基于NanoLC-Orbitrap技术测定六种不同栽培品种大豆中多肽Lunasin含量

大豆中含有丰富的蛋白质和多肽,其中露那辛(Lunasin)是一种重要的功能性多肽。为测定国产大豆中Lunasin的含量,本研究以六种国产大豆为实验材料,采用凝胶电泳法对国产大豆中的Lunasin成分进行分离纯化,得到含有Lunasin的凝胶条带,酶解后利用纳流液相色谱串联轨道阱质谱(Nano LC-Obitrap)平行反应监视法(PRM)分析其中的特异性肽段从而测定Lunasin的含量。测定结果表明:在六种国产大豆中,皖豆35大豆中Lunasin含量最高,为4.66 mg/g;中黄13大豆中含量为2.24 mg/g;中黄75大豆中含量为3.35 mg/g;徐豆14大豆中含量为2.59 mg/g;黔豆7号大豆中含量为2.03 mg/g;黑河43大豆中含量为2.87 mg/g。实验结果表明国产大豆中含有丰富的Lunasin。该方法前处理操作简单,重复性好、结果准确,具有较好的线性关系,此方法可用于大豆中Lunasin的含量的测定及筛选富含Lunasin的大豆品种。     

微生物产大豆异黄酮糖苷酶分离纯化的研究

利用离子交换层析法分离纯化了由菌种Absidia sp.SI39d发酵所产的1种高活性大豆异黄酮糖苷酶,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验得到电泳单点的纯酶,并对其酶性质进行了研究。提纯酶的活力达173U/ mL,酶蛋白的分子量为61ku,最适反应温度为40℃,最适pH值为5.0,在20～60℃,pH4.0～7.0之间酶活力相对稳定。Co~(2+)、Ca~(2+)、Zn~(2+)对酶活性无影响;Ag~+、Cu~(2+)对酶活性有抑制作用;C_([Fe~(3+)])<50mmol/L时,对酶活性无影响;当C_([Fe~(3+)])>50mmol/L时,有抑制作用。该酶的酶反应动力学方程为V=2.07[s]/(1.45+[s])。     

Quantification of Human IgE Immunoreactive Soybean Proteins in Commercial Soy Ingredients and Products

ABSTRACT:  The objective of this study was the detection and quantification of human IgE immunoreactive soybean proteins in commercially available soy ingredients and products. Optimum dilutions of primary antibody and antigens as well as detection sensitivity were determined for the implementation of a sandwich ELISA method using plasma from soy sensitive subjects (IgE ranging from 0.35 to 98.7 IU/mL). Human IgE immunoreactivity of commercial soybean ingredients showed that the plasma of subjects with strong allergic reaction to soybean presented proportionally higher immunoreactive response. Soy protein isolate and soy protein concentrate contained less immunoreactive proteins than soy flour and grits. As expected, a hypoallergenic soybean product presented the lowest IgE immunoreactivity. Hydrolyzed and fermented soy ingredients showed negligible human IgE immunoreactivity when proteins and peptides were < 20 kDa. The IgE immunoreactivity of soymilk samples ranged from 3.4 to 68.9 ng IgE/mg extracted protein. Tofu contained about 20-fold higher IgE immunoreactivity than soymilk products (median 171 ng IgE/mg extracted protein). Furthermore, soy cheese products presented twice the IgE immunoreactivity than tofu products (median 359 ng IgE/mg protein). Meat analogues presented considerably high extracted protein concentration (median 67.9 mg/g product). The findings of the current investigation demonstrate sandwich ELISA as a reliable immunochemical method with good repeatability, sensitivity, and low detection limit to quantify IgE immunoreactive proteins in soy ingredients and products. Quantitative measurement of specific IgE is likely to become an increasingly valuable tool for soybean industry to comply with food labeling for manufacturers, thus protecting soy-sensitive consumers.     

注射用大豆卵磷脂的提取纯化与质量分析

通过对大豆磷脂粉乙醇抽提、氧化铝吸附、活性炭脱色、乙醚溶解后超滤膜过滤、丙酮脱油脱水等工艺提取与纯化注射用卵磷脂，所得大豆卵磷脂符合药典标准。     

大豆糖蛋白的分离纯化及结构分析

通过DEAE-Cellulose52离子交换层析和SephadexG-200凝胶层析从大豆中提取纯化一种糖蛋白,并对其结构进行了初步分析。用SDS-PAGE检测纯度,并测定其分子质量的大小,测定结果为61000,蛋白质含量为30.55%;β-消除反应说明其为O-连接型糖蛋白,红外光谱法推断其含有α型糖苷键。     

大豆异黄酮降解液中雌马酚纯化工艺

为从大豆异黄酮降解液中分离纯化雌马酚,以雌马酚的含量为指标,确定聚酰胺树脂为吸附剂纯化雌马酚。通过单因素试验和正交试验,确定最佳吸附条件为粗提液中雌马酚质量浓度2.40μg/mL、pH5、吸附时间6h,得雌马酚吸附率45.36%,最佳解吸条件为乙醇溶液体积分数80%、乙醇溶液用量45mL、乙醇溶液流速0.5mL/min,得解吸率60%。     

烟草上马铃薯Y病毒的提纯与检测

本文是关于制备马铃薯Ｙ病毒抗血清及ＥＬＩＳＡ检测技术的实验结果。采用垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提纯ＰＶＹ,纯化的ＰＶＹＯＤ２６０／ＯＤ２８０为１．５６,将提纯的病毒制品免疫家兔,制备抗血清,经微量沉淀及环状沉淀试验,用提纯病毒测定抗血清的效价均为１／２０４８,并对制备的ＰＶＹ—ＩｇＧ作灵敏度及特异性测定。     

ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究

以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4 EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。     

Technical Approach to Simplify the Purification Method and Characterization of Microbial Transglutaminase Produced from Streptoverticillium ladakanum

In order to fast and economically purify MTGase from Streptoverticillium ladakanum , a stepwise elution method was developed and compared with linear gradient elution method. MTGase was purified to electrophoretical homogeneity by using CM Sepharose CL-6B and Blue Sepharose Fast Flow chromatographies by linear gradient or stepwise methods. The recovery of MTGase by linear gradient and stepwise methods were 68.4% and 81.0%, respectively. The optimal temperature and pH were 40 °C and 5.5, respectively. It was stable at pH 5.0 to 7.0 and had a rate constant (KD) of 6.21 °o 10^-5 min^-1 for thermal inactivation at 45 °C. The purified MTGase was activated by K⁺ Na⁺, Ca²⁺, Mn²⁺, and Mg²⁺, not affected by Fe³⁺, EDTA, but inhibited by Cu²⁺, Zn²⁺, Hg²⁺, Ni²⁺, Co²⁺, Cd²⁺, PCMB, NEM, IAA, and PMSF. A simple stepwise method was developed for the purification of MTGase from S. ladakanum.     

大豆异黄酮糖苷酶的发酵和纯化

大豆异黄酮糖苷酶可水解大豆异黄酮的糖基使其生成苷元,从而提高大豆异黄酮的生物活性。实验中筛选得到了大豆异黄酮糖苷酶产酶菌株 Absidia sp．R,确定了该菌株发酵产酶培养基。采用硫酸铵沉淀和离子交换法对该酶进行了纯化,并初步确定了其分子质量。     

横梗霉产酯化酶的纯化及酶学性质

在研究浓香型白酒的过程中为了提高出酒率以及优质酒率可以从酯化酶的研究入手,酯化酶对提高出酒率和产优质酒有着积极的影响。本实验从五粮液大曲中经过严格的筛选得到一株高产酯化酶的菌株横梗霉。纯化分离横梗霉酯化酶发酵液使用盐析、透析、层析等步骤得到纯化的酯化酶,纯化提高到35.66倍,且具有2.54%的活性回收率,相对分子质量约为43000 u。通过酶学性质研究得出,酯化酶作用时的最佳温度是40℃,存在热敏感特性;60℃条件下反应30 min后有67.97%酶活残留;当p H为6～8时,酶活性较佳,当p H达到7.5时,最优;使用纯化后的酯化酶进行酶学性质研究发现金属离子对酯化酶有抑制作用的是Fe~(2+)、Zn~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)对酯化酶。得到结论该横梗霉所产的酯化酶有着高产、耐热性差、对热敏感、具有良好的耐碱性的性质,在使用过程中应该注意高温以及酸性环境对活性的影响。     

液晶态分离提纯大豆磷脂的研究

水化油脚中的大豆磷脂在一定条件下可以转变成液晶状态。液晶态大豆磷脂具有良好的流动性和较高的纯度,与水化油脚中的其它物质,如油脂和其它杂质等易于分离。液晶态大豆磷脂(干基)的丙酮不溶物(AI值)高达85%,可以粉碎成颗粒。这种颗粒磷脂非常适合超临界二氧化碳流体萃取技术对物料的要求,从而为超临界二氧化碳流体萃取技术生产AI值超过95%颗粒磷脂的工业化构建了必要的技术平台。本研究不仅可以避免现行的丙酮萃取脱油技术所带来的环境和产品污染,而且还可以降低生产成本。     

大豆多肽分离提纯方法研究进展

分析了色谱法(正交轴逆流色谱法、凝胶过滤色谱法、高效液相色谱法、离子交换色谱)、膜分离法(超滤、纳滤、微滤)和毛细管电泳法(毛细管区带电泳、胶束电动毛细管电泳、毛细管凝脉电泳),以及联用技术的基本原理,并综述了其应用于大豆多肽物质分离纯化方面的最新研究进展。     

大豆皂苷B组分的分离纯化研究

建立了从生产大豆异黄酮的废水中分离纯化较高浓度大豆皂苷B组分的方法。利用D101大孔树脂分离,研究不同分离纯化工艺参数对B组分大豆皂苷分离效果的影响,从而建立大豆皂苷B组分的分离纯化工艺。通过D101树脂分离纯化,使得大豆皂苷B组分的质量分数由0.67%提升至18.96%。通过利用低浓度的乙醇进行结晶以获得纯度更高的大豆皂苷B组分,纯度可提高至35%。     

大豆脂肪氧合酶的提取纯化及其特性研究

本实验以大豆为原料,经硫酸铵沉淀、葡聚糖凝胶柱G200分离沉淀,得到2种脂肪氧合酶（L0x）：LOX．1,LOX．2。对这两种同工酶的部分特性进行研究。其中LOX-1的反应最适pH为7．0,在pH9．0时无活性。而LOX-2最适pH为9．0,在pH7．0时也表现出较强活性。最适温度均为25℃。两种同工酶的热稳定性结果表明,LOX．1和LOX．2在40℃活性稳定,加热温度高于50℃时,活性急剧下降。在亚油酸为底物的反应体系中,LOX．1和LOX．2的K。值分别为8．2、12．2mmol／L。并对Ca2＋、Na＋、Cu2＋、和Fe3＋等不同的金属离子表现出不同的反应活性。     

地衣芽孢杆菌弹性蛋白酶纯化和性质研究

用地衣芽孢杆菌发酵液制备弹性蛋白酶粗酶液,采用硫酸铵分级沉淀和Sephadex凝胶柱层析的方法分离纯化弹性蛋白酶,并对弹性蛋白酶的酶学性质进行研究。结果表明：弹性蛋白酶粗酶液经40%～70%饱和度的硫酸铵纯化后比活力提高到120U/mg,经凝胶柱层析纯化后比活力可达到292U/mg,纯化倍数为12.6,SDS-PAGE法证实弹性蛋白酶分子质量为29.5kD。对酶学性质的研究结果表明：弹性蛋白酶最适反应温度为55℃,最适反应pH值为7.4,以刚果红-弹性蛋白为底物,米氏常数Km为9.67mg/mL。低浓度金属离子Ca2+和K+对酶活力有促进作用,而Mg2+、Mn2+、Zn2+和Al3+对酶活力则有抑制作用。     

豆渣可溶酸性多糖的分离纯化及结构解析

利用DEAE-Cellulose离子交换色谱柱对豆渣可溶性多糖进行分离纯化,获得了2种电荷均一的水溶性大豆多糖(soluble soybean polysaccharides,SSPS)SSPS-A1和SSPS-A2.进一步对组分SSPS-A1进行凝胶过滤色谱,获得电荷和分子质量均一的多糖组分SSPS-A1-c.对其进...     

超滤在大豆多肽分离纯化中应用

本试验应用超滤技术对大豆多肽进行分离,研究了超滤系统几个主要参数对膜通量的影响。研究结果表明:截留分子量30000Da的超滤膜应在压力0.12MPa、温度40℃、pH值7.0下运行40min为一个周期,膜通量为19L/m2·h左右;截留分子量10000Da的超滤膜应在压力0.10MPa、温度<45℃、自然pH值下运行60min为一个周期,膜通量为25L/m2·h左右;截留分子量5000Da的超滤膜应在压力0.10MPa、温度<45℃、自然pH值下运行80min为一个周期,膜通量为22L/m2·h左右;经分离得到分子量>30000Da的大豆多肽约占13.21%,分子量10000～30000Da的大豆多肽约占4.05%,分子量5000～10000Da的大豆多肽约占6.41%,分子量<5000Da的大豆多肽约占76.11%。     

大豆酯酶的分离、纯化及性质研究

本实验研究了从大豆种子中分离、纯化大豆酯酶的方法,研究表明经过缓冲液提取、差速离心、盐析沉淀和离子交换层析可以得到电泳纯级的大豆酯酶.特性研究表明大豆酯酶的最适温度为30℃,最适pH值为7.5,其酯酶活力随离子强度的变化而变化,用双倒数法求的大豆中酯酶的米氏常数为2.9 7μmol/L.