蛋白酶的生产和应用(上)

为充分了解蛋白酶,该文从蛋白酶的分类与底物专一性、微生物蛋白酶的生产等方面介绍了蛋白酶。蛋白酶按活性中心可分为丝氨酸蛋白酶、天门冬氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和金属蛋白酶;按最适pH值来分又分酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。微生物蛋白酶的产生与微生物生长有关,合成受分解代谢阻遏的调控和底物厦其类似物的诱导。并介绍了生产蛋白酶的微生物。     

响应面法优化紫贻贝蛋白酶解工艺条件

分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶7种蛋白酶对紫贻贝蛋白的酶解工艺条件进行研究。根据水解度和感官评定的结果,确定中性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶可以作为紫贻贝蛋白酶解的外加蛋白酶。将上述4种蛋白酶进行两两复配,通过试验确定复合蛋白酶与中性蛋白酶按1:1进行复配,可作为紫贻贝蛋白酶解的最适复配酶。采用响应面优化分析得出复配蛋白酶最佳酶解条件为酶解时间2h、pH7、酶解温度50℃、酶添加量0.4%,在此条件进行实验,测得水解度为70.25%,游离氨基酸总量增加了388.46%。     

脱脂油菜饼粕中蛋白质的分步酶水解研究——(Ⅱ)蛋白酶的筛选

本文对不同蛋白酶对脱脂油菜饼粕中蛋白质的水解作用及水解产物的风味作了初步研究.结果表明:在6种蛋白酶中,Alcalase的氮收率最高,其次是HAP碱性蛋白酶、1398中性蛋白酶、Flavourzvme,537酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶的较低;Flavourzyme的水解产物的水解度最高,而HAP碱性蛋白酶和1398中性蛋白酶水解产物的水解度较低.HAP碱性蛋白酶、Alcalase、1398中性蛋白酶的水解产物有较强的苦味,木瓜蛋白酶和537酸性蛋白酶水解产物口感平淡,Flaavourzyme水解产物无苦味.     

复合蛋白酶提高谷朊粉溶解度的研究

利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶和复合蛋白酶分别水解谷朊粉,发现复合蛋白酶水解谷朊粉水解度较大,水解后分子量较小,且后续蛋白回收率较大,因此选用复合蛋白酶作为后续谷朊粉改性用酶。     

酶法水解梅鱼蛋白的实验研究

主要研究了碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶对小梅鱼的水解作用。采用正交试验,详细比较了温度、酶浓度、水解时间、酶比例对鱼蛋白水解度的影响。结果表明:单酶最佳水解酶为碱性蛋白酶,其水解条件:温度60℃,加酶量0.3%(以蛋白含量计),时间5h,水解度达51.02%;碱性蛋白酶与复合蛋白酶双酶的最佳水解条件:碱性蛋白酶与复合蛋白酶比例为3∶1,温度为60℃,加酶量0.3%,时间5h,水解度达57.03%;碱性蛋白酶、复合蛋白酶与风味蛋白酶三酶的最佳水解条件:碱性蛋白酶与复合蛋白酶比例为3∶1,温度60℃,加酶量0.3%,反应5h后添加风味蛋白酶,其反应条件:加酶量0.3%,温度60℃,时间为6h,水解度达62.57%。     

五种蛋白酶对牡蛎酶解产物滋味特性的影响

以牡蛎为研究对象,在水解度一致的情况下,探究胰蛋白酶、动物蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶对牡蛎酶解产物感官、肽分子量和游离氨基酸的影响。结果表明:五种酶解产物均具有较强的鲜味。碱性蛋白酶酶解产物在五种酶解产物中整体感官评价最佳。分子量<5 kDa肽比例从大到小是胰蛋白酶(74.99%)、动物蛋白酶(73.44%)、中性蛋白酶(71.53%)、碱性蛋白酶(68.46%)和风味蛋白酶(58.77%)。五种酶解产物中游离氨基酸百分比均呈现出谷氨酸百分比最高、组氨酸百分比最低的特点。游离氨基酸总量从高到低分别为胰蛋白酶(22.816 mg/g)、中性蛋白酶(20.775 mg/g)、风味蛋白酶(20.530 mg/g)、动物蛋白酶(16.287 mg/g)、碱性蛋白酶(16.232 mg/g)。胰蛋白酶、动物蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶酶解产物中TAV大于1的游离氨基酸数量分别为10、8、8、9和11种。5种蛋白酶酶解产物中,TVA值最大的氨基酸均是谷氨酸。     

酶法制取罗非鱼动物蛋白水解液的研究

利用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶对罗非鱼肉进行水解制备水解动物 蛋白,以水解度(DH)为指标对水解过程进行分析,选取中性蛋白酶作为适宜的单酶并研究其酶法水解最适宜的工 艺条件。为进一步提高水解度,进行了中性蛋白酶与酸性蛋白酶复合酶解的研究。     

