Fe_3O_4/P(AA-MMA-GMA)磁性复合微球的制备及其偶联抗体的性能

采用新型的无皂乳液聚合法制备磁性复合微球,即以丙烯酸(AA)、甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,1,1-二苯基乙烯为自由基控制剂,无皂乳液聚合制备了一种磁性复合微球Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)。以所制备的Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球为载体,通过共价偶联山羊抗兔IgG抗体,得到了一种免疫磁性复合微球。研究表明,Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球表面带有环氧基,粒径为626nm,具有超顺磁性。0.5mgFe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球与200μg山羊抗兔IgG抗体在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中于25℃反应16h,可得到一种免疫磁性复合微球,其山羊抗兔IgG的偶联量为124μg,且该免疫磁性复合微球可特异性结合兔抗肌动蛋白α。     

应用流式细胞仪检测聚合物纳米胶束表面抗体偶联效率

目的探索应用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测纳米级聚合物胶束(polymeric micelles,PMs)表面偶联抗体效率的方法。方法将DMPE-PEG-Maleimide、DPPE-PEG-Maleimide、DSPE-PEG-Maleimide、DOPE-PEG-Malei-mide、DLPE-PEG-Maleimide聚合物纳米胶束分别与Anti-GOLPH2抗体共同孵育,使其彼此偶联;再与SNU-423细胞共同孵育,采用FCM检测SNU-423细胞膜表面GOLPH2抗原的阳性表达率,并比较各类聚合物纳米胶束与AntiGOLPH2抗体的相对偶联效率。结果 SNU-423细胞表面GOLPH2抗原的阳性表达率为1.23%;在各类聚合物纳米胶束中,DLPE-PEG-Maleimide与Anti-GOLPH2抗体的相对偶联效率最高,且与抗体浓度呈正相关。结论应用FCM检测聚合物纳米胶束表面抗体偶联效率的方法,能在一定程度上反映抗体与聚合物纳米胶束的抗体偶联情况,其检测结果具有一定的参考价值。     

PLGA微球粒径对HPV L1五聚体候选疫苗免疫效果的调控

以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为疫苗递送和佐剂系统,采用快速膜乳化技术制备了粒径0.43和1.38 mm的均一PLGA微球,以其包埋HPV L1五聚体抗原,考察微球粒径对体内免疫应答强度和水平的影响. 结果表明,1.38 mm粒径载抗原PLGA微球组产生的IgG滴度(87771±24983.0)和中和抗体滴度(30720±15863.7)显著高于0.43 mm粒径组的IgG滴度(38400±14021.7) (P<0.05)和中和抗体滴度(2480±3892.6) (P<0.01),且1.38 mm载抗原PLGA微球能更显著提高Th2型细胞因子IL-6(0.43 mm微球的4.7倍)和IL-4(0.43 mm微球的1.5倍)的分泌水平;而0.43 mm载抗原PLGA微球能显著提升Th1型细胞因子IFN-γ(1.38 mm微球的2.1倍)的分泌水平,表明对于HPV疫苗佐剂与递送系统,小粒径微球有利于细胞免疫的提升,可用于治疗性疫苗的开发;而大粒径微球则有利于诱导高效体液免疫,可用于预防性疫苗的开发.     

餐具中残留十二烷基苯磺酸免疫层析检测卡研究

建立筛查苯磺酸表面活性剂的荧光免疫检测卡;以对磺基苯甲酸合成免疫抗原,免疫家兔获得针对苯磺酸基团的多克隆抗体,纯化后标记量子点荧光微球;以对氨基苯磺酸合成检测抗原,构建荧光免疫层析卡(FIAC)。在酶免疫分析中对十二烷基苯磺酸钠的IC₅₀值为55.2 ng/mL,优化的FIAC对十二烷基苯磺酸钠的检测限为100 ng/mL。本方法灵敏、特异、简便,是筛查餐具中残留烷基苯磺酸表面活性剂的有效工具。     

