脂肪酶A的研究进展

来自南极假丝酵母(Candida antarctica)产的脂肪酶A(CALA)作为一种生物催化剂,已广泛应用食品、医药、化妆品等领域,具有热稳定性、对映体选择性强、反式脂肪酸的选择性等特性。文中就该酶的分子结构、克隆表达、催化特性及其特性应用进行综述,旨在能发现该酶的新用途和新特性。     

一株产脂肪酶芽孢杆菌的鉴定及其脂肪酶基因LIP的克隆分析

依据形态学和生理生化特征,将一株产脂肪酶芽孢杆菌BL03初步鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。提取该菌核酸,PCR扩增出地衣芽孢杆菌脂肪酶基因LIP,克隆到pMD19-T载体后进行PCR鉴定及序列测定和生物信息学分析,结果表明该菌LIP基因片段完整,开放阅读框为615bp,编码204个氨基酸,与已发表地衣芽孢杆菌脂肪酶基因（GeneID:3098655）相比,核酸序列相似为99.67%,推导编码氨基酸序列相似性为99.02%,该基因的获得为其异源表达及相关研究奠定了基础。      

一株产脂肪酶芽孢杆菌的鉴定及其脂肪酶基因LIP的克隆分析

依据形态学和生理生化特征,将一株产脂肪酶芽孢杆菌BL03初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis).提取该菌核酸,PCR扩增出地衣芽孢杆菌脂肪酶基因LIP,克隆到pMD19-T载体后进行PCR鉴定及序列测定和生物信息学分析,结果表明该菌LIP基因片段完整,开放阅读框为615bp,编码204个氨基酸,与已发表地衣芽孢杆菌脂肪酶基因(GeneID:3098655)相比,核酸序列相似为99.67％,推导编码氨基酸序列相似性为99.02％,该基因的获得为其异源表达及相关研究奠定了基础.     

双孢蘑菇分子生物学研究进展

对近年来利用分子生物学技术在双孢蘑菇菌种鉴定、基因分离和克隆、遗传育种和遗传多样性分析上的应用所取得的研究成果进行了综述。     

圆弧青霉脂肪酶基因的克隆和表达

圆弧青霉PG37总RNA甲醛变性电泳呈现真核生物所特有的 2 8SrRNA和 18SrRNA条带 .根据PG37所产碱性脂肪酶 (LipPC)N末端氨基酸残基序列和真核生物mRNA在 3’端具有poly(A)等所提供的生物信息 ,采用RT PCR技术扩增了LipPC成熟肽和 3’非编码区的cDNA片段 ,并将该PCR产物直接克隆至pUCm T载体中 .序列分析表明 ,LipPC含有 2 5 8个氨基酸残基 ,其中保守的五肽序列为Gly His Ser Leu Gly .进一步采用ClonTech公司的SmartTM PCRcDNA文库构建试剂盒 ,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段 ,从而完成了LipPC完整cDNA的分析测定 .最后将编码完整脂肪酶蛋白质的cDNA克隆至 pGEX 5X 3表达载体中 ,SDS PAGE检测结果表明 ,大肠杆菌BL2 1所表达的GST LipPC融合蛋白质分子质量约为 5 3ku .     

乙酸异戊酯高产菌株脂肪酶基因Lip2的克隆及表达研究

通过PCR扩增了乙酸异戊酯高产菌Loq-c的脂肪酶基因Lip2,其序列与Gene Bank中的Candida cylindracea Lip2 gene（序列号X64704.1）的序列相似度最高,为89%。构建原核表达载体p QE-lip2,转化大肠杆菌E.coli BL21（DE3）,获得了重组菌BL21（p QE-lip2）。经过表达条件探索,用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,脂肪酶Lip2原核可溶表达最佳条件为:诱导温度30℃,IPTG使用浓度为1.5 mmol/L,150 r/min转速的条件下诱导表达5 h。      

微生物嗜热脂肪酶研究进展

微生物发酵制备脂肪酶是工业化生产脂肪酶的主要途径.由于工业化生产对脂肪酶的热稳定要求较高,野生菌来源的嗜热脂肪酶已无法满足工业化的高需求.来源于微生物的脂肪酶在工业中的应用逐渐成为生物工程研究的热点,构建高表达且酶表征好的产酶菌株是目前研究的重点.因此,该文就近年来嗜热脂肪酶产生菌及其表征、异源表达系统、结构改造、分离...     

脂肪酶的研究进展

对脂肪酶菌种来源、催化活性中心构成对酶活性的影响及工业应用的研究进展作一综述。     

铜绿假单胞菌脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆与表达

利用PCR方法从分泌脂肪酶的铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增得到了脂肪酶基因,并测定其核苷酸序列,利用基因重组技术构建了脂肪酶基因的分泌表达载体,并在枯草芽孢杆菌中进行了分泌表达。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,表达蛋白占发酵液中蛋白的25%,采用NaOH碱滴定法测定其发酵液酶活为15.26U/mL。     

脂肪酶的研究进展

随着生物技术的日新月异，酶固定化技术，界面酶学和非水酶学研究与应用的突破性进展，使得人们对微生物脂肪酶产生了极大的兴趣。论述脂肪酶的种类和高产菌珠以及脂肪酶的一些性质和应用。     

