制备复型膜。     

心肌纤维的ODO高分辨扫描电镜观察

本文采用ODO高分辨扫描样品制备技术,观察了小白鼠、大白鼠和犬心肌纤维表面及断面的微细结构,并讨论了高分辨扫描电镜观察法的技术特点,分析了心肌纤维的超微结构及其与功能之间的关系。技术方法按常规取材、将样品修成梭形,放入1％锇酸中固定1～2小时;继以1/15M磷酸缓冲液清洗,用25％、50％的二甲基亚砜分别浸泡20分钟,并在TF-2型冷冻割断台上将样品割断;尔后,用1％锇酸对样品作后固定,0.1％锇酸软化细胞基质,再以1～2％单宁酸对样品作导电处理,用1％锇酸对样品进行终末固定;最后,对其进行脱水、干燥、镀膜处理后,用扫描电镜观察。     

免疫金法与ABC法在电镜包埋前染色之比较

包埋后免疫电镜术虽能精确定位抗原,但难度大。本文用胶体金标记法与ABC法对人鼻中线恶网瘤组织在树脂包埋前作抗人T细胞免疫染色,并对两种方法进行比较。简述如下:临床活检鼻中线恶网组织,经4％多聚甲醛加1％戊二醛4℃固定,振动切片(50μm),PBS冲洗,在预先硅化的载玻片上作免疫染色:鼠抗人T细胞McAb(Dako公司出品)孵育过夜;金标羊抗鼠抗体(10nm,军科院基础所出品)室温下孵育1小时,再将切片倾入小瓶,经1％锇酸后固定,常规脱水包埋及超薄切片,不作铀铅复     

耳蜗透射电镜超薄切片样品的制备技术改进

针对耳蜗组织透射电镜样品制备难度大,不易获得质量较好的超薄切片的问题,作者通过延长锇酸后固定时间和增加树脂渗透的浓度,改善了树脂包埋组织的切割性能.电镜图片显示,明显地提高了超微切片样品制备质量.     

低温引起橡胶叶绿体变化及种间差异

原产于南美洲亚马逊河地区热带作物橡胶,在我区由于冬季寒潮的影响仅限于几个地区种植成功,然而在异常年份仍有受害的可能。因此选育抗寒品种是一项重要课题,本实验通过对几个不同抗寒种因低温引起叶绿体变化及差异的电镜观察,研究探讨其抗寒关系。材料与方法:由广西橡胶所选育并提供的桂研73—165,桂研93—114等品种和产于亚马逊河原种马研600。于12月上旬寒潮来前采回嫩绿枝条,分别在低温处理前和经4℃12小时回暖至25℃12小时处理后取茎表皮层组织,用3％戌二醛室温固定1小时,1％锇酸室温固定90分钟,丙酮逐级脱水,Epon812包埋,LKBⅢ超薄切片,铀和铅双染色,在DXA_4—10型电镜下观察。     

精索静脉曲张不育者精子的超薄切片和冷冻蚀刻的电镜观察

精索静脉曲张影响精子发生和精液质量,导致男性不育。为探讨不育的原因,本实验采用超薄切片和冷冻蚀刻复型膜的电镜观察。材料和方法:两例青年男性不育者,年龄为29岁,31岁,婚后三年不育,有双侧中度精索静脉曲张。超薄切片制备:2.5％二醛,1％锇酸双固定,酒精脱水,环氧树脂812包埋,超薄切片厚度500埃左右,铀、铅双染色。冷冻蚀刻复型膜制备:新鲜精液固定于2.5％戊二醛,经30％甘油生理盐水处理12小时,BAF—400D高真空冷冻蚀刻仪制成复型膜,电镜观察。观察结果:超薄切片:精索静脉曲张患者精液内可见头帽期和顶体期精子细胞,且形态异常,如顶体扩张,细胞核染色质松散,核内出现大空腔。发育成熟的精子头畸形,中段线粒体排列紊乱等。冷冻蚀刻复型膜:患者     

