纤维素酶中双功能酶水解壳聚糖作用方式的研究

采用HPLC、HPLC-MS及TLC等方法,研究了从纤维素酶中分离得到的既具有纤维素酶活又具有壳聚糖酶活———双功能酶的水解壳聚糖的专一性。通过对氨基低聚糖(GlcN)n、乙酰氨基低聚糖(GlcNAc)n标样及壳聚糖的双功能酶水解进程及水解产物分析,表明该双功能酶能水解(GlcN)n,而不能水解(GlcNAc)n,即它能水解GlcN-GlcN之间的-β1,4糖苷键,但不能水解GlcNAc-GlcNAc之间的糖苷键。不同脱乙酰度壳聚糖经酶水解,其产物大部分为单糖,壳聚糖脱乙酰度(DD)对水解反应产物的形成和反应速率影响较小,表明该酶也可作用于GlcN-GlcNAc之间的-β1,4糖苷键。运用Time-Course分析法对双功能酶水解壳四糖(GlcN)4的进程进行分析,表明其作用方式为外切,推测此双功能酶为一外切氨基葡萄糖苷酶。     

米曲霉外切β-D-氨基葡萄糖苷酶活性部位研究

为了解米曲霉外切β-D-氨基葡萄糖苷酶(GlcNase)的结构特点,采用焦碳酸二乙酯(DEPC)和N-溴代琥珀酰亚胺(NBS),分别对GlcNase分子中的组氨酸(His)残基和色氨酸(Trp)残基进行化学修饰.DEPC修饰结果表明,有1分子His残基位于GlcNase的活性部位;NBS修饰结果表明,Trp残基处于GlcNase的活性部位,且至少有1分子Trp残基位于GlcNase活性部位的底物结合部位.     

一种快速测定α-葡萄糖转苷酶酶活的方法

参照《QB 2525-2001食品添加剂α-葡萄糖转苷酶》中酶法测定的基本原理,采用α—MG为底物,通过血糖测定试剂盒分析转苷酶转化生成的葡萄糖,来测定转苷酶的酶活。该方法简单,快速,灵敏度高。     

Geobacillus thermodenitrificans α-半乳糖苷酶原核表达及其酶学性质

本文利用大肠杆菌原核表达系统对来源于Geobacillus thermodenitrificans的α-半乳糖苷酶编码基因进行了重组表达,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,该α-半乳糖苷酶的分子量为100~110 kDa,以pNPG为底物时,该酶的最适反应温度为70 ℃,最适pH6.0,且该酶具有较好的温度稳定性和pH稳定性;Hg+、Ag+、Cu2+离子能完全抑制α-半乳糖苷酶的活性,Fe3+、Mn2+、Zn2+等离子对α-半乳糖苷酶的活性具有不同程度的激活作用;以pNPG为底物测得该酶的米氏常数K_m=10.04 mmol/L,最大反应速度V_max=18.25 μmol/min。     

利用七叶灵显色技术检验和判断β-葡萄糖苷酶的研究

七叶灵(6,7-2-羟基-香豆素-β-D-葡萄糖苷)在β-葡萄糖苷酶的作用下能生成葡萄糖和七叶苷原(6,7-2-羟基-香豆素),七叶苷原能和Fe3+作用呈现棕黑色。七叶灵显色技术用于β-葡萄糖苷酶高产菌株的筛选、β-葡萄糖苷酶提纯时的样品检测、非变性聚丙烯酰胺凝胶活性染色的应用结果表明,以七叶灵为作用底物检验和判断β-葡萄糖苷酶的新方法具有高分辨率和灵敏性,而且操作简易、快速、经济。     

柑橘果渣发酵产柚苷酶的工艺优化及固定化研究

柑橘果渣废弃物中含有丰富的生物活性成分、膳食纤维、维生素和微量元素等,对其进行资源化利用具有重要意义。该研究以柑橘果渣为底物,进行柚苷酶的发酵生产工艺优化。结果表明,当果渣与水以质量比1∶8、以5. 5 g/L麸皮粉为碳源、(NH₄)₂SO₄与酵母浸粉(质量比为7∶3)为氮源时,柚苷酶发酵酶活力可达1 180. 15 U/mL,是未优化条件下柚苷酶酶活力的15. 3倍。进一步以叔丁醇为沉淀剂、戊二醛为双功能交联剂,在4℃条件下交联1. 5 h,制备出无载体固定化酶——交联柚苷酶聚集体,其不但具有较好的pH和温度稳定性,且酶活回收率可达73. 0%以上。     

茎用芥菜芥子苷酶的特性研究

以黑芥子苷为底物,用葡萄糖测定试剂盒法对茎用芥菜芥子苷酶的特性进行了研究。结果表明,茎用芥菜芥子苷酶的Km为5.22mmol/L,Vmax为0.036mmol/(L·min),其最适反应温度为50℃,最适pH为8.0。抗坏血酸具有激活芥子苷酶的作用,在抗坏血酸浓度为10mmol/L时,酶活力最大。NaCl对该酶有抑制作用,10%NaCl可完全抑制该酶的活性。Al3+、Ca2+、Mg2+、Fe3+对芥子苷酶的影响作用因离子类型不同而异。     

萝卜中芥子苷酶的特性研究

以萝卜籽提取液中的硫代葡萄糖甙为底物,对萝卜中芥子苷酶的特性进行了研究。结果表明,萝卜中芥子苷酶的最适反应温度为50℃,最适pH值为4.0和8.0。抗坏血酸具有激活芥子苷酶的作用,在抗坏血酸浓度为5mmol/L时酶活力最大,达107U。L-半胱氨酸和谷胱甘肽也能使芥子苷酶的活性有较显著的提高。NaCl、Na2SO3和柠檬酸对该酶有抑制作用,Fe2 、Mg2 、Al3 、Ca2 对芥子苷酶的影响作用因离子类型不同而异。     

丙酮对黄粉虫N-乙酰- β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

以丙酮为效应物,研究其对黄粉虫（Tenebrio molitor Linnaeus）N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）活力的影响,结果表明该酶的剩余活力随着丙酮浓度增大而呈指数下降。导致酶活力丧失50%（抑制半衰期,IC50）的丙酮浓度为7.2%,说明丙酮对黄粉虫NAGase有明显的失活作用。该酶的失活过程属于混合型,并进一步测定游离酶（E）和酶底物络合物（ES）与丙酮的结合常数（KI和KIS）,分别为5.32%和27.2%,KI〈KIS，说明底物存在对酶被丙酮的失活作用有一定的保护作用。     

产耐热β-半乳糖苷酶蜜源芽孢杆菌的鉴定及酶学性质

从分离自蜂蜜的芽孢杆菌中筛选到一株高产β-半乳糖苷酶的菌株,鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),并命名为Bacillus licheniformis SYBC hb15。纯化该酶并研究其酶学性质,以邻硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物,B. licheniformis SYBC hb15所产β-半乳糖苷酶的最适水解反应温度是60℃;70℃放置60 min后酶活力仍保留65%,具有较高的热稳定性;与嗜热菌Talaromyces thermophilus来源的β-半乳糖苷酶相比,葡萄糖对其水解活性的抑制较弱。因此,B. licheniformis SYBC hb15所产的β-半乳糖苷酶具有较高的热稳定性和葡萄糖耐受性,有很好的工业应用潜力。