微生物脂肪酶研究及其在食品中应用

微生物脂肪酶主要来源于细菌和真菌,具有广泛应用价值。该文对微生物脂肪酶性质及其在食品中应用进行综述。     

微生物脂肪酶催化及其性质研究进展

该文分析微生物脂肪酶催化机制,综述脂肪酶基本酶学性质,包括最适作用温度、最适pH值、抑制剂及反应介质影响等,并对其研究现状和今后研究重点进行讨论。     

Synthesis of Low Molecular Weight Flavor Esters Using Plant Seedling Lipases in Organic Media

Powders from germinated seedlings of wheat, barley, rapeseed, maize, and linola synthesized low molecular weight flavor esters in an organic medium (hexane). Direct esterification of acetic, butyric, and caproic acids, with ethanol, butanol, isopentanol, or (Z)-3- hexen-l-ol was achieved. Of the systems examined, germinated rapeseed showed the highest degree of flavor synthesis. (Z)-3-hexen-1-yl butyrate and (Z)-3-hexen-1-yl caproate were produced with yields of about 96%. Butyl butyrate, isopentyl butyrate, butyl caproate and isopentyl caproate were produced at 80% yield. Linola seedling powder gave yields of ≤63% for ethyl acetate and butyl acetate. More moderate (40%) yields were obtained with barley and maize seedling powders. Rapeseed seedling powder is a convenient and inexpensive catalyst for preparing low molecular weight esters in organic medco.     

Tween80诱导下米曲霉3．5232产胞内脂肪酶的研究

米曲霉3．5232在Tween80诱导下,相比于葡萄糖作为碳源的培养条件,米曲霉在细胞壁、细胞膜及细胞质中均可以诱导产生分子质量为27kDa的脂肪酶,而在细胞质中又有分子质量为36kDa的脂肪酶表达。利用硫酸铵沉淀,DEAE Sepahrose FastFlow离子色谱交换及SephadexG．75凝胶色谱的分离方法,从米曲霉细胞质中分离纯化了分子质量为36kDa的脂肪酶。最终纯化倍数为42．45,产率为0．12％。     

Acceleration of Cheddar Cheese Lipolysis by Using Liposome-entrapped Lipases

ABSTRACT: Two types of lipase (Palatase M and Lipase 50) were encapsulated in liposomes with trapping efficiencies of 35.9 and 40.3%, respectively. The lipases were incorporated into cheese milk at levels of 0.2, 0.5, and 1.0 lipase units/g fat. Treated cheeses had higher moisture and lower protein, fat, and ash contents than the control cheese and they were less firm, but more elastic and cohesive, than the control cheese. Production of free fatty acids was accelerated by the addition of encapsulated enzymes. Cheeses with up to 0.5 lipase unit/g milk fat had slightly better flavor intensities than control cheese. Cheeses with the highest level of Palatase M and Lipase 50 developed a pronounced soapy off-flavor after 2 and 3 mo of ripening, respectively.     

黑曲霉低聚葡萄糖氧化酶的分子克隆与生化特征

低聚葡萄糖氧化酶能够氧化低聚葡萄糖末端残基生成相应的低聚糖酸,在低聚糖酸的制备、食品、化工等方面具有潜在的应用价值。从黑曲霉基因组中发现1个疑似编码低聚葡萄糖氧化酶开放读框,共编码473个氨基酸序列,包含2个保守结构域(FAD结合域和黄素结构域)和4个活性位点(His80、Cys141、Asp377和Try428);在毕赤酵母中表达的重组酶蛋白大小为61 kDa,比酶活0.33 U/mg。重组酶的最适作用温度和pH值分别为75℃和9.0;在55～85℃和pH 5.0～9.0范围内孵育4 h,仍能保持70%以上的酶活;Mn²⁺和Fe³⁺分别对酶活具有最强的激活和抑制作用。该酶的K_m和V_max为0.48 mmol/L和2.22μmol/(L·min),对麦芽三糖、麦芽四糖和麦芽五糖具有相对较高酶活。     

蛋白质分子生物学在大米蛋白研究上的应用

介绍了蛋白质分子生物学在大米蛋白研究上的应用,包括大米蛋白一级、二级、三级和四级结构研究现状和大米陈化过程中大米蛋白的变化,以及大米蛋白特性(溶解性、起泡性和泡沫稳定性等)研究状况.     

红景天苷生物合成的细胞与分子生物学研究进展

红景天苷因其抗氧化、抗疲劳、延缓衰老等生物学功能成为当今天然产物研究的热门方向。本文综述了红景天苷生物合成途径及途径中的相关酶与基因;利用红景天愈伤组织和细胞培养生产红景天苷的方法,通过遗传转化获得毛状根生产红景天苷等细胞与分子生物学的研究。最后提出细胞工程和基因工程是解决药源缺乏的理想途径之一。     

花生果种皮特异表达基因AhPSG13的克隆和表达研究

为了克隆在花生果种皮中特异表达的基因,本实验从花生果皮种仁抑制消减文库中筛选出一个277bp的EST序列并进行研究,通过构建花生果皮全长cDNA文库,获得此目的基因G13的全长为1369bp,开放阅读框从第28个碱基始至1122个碱基止,预测分子量为39865.59,等电点5.73。生物信息学分析表明该基因编码的蛋白具有4个跨膜结构域和多个活性位点,可能与细胞内DNA转录有关;该蛋白与多种豆科作物的半胱氨酸蛋白酶具有较高同源性,推测为花生半胱氨酸蛋白酶相关基因;RT-PCR研究该基因表达,结果显示该基因在果种皮中特异表达,于30d果皮中表达量最大。本研究克隆的AhPSG13基因序列已经登陆到GenBank,登录号为FJ475061。