蓖麻限制性酶解蛋白功能特性和抗氧化活性研究

目的研究蓖麻限制性酶解蛋白的功能特性和抗氧化活性,为进一步开发利用蓖麻蛋白提供一条新途径。方法以蓖麻子为原料,通过粉碎、脱脂、乙醇洗涤、沸水脱毒、冷冻干燥等操作步骤制备蓖麻浓缩蛋白,再分别用碱性蛋白酶(alcalase)、风味蛋白酶(flavourzyme)、复合蛋白酶(protamex)、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解得到5种蓖麻限制性酶解蛋白,并进行功能性质和抗氧化活性研究。结果蓖麻浓缩蛋白色泽洁白、无异味,其蛋白含量为73.08%,脂肪含量为1.13%,是一种优质的植物蛋白;蓖麻浓缩蛋白经蛋白酶限制性酶解后功能性质和抗氧化活性增加,功能性质大小顺序为:复合蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶,抗氧化活性大小顺序为:复合蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶。结论采用复合蛋白酶限制性酶解蓖麻蛋白,可得到功能特性和抗氧化活性都较好的限制性酶解蓖麻蛋白。     

制备芝麻抗氧化肽的蛋白酶筛选

研究了菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶2709和Alcalase蛋白酶分别酶解芝麻蛋白制备芝麻抗氧化肽,测定多肽产率、水解度并评价抗氧化活性,以多肽产率和抗氧化活性为参数采用逼近理想解排序法对酶解物进行排序,确定适宜制备芝麻抗氧化肽的蛋白酶。结果表明:蛋白酶品种差异会显著影响芝麻抗氧化肽的制备效果;在加酶量相同时,碱性蛋白酶2709、Alcalase蛋白酶、胰蛋白酶酶解芝麻蛋白能力强,多肽产率高,且抗氧化活性强;根据与最优向量距离总和,用于制备芝麻抗氧化肽蛋白酶的适宜性由高到低依次为碱性蛋白酶2709、Alcalase蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶。     

葵花籽粗油体中内源性蛋白酶系的性质探究以及鉴定

通过电泳探究葵花籽粗油体中内源性蛋白酶系的水解性质,以及用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）鉴定内源性蛋白酶的种类。结果表明,油质蛋白在pH 4~8水解速度相对较快,22 kDa球蛋白在pH 3~5水解速度相对较快,35 kDa球蛋白在pH 4~8水解速度相对较快。葵花籽粗油体中内源性蛋白酶系在pH 4、50 ℃水解速度相对最快。通过抑制剂实验发现,在pH 4下,葵花籽粗油体中有金属蛋白酶类、天冬氨酸蛋白酶类、丝氨酸蛋白酶类的酶活表征,几乎无半胱氨酸蛋白酶酶活的存在。通过LC-MS/MS分析发现,葵花籽粗油体中存在金属蛋白酶类、天冬氨酸蛋白酶类和丝氨酸蛋白酶类和天冬氨酸蛋白酶类抑制剂、丝氨酸蛋白酶类抑制剂以及半胱氨酸蛋白酶类抑制剂。研究结果为利用内源性蛋白酶类进行水相加工提供了理论基础。     

蛋白酶及其活力的测定

蛋白质是生物生长繁殖氮源的重要来源,蛋白质为复杂大分子物质。蛋白质被蛋白酶在生化反应中水解为多种α-氨基酸等,才可被机体吸收或被微生物利用。蛋白酶分解能力大小的指标是蛋白酶活力的大小。测定蛋白酶活力的大小是评判蛋白酶质量的关键,可用于指导生产（以酿酒生产为例）。同时通过控制蛋白酶活力的影响因素,完善蛋白酶生化反应环境。     

蛋白酶的研究进展

蛋白酶在工业生产和科学研究以及人们的日常生活中都扮演着重要的角色,起着非常重要的作用。目前许多科学研究者都致力于蛋白酶的研究,包括蛋白酶的生产研究和蛋白酶的应用研究,以期提高蛋白酶的产量和拓宽蛋白酶的应用领域来解决更多的与蛋白质相关的生产问题和资源供给问题。文章从蛋白酶的理化性质,蛋白酶的来源及种类,蛋白酶固定化技术的研究以及蛋白酶的应用进行了综述,最后对蛋白酶的研究进行了展望。     

蛋白酶基因的克隆与表达研究进展

蛋白酶在各领域的应用愈加广泛,但其大规模工业生产受到诸多因素制约。利用基因工程技术对蛋白酶基因进行改良和克隆表达,开发高产量、高纯度、高活力的蛋白酶资源成为研究的热点。本文对蛋白酶的分类、结构与功能、菌种选育等进行了概述,同时分析了蛋白酶基因在原核和真核生物中的克隆与表达研究进展,并对未来蛋白酶基因工程的发展趋势进行了展望。     