哮喘豚鼠支气管超微结构变化特征研究

为了更好地了解哮喘超微形态结构特征 ,我们对豚鼠哮喘模型的超微结构作一些电镜观察研究 ,对其超微结构特征作一些阐述。材料和方法取 1 0只体重 30 0～ 5 0 0 g的健康豚鼠 ,雌雄个半 ,随机分组 ,分成哮喘组和正常组 ,每组 5只。按徐叔云方法[1] 致豚鼠哮喘 ,哮喘诱发成功后 2 4～ 48小时 ,用 2 .5 %戊二醛活体插管灌注豚鼠肺部 ,最后完全杀死两组豚鼠 ,取出肺 ,在左右叶肺中 ,取不同部位 ,直径约为 0 .5～ 2 .0 mm的支气管 ,2 .5 %戊二醛和 1 %锇酸双固定 ,常规电镜包埋、切片 ,H- 6 0 0 A型透射电镜观察。结果和讨论电镜观察正常组豚鼠…     

骨髓活检组织超薄切片及细胞化学技术的研究

本文对骨髓异常增生综合症患者的骨髓活检组织,作了环氧树酯包埋前染色的电镜观察,现将此技术方法的初步体会报导如下:取材用骨髓活检针钻取髂后上嵴骨髓组织(5mm×1mm)一块,迅速投入1％戊二醛内(用0.1M二甲胂酸缓冲液pH7.2～7.4配制)。固定将活检组织切成1mm×1mm小块,再放入1.0％戊二醛内固定15分钟,同上的缓冲液清洗3次,每次10分钟。标本分作2份,1份用2.5％的戊二醛继续固定2小时,同上的缓冲液清洗3次后,再用1％O_sO_4(0.2M二甲胂酸缓冲液配制)固定1小时,留作常规超微结构标本制备用。另一份放入0.1M二甲胂酸缓冲液内留作     

应用电镜X射线显微分析法研究缺血骨骼肌细胞内钙的分布

有些病理学家认为,缺血心肌细胞内变性线粒体基质中的深色绒球样结构是钙沉积的结果。但不少人持不同意见。我们应用电镜观察缺血骨骼肌细胞的超微结构同时测定钙元素的分布,以阐明钙在变性坏死细胞内沉积的部位。材料和方法:游离兔背阔肌和阻断胸背动脉造成局部缺血。实验分两组:暂时性缺血,在阻断血供3、4或6小时后,恢复血供48小时;持续性在体缺血,阻断血供48小时,且不恢复血供,背阔肌样品取出后用戊二醛和锇酸双固定,环氧树脂618包埋,H—500型电镜观察和PHILIPS EM400分析电镜作X射线能谱分析。     

用常规透射电镜观察半薄切片——铀—铅—铜浸染技术的应用

在常规透射电镜中,超薄切片的厚度一般不超过0.1微米,否则就看不清样品的细节。但是,使用特殊的标本本浸染方法,选择性地对某些细胞结构染色,就可以在一般透射电镜下观察半薄切片。本实验采用铀—铅—铜浸染技术,选择性地染色一部分细胞器,在75—100KV透射电镜下观察0.25—0.5微米的半薄切片。结果表明,这一技术在超微结构研究中有一定实用意义。实验方法:用2％戊二醛灌注大鼠,取肝、肾、十二指肠和睾丸等组织,切成1立方毫米小块。组织块经缓冲液漂洗后,在42℃下先放入5％醋酸铀水溶液(PH3.5)浸染1小时,再在硝酸铅—硫酸铜—枸椽酸钠溶液中浸染1小时,然后在4℃下用1％饿酸后固定12小时、常规环氧树脂包埋,最后将组织块切成0.25—0.5微米半薄切片,在透射电镜下观察。     