水痘—带状疱疹病毒IgG酶联检测试剂盒的研制和应用

目的 研制水痘IgG(VZV-IgG)酶联检测试剂盒。方法 将VZV接种二倍体细胞,收获病毒,经纯化后用作包被抗原;辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG制备酶联检测试剂盒并进行质量检定。结果 VZV-IgG酶联检测试剂盒敏感度与膜抗原荧光抗体法(FAMA)近似。结论 成功地制备了VZV-IgG酶联检测试剂盒。     

多表位DNA壳聚糖微球疫苗的体液免疫应答

目的研究多表位DNA壳聚糖微球疫苗的体液免疫应答。方法制备多表位DNA壳聚糖微球疫苗pcD-NA3.1-HME-3C3d,经鼻腔免疫小鼠,蛋白检测微孔试剂盒检测小鼠特异性IgG抗体水平。结果经免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,DNA壳聚糖微球疫苗的抗体水平明显高于DNA疫苗。结论壳聚糖微球疫苗投递系统可提高多表位DNA疫苗的免疫应答效果。     

不同抗原剂量的亚单位疫苗对小鼠的免疫效果

目的研究不同抗原剂量的亚单位疫苗对小鼠的免疫效果。方法将重组LTB-VP1和BSA蛋白分别用氢氧化铝吸附后,制备成不同浓度的亚单位疫苗,以100、50、20、10、5和1μg/只的剂量免疫昆明小鼠,共免疫3次。于初次免疫后第14、28、42、56天断尾采血,分离血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平和特异性IgG1/IgG2a比率,并采用尿素变性法检测小鼠血清中抗体相对亲合力指数(abidity index,AI)。结果 LTB-VP1和BSA抗原激发的抗体水平随免疫次数的增加而不断升高,与抗原剂量呈非线性关系,不同抗原的合适使用剂量也不相同。LTB-VP1抗原以20μg/只剂量产生的抗体水平和抗体的AI值最高;IgG1/IgG2a平均值为1.04,各剂量组Th1/Th2型免疫反应处在一种平衡状态。BSA抗原在5和100μg/只剂量时激发的抗体水平相近,抗体的AI值差异有统计学意义(P<0.05);IgG1/IgG2a平均值为2.4,各剂量组以Th2型免疫反应为主。结论抗体水平不随抗原剂量的增加而增加,低剂量抗原即可产生较好的免疫效果,为兽用疫苗的临床使用提供了数据参考。     

多孔PLGA微球作为新型冠状病毒疫苗佐剂的研究

聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)制备的纳/微颗粒已被证明具有良好的疫苗佐剂效果。现有研究中,对于PLGA疫苗递送微球的研究主要集中在抗原装载/吸附效率的提升或多佐剂共递送以增强免疫效果上。然而,对于微球结构本身的多样性在免疫效果提升方面的探索仍较为匮乏。通过对微球结构进行合理化设计,制备出多孔微球将抗原“后装载”到微球内部的方法或可实现抗原的无损装载与延长递送,从而开发出高效的新型冠状病毒疫苗递送佐剂。本工作以乳液法制备了PLGA多孔微球与实心微球,二者除了多孔微球具有内部空腔和表面小孔的独特结构外,在微球粒径、表面电势上均无显著区别。由于PLGA多孔微球内孔大、外孔小的特征,抗原投入浓度5.71 mg/mL时,包埋率达到10.81%。在延长抗原体内滞留时间上,相对于游离抗原3天的滞留终点和实心微球混合抗原5天的滞留终点,装载于多孔微球中的抗原的体内滞留时间延长至15天。在体液免疫效果的提升上,与新冠抗原混合实心微球疫苗组相比,装载新冠抗原的多孔微球疫苗组的IgG滴度上升速度最大值V_max是其1.73倍,响应水平更高;达到V_max的时间t比...     