酶法脱除蛋白水解产物苦味的研究进展

本文主要概述了蛋白酶解产物苦味形成机理、常用的苦味脱除方法、毛霉蛋白酶的特性。并探讨了酶法脱苦的方法 :即利用双菌种协同发酵生产的高活力复合蛋白酶降解蛋白 ,达到消除蛋白水解产物苦味的目的。     

Actinomucor elegans、Aspegillus oryzae和Rhizopus oligosporus产蛋白酶条件及蛋白酶性质的比较

比较了腐乳生产菌株Actinomucor elegans、豆酱和酱油生产菌株Aspegillus oryzae以及天培生产菌株Rhizopus oligosporus产生蛋白酶的条件和所产蛋白酶的性质。结果表明,不同的菌株产酶条件及蛋白酶的性质有较大的差异:少孢根霉主要产生酸性蛋白酶,在pH2.5-4.0的酸性介质中、32℃条件下培养时产酶能力较强,所分泌的蛋白酶系在pH5.0时酶活力最高,在pH5.0附近最稳定;米曲霉可以产生酸性、中性及碱性蛋白酶,所产生的蛋白酶活力显著高于少孢根霉和毛霉,米曲霉在酸性条件下产酸性蛋白酶能力强,在中性条件下产中性蛋白酶能力强,在碱性条件下产碱性蛋白酶能力强,在28-32℃时产酶能力强,所分泌的蛋白酶系在pH5.0-9.0的广泛范围内有很强的活力,在pH6.0-8.0的范围内稳定性强;毛霉可以产生酸性、中性及碱性蛋白酶,但酶活力明显低于米曲霉,毛霉在中性偏酸性(pH5.5)的介质中产酸性蛋白酶的能力较强,但介质的酸碱度对毛霉产中性及碱性蛋白酶没有影响,在28℃时产酸性、中性和碱性蛋白酶的能力都比较强,毛霉所分泌的蛋白酶系在pH5.0-9.0的广泛pH范围内有活力,在pH5.0-6.0时酶活力最高,在pH5.0-7.0时稳定强。     

Comparative study on the effect of acid and alkaline protease enzyme treatments on wool for improving handle and shrink resistance

Wool is commonly treated with alkaline protease enzyme to improve handle and shrink resistance. The limitations associated with the usage of this enzyme on wool are excessive weight and strength losses and pH sensitive enzyme activity, etc. Wool is generally stable if processed in acidic conditions rather than alkaline conditions. This study explores the possibility of using acid protease enzyme to improve handle and shrink resistance of wool. The acid protease enzyme is applied on acid and alkaline peroxide bleached wool fabrics using optimized process parameters, and the results are compared with alkaline protease enzyme treated wool fabric. The acid protease treated fabrics show 30% higher softness than alkaline protease treated fabrics with 72% and 62% lower weight and strength losses, respectively. The alkaline peroxide bleaching prior to acid protease treatment provides 100% and 67% higher whiteness and shrinkage resistance, respectively, to wool than the acid peroxide bleaching. The action of the enzymes on wool and shrink resistance and handle of the treated fabrics is characterized using SEM, FT‐IR and KES‐F method.     

微生物产蛋白酶的研究进展

蛋白酶是目前应用最为广泛的工业化酶制剂,其产值占世界酶制剂总产值的60%,而工业上超过三分之二的蛋白酶来自于微生物发酵生产。本文对微生物产蛋白酶的工业化生产菌种、高产菌株的选育、酶学性质、分离纯化方法及在食品行业的应用进行了概述,以期对微生物产蛋白酶有更系统地了解,为进一步研究和发掘微生物产蛋白酶,促进蛋白酶的工业化生产奠定基础。     

化学物质对蛋白酶在羊毛减量率及有关方面的影响

考查了金属离子、葡萄糖、蔗糖、甘油、表面活性剂对蛋白酶在羊毛减量率及有关方面的影响.它们在一定条件下能提高蛋白酶对羊毛的减量率,但原因却不同.金属离子的作用主要是提高蛋白酶的活力,葡萄糖、蔗糖、甘油主要是维持蛋白酶在水溶液中高级结构的稳定性,而表面活性剂能降低溶液表面自由能,降低蛋白酶从溶液扩散到羊毛纤维表面的能垒.     

羊毛蛋白酶减量细化的研究

用不同的方法对羊毛进行细化处理，考查了不同蛋白酶制剂、不同处理条件对羊毛细度、减量率、强度的影响。实验表明：碱性蛋白酶对羊毛纤维的减量效果比酸性蛋白酶要好，用蛋白酶与氧化剂同时对羊毛纤维进行处理，在取得较好减量效果时，也对羊毛纤维造成较大损伤，在进行酶处理前，用保护剂对羊毛纤维进行预处理，可以降低羊毛纤维的强力损失。     

杆菌属蛋白酶基因的结构及其应用

本文介绍了杆菌属中蛋白酶基因的结构及其在工业、科学研究中的广泛应用。杆菌属中的蛋白酶基因具有典型的“ｐｒｅ┐