马尾松种子劣变中超微结构的电镜观察

马尾松是我国主要造林树种之一,其种子在室内挂藏时会发生老化劣变。劣变种子生理生化的变化与胚根尖细胞的超微结构变化相关。我们对种子胚根尖细胞的超微结构进行电子显微研究,以掌握劣变原因,选择科学的贮藏方法。供测种子产自浙江天台,一组为低温密闭贮藏(5—3℃冰箱中),一组室温密闭贮藏,另一组为室内挂藏。贮藏二年后测定发芽率等。选用高活力和劣变的种子作电镜观察,经吸胀萌发后切下胚根尖,2.5％戊二醛前固定4小时,1％锇酸后固定3小时,包埋,切片后镜检。据测定低温密闭贮藏种子活力最高,室内挂藏种子活力最低,严重劣变。电镜下可见高活力种子胚根尖细胞     

淡水藻类扫描电镜样品制备法

游离单细胞藻类形态结构的扫描电镜观察存在着样品支持膜的制备、细胞均匀分布,牢固贴附、防止细胞变形等问题。国内外对游离血细胞、各种培养细胞的扫描电镜样品制备技术曾有报导,然而,单细胞藻类这方面的报导极少,本文根据我们的工作需要,反复试验,建立了单细胞藻类扫描电镜样品制备方法,获得了满意的结果。四眼鼓藻、钝角星鼓藻、短角美壁藻等十种藻由中国科学院水生生物研究所五室藻种库提供。培养液中的藻低速离心,2.5％戊二醛固定2小时,1％锇酸后固定1小时,分别制成藻的细胞悬液备     

电子显微镜检查在肌肉疾病诊断之应用

从1981年11月起,作者等在神经科搜集肌肉疾病之肌肉切片样本合计684例,切片样本主要做组织病理,组织化学诊断,或必要时做电子显微镜检查。切片方法通常为经皮切开,或针刺切片。切片之肌肉组织,分为三部分,一者在以液态氮冷至-160℃之isopentane内急速冷冻,以便做组织冷冻切片,病理染色及组织化学染色;另一部分组织培养或生化分析;第三部分则电镜下做超微细构造之观察。电镜检查用之肌肉组织切成1立方毫米小块固定于3％glutaraldehyde内,而后再以锇酸二度固定染色,脱水后渐次包埋於epon内,切1nm之厚片,选择将镜检之部位,切100nm之薄片,并以uranyl acetate及lead citrate双重染色,而后用日立500型电子显微镜观察。     

正常小鼠肾上腺光动力学损伤作用的超微结构研究

利用血卟啉激光对肿瘤进行光动力学治疗,虽已有十余年历史,并已积累了许多临床和实验研究资料,但仍有许多问题有待深入。肾上腺是机体重要的内分泌器官之一,光动力学作用对肾上腺的损伤如何?迄今未见详细的研究报道。本文通过动物实验作了电镜观察。本实验采用正常NIH小鼠,腹腔注射国产扬州血卟啉,剂量为10mg/kg。24小时后于全麻下切开腹壁暴露左删肾上腺,用氦氖激光直接照射。激光波长6328A,照光强度238mW/cm~2,照光剂量100J/cm~2。照光后1、3、6、12、24、48小时分别处死,每批3只,肾上腺组织块经4％甲醛1％戊二醛混合固定后,再以1％四氧锇再固定,Epon812包埋,超薄切片经醋酸铀、柠檬酸铅双重染色,用Philips EM-410透     

甲状腺胶性腺瘤及乳头状癌的超微结构

采用电镜观察肿瘤细胞,提高细胞结构的分辨能力是肿瘤形态学研究的重要手段。本研究对比观察了甲状腺胶性腺瘤及乳头状癌的超微结构,并探讨了不同超微结构特征对癌的诊断意义。材料来自北医第一附属医院外科手术室的手术切除标本,共12例胶性腺瘤及5例乳头状癌。组织切成1mm小块固定在3％戊二醛及1％锇酸后固定,环氧树脂618包埋超薄切片经醋酸铀及枸椽酸铅双染色。JEM100CXⅡ电子显微镜观察,剩余标本固定在10％福尔马林液中作常规病理组织切片及检查。讨论:甲状腺胶性腺瘤和乳头状癌的超微结构有明显不同,尤其显著的是核的变化。胶性腺瘤有较大,而且     