水油微球/BCG复合佐剂对结核杆菌融合蛋白PstS1-LEP免疫原性的影响

目的探讨水油微球与热灭活BCG(heat-killed BCG,HKBCG)或无细胞BCG(acellular BCG,ABCG)复合佐剂对结核杆菌融合蛋白PstS1-LEP免疫原性的影响。方法制备水油微球/HKBCG、水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗,经皮下注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,末次免疫后2周采血,处死小鼠并无菌摘脾;ELISA法检测小鼠血清抗Pst S1-LEP的IgG、IgG1和IgG2a抗体,ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞经PstS1-LEP刺激分泌IFNγ、IL-4和IL-17的斑点形成细胞数(spots forming cell,SFC)。结果水油微球/HKBCG、水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗免疫小鼠诱导Pst S1-LEP特异性IgG、IgG1和IgG2a水平比较,差异无统计学意义(P0.05);水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗免疫小鼠的IFNγ-SFC、IL-17-SFC及IL-17-SFC/IL-4-SFC均高于水油微球/HKBCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗,而两种疫苗免疫小鼠的IL-4-SFC、IFNγ-SFC/IL-4-SFC和IFNγ-SFC/IL-17-SFC比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗诱导偏向Th1和Th17型细胞免疫,IFNγ-SFC、IL-4-SFC和IL-17-SFC的两两比值显示,水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗更有利于诱导Th17型细胞免疫漂移。     

MenA PS-EA偶联物的制备及其在多糖抗体检测中的应用

目的制备MenA PS-EA偶联物及以MenA PS-EA为包被抗原的A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的ELISA检测试剂。方法培养A群脑膜炎奈瑟菌,提取多糖(MenA PS),与卵清蛋白(EA)以还原氨基法偶联,Sepharose CL-4B纯化。制备以MenA PS-EA为包被抗原的A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的ELISA检测试剂,考察试剂的精密性和稳定性,并与血清杀菌力试验(SBA)比较。结果纯化的MenA PS-EA经高效液相色谱检测,纯度为81.50%;以MenA PS-EA为包被抗原的ELISA检测试剂精密性和稳定性良好;将该试剂与SBA法比较,其敏感性为96.91%,特异性为90.00%,一致性为95.83%。两种检测方法之间差异无显著意义。结论以纯化MenA PS-EA作为包被抗原建立的A群脑膜炎奈瑟菌多糖特异性IgG抗体ELISA检测试剂可用于检测多糖IgG抗体,为进一步研究及开发细菌多糖类抗体诊断试剂提供参考。     

Covalent immobilization of antibodies for the preparation of immunoaffinity chromatographic supports

Immunosorbents in immunoaffinity chromatography (IAC) are prepared by immobilizing expensive antibodies without guidelines for ensuring the best coupling efficiencies, and avoiding low binding capacities. Covalent immobilization of antibodies on N-hydroxysuccinimide (NHS)-activated Sepharose 4 Fast Flow resin was optimized using human IgG via full factorial design with incubation times (4, 9, 14, 19 and 24 h), temperatures (4°C and 20°C) and coupling reaction buffers (sodium bicarbonate and triethanolamine). The best coupling efficiency (CE) (83.4 ± 8.7%) was reached with triethanolamine buffer, 14 h and 4°C. Comparison of antibody isotypes (IgG or IgM) by a nested factorial analysis suggested that antibodies in the IgG isotype presents the best coupling efficiency.     