适合光镜和电镜诊断肾小球疾病的固定剂选择

目的：为了使已经石蜡包埋的肾穿组织脱蜡后进行电镜观察,关键是选择适当的固定剂。方法：在石蜡包埋前,肾穿组织分别用甲醛、戊二醛及戊二醛、锇酸双固定。根据光镜和电镜观察结果,选择能兼顾光镜和电镜的固定剂。结果：甲醛固定不能有效保存肾穿组织的超微结构,锇酸的固定能有效地保存超微结构,但严重影响了光镜切片的染色;而戊二醛与甲醛相比,较好地保存了肾穿组织的超微结构,同时又不影响光镜切片的染色。结论：在石蜡包     

生物样品的冷冻超薄切片术

当生物材料在样品制备过程中需减少化学固定剂对样品中蛋白活性的影响或减少可溶性元素流失时,可采用快速冷冻固定法和冷冻超薄切片。切片在含水状态下或经冷冻干燥后,用电镜观察,这样既能显示生物细胞在体内的形态,又使细胞内各种活性得以保存,是一种值得推广的电镜技术。我们采用新鲜活组织快速冷冻固定和冷冻超薄切片,经冷冻干燥后在透射电镜下对亚细胞结构进行形态观察和微小区域内的元素定性、定量分析,本文总结了初步结果和经验。     

LambdaDNA诱导非细胞体系核重构过程的超微结构研究

非洲爪蟾未受精的卵细胞去胶膜后,经钙离子载体A23187活化及松胞素B处理,10,000G离心裂胞,除掉脂滴、卵黄颗粒、色素颗粒及卵核等,可得到可溶性胞质。在可溶性胞质中先加入ATP再生系统。将在65℃处理5分钟的Lambda DNA引入上述爪蟾卵非细胞体系,置22℃温育。以温育开始为零时,每隔一定时间取样固定做电镜观察,共取到温育4小时。取出的样品用戊二醛、锇酸双固定,Epon812包埋后做超薄切片,经醋酸双氧铀——柠檬酸铅染色,在JEM-100CX透射电镜下观察。同时按常规方法做冰冻蚀刻观察。     

肾组织的低温快速冷冻固定及冷冻置换研究

超低温快速冷冻固定以极高的冷冻速率对生物样品进行固定,可使生物组织结构、组织内可溶性离子及游离性物质得到保存,使被固定后的生物组织仍旧保持于最接近原自然状态。作者对肾组织的超低温快速冷冻固定及冷冻损伤进行了探讨。取雄性大鼠肾皮质用振动切片机切成150～200/μm厚的薄片,采用Reichert-Jung KF-80弹射式快速冷冻仪将切片快速插入经液氮冷冻至-175℃的冷冻剂F22中,再迅速转移到置换液丙酮中,并保持温度在-80℃(34小时);-60℃(48小时);-20℃(12小时)和-4℃(1小时),缓慢升至室温。常规包埋切片并观察。电镜下,从肾皮质表层到30μm深的范围内,组织超微结构保存良好,细胞核、核仁和微绒毛等结构清晰显     

应用扫描电镜技术显示染色体方法的初探

光镜观察染色体,已沿续多年。扫描电镜问世以来,尤其是近10年来,国内外学者选用光镜观察认定的染色体标本,再重新用锇酸(1％O_sO_4)、丹宁酸(2％)浸渍,然后进行漂洗、自然干燥、黄金离子镀膜后上镜观察。其目的试图经电镜放大之后与光镜观察结果进行对比。近几年我们试用扫描电镜技术,经反复试验,成功地制备了染色体样品。其方法独特,结构新颖,为研究染色体开创了一条新路。一、材料与样品制作取临床病人静脉血0.5ml,注入装有1ml培养基(1640)的培养瓶中,置37℃培养箱72小时,取材前2小时加入秋水仙素1滴(10μg/ml),然后将其倒入离心管离心10分钟(2000转/分),弃上