HBV壳聚糖微球疫苗鼻腔免疫的初步研究

目的　研究HBV表面抗原亚单位微球疫苗及DNA微球疫苗鼻腔免疫的效果 ,为新型鼻腔疫苗的研制提供实验基础。方法　选取HBV表面抗原亚单位疫苗及HBVDNA疫苗作为模型 ,以壳聚糖作为载体 ,通过沉淀 凝聚法制备壳聚糖微球疫苗 ,分别通过鼻腔、腹腔及肌肉免疫小鼠 ,在不同时间点收集小鼠血清 ,用ELISA检测血清中抗HBVIgG ,分析不同免疫途径的免疫效果。结果　在HBV亚单位微球疫苗免疫组中 ,腹腔与鼻腔免疫效果差异无显著意义 ;而在HBVDNA疫苗免疫组中 ,肌肉免疫后 12周IgG达到峰值 ,随后开始出现下降趋势 ;而微球疫苗则在 16周才达峰值 ,且鼻腔免疫组要高于肌肉免疫组。结论　鼻腔免疫可作为亚单位疫苗及DNA疫苗的免疫途径 ,且相对于DNA疫苗而言 ,壳聚糖微球具有保护作用及缓释作用。     

壳聚糖微球及壳聚糖-明胶复合物微球的制备及缓释性能研究

采用乳化-化学交联法制备壳聚糖微球及壳聚糖-明胶复合物微球,并通过实验确定了最佳的成球条件:即m(壳聚糖)∶m(明胶)=2∶1 span-80用量为10g/100 mL,乳化剪切速度为600 r/min,交联率为60％,固化时间为40min.该方法制备的壳聚糖微球球形圆滑,粘连度小,亲水性好.此外在对壳聚糖药物缓释的研究基础上,对壳聚糖复合明胶后,对药物缓释的影响情况进行了研究探索.以生物可降解性和生物相容性好的壳聚糖和明胶为载体承载阿司匹林,研制出阿司匹林壳聚糖-明胶微球,为阿司匹林提供了一种理想的缓释载体.     

空心壳聚糖微球对二甲酚橙的吸附性能研究

采用反相悬浮交联法制备了具有空壳结构的壳聚糖微球。利用静电引力对二甲酚橙的进行吸附研究。通过分光光度法探讨了溶液初始DH值、吸附时间、二甲酚橙的初始质量浓度、吸附剂的用量及其粒径大小对二甲酚橙的吸附率的影响。结果表明：在DH值为4．90及常温下,二甲酚橙溶液的初始质量浓度为32mg／L时,可达到吸附平衡,此时的吸附剂用量为0．03g／100mL,吸附平衡时间约为2h,吸附率可高达93．6％。结果表明,此微球具有很强的吸附能力,而且平衡时间快,并且具有一定的重复利用的性能,是一类很值得开发的新型吸附分离材料。     

磁性琼脂糖复合微球固定化纤维素酶的研究

以磁性琼脂糖复合微球为载体,采用物理吸附法,制备出磁性固定化纤维素酶。确定了固定化工艺条件：ｐＨ２－２,吸附时间８ ｈ,酶用量为１５０ ｍｇ／ｇ 微球,在最佳固定化条件下,磁性固定化酶的活力为１９１－７ Ｕ／ｇ 微球,蛋白载量为１００ ｍｇ／ｇ 微球,比活为１－９ Ｕ／ｍｇ 蛋白,活性回收率为７３－１ ％ 。并对磁性固定化酶的理化性质进行了研究：磁性固定化酶的最适温度（５５ ℃） 与天然酶相同,最适ｐＨ（５－０）较天然酶提高１－０ 个单位,磁性固定化酶Ｋｍ 值（４－１×１０ －３ｇ／Ｌ）较天然酶Ｋｍ值（７－８×１０－３ ｇ／Ｌ） 小,热稳定性较天然酶有所提高,磁性固定化酶重复使用１０ 次,其相对活性保持在６０ ％ 。     

乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体微球疫苗的体液免疫应答

目的探讨乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体微球疫苗的体液免疫应答效果。方法用壳聚糖制备乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体微球疫苗,经腹腔、皮下和鼻腔3种途径免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性IgG抗体水平。结果3种途径免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,鼻腔免疫效果最好;多表位噬菌体微球疫苗的抗体水平明显高于多表位噬菌体疫苗。结论壳聚糖微球疫苗投递系统可以提高多表位噬菌体疫苗的体液免疫效果。鼻腔免疫是多表位噬菌体微球疫苗的最佳免疫途径。     

全氟丙烷人血白蛋白微球注射液的稳定性

目的评价全氟丙烷人血白蛋白微球注射液在2～8℃保存的稳定性。方法将3批全氟丙烷人血白蛋白微球注射液放2～8℃保存,于不同时间取样,检测微球浓度、平均粒径、全氟丙烷气体含量、IgG各组分含量及其他各项主要指标。结果3批制品保存30个月,其微球浓度、平均粒径、直径小于10μm的微球百分数和全氟丙烷气体含量均无明显变化,IgG各组分含量及其他各项主要指标均达到《中国药典》三部(2005版)的要求。结论全氟丙烷人血白蛋白微球注射液在2～8℃保存30个月,稳定性良好。     

高分子微球的合成及其在密封剂中的应用

以亲水性4-乙烯基吡啶(4-Vp)为微球的壳层单体、苯乙烯(St)为微球的核层单体,采用一步无皂乳液聚合法制备了PS-P4V P[聚苯乙烯-聚(4-乙烯基吡啶)]微球;然后在该高分子微球表面覆盖了一层有机硅,合成了有机-无机杂化PS-P4VP-Si[有机硅包覆的聚苯乙烯-聚(4-乙烯基吡比啶)]微球;最后分别将两种微球与聚硫橡胶共混,制备相应的聚硫密封剂。研究结果表明:PS-P4VP、PS-P4VP-Si微球大小均一,两者粒径分别为290 nm和350 nm;两种微球分别作为聚硫密封剂的填料,既能提升密封剂的性能,又能降低密封剂本身的密度(比常规密封剂降低了15%～20%);同时,这两种微球填充的聚硫密封剂具有艮好的耐热性能和耐介质性能,特别是PS-P4VP-Si微球的综合性能更优异。     

Creating monodisperse polymer microspheres using membrane emulsification

This study used membrane emulsification (ME) as a pre‐treatment step to suspension polymerization to produce polystyrene microspheres with diameters from 200 to 300 µm and coefficient of variation (CV) as low 20%. Limited scientific information is available on utilizing suspension polymerization to prepare monodisperse polystyrene microspheres with diameters greater than 100 µm. Microspheres were produced by pumping monomer solution through uniform pores of nickel membranes to form dispersed phase droplets that were transferred to a reactor for suspension polymerization. Systematic studies were done to understand the roles of continuous phase composition, ME unit process parameters, and polymerization reactor stir speed on microsphere size and CV. For a specific microsphere size, there were particular stir speeds in each unit that minimized CV. The methodology developed in this study is being used to prepare monodisperse polymer resin beads to improve detection efficiency and accuracy in flow‐cell sensors for quantifying waterborne radioactivity. © 2016 Wiley Periodicals, Inc. J. Appl. Polym. Sci. 2017 , 134, 44593.     

硅烷偶联剂和表面活性剂复合改性硅酸盐荧光粉

以十六烷基三甲基溴化铵为表面活性剂、乙醇为分散剂、N-(β-氨乙基)-α-氨丙基三甲氧基硅烷偶联剂为荧光粉的表面处理剂。探讨了硅烷偶联剂和表面活性剂复合对发光二极管(LED)用荧光粉处理后,荧光粉的分散性和防潮性及光效的变化。并探讨了硅烷偶联剂在处理荧光粉时的温度和含量的影响。结果表明,表面活性剂用量为荧光粉质量的2%,偶联剂用量为荧光粉质量的3%,荧光粉与乙醇质量比在1/5～1/6时,LED的封装效果较好。按此配方处理后的荧光粉分散性较好,防潮实验20 h未见变化,200 h团聚结块10%,封装光效提高了3%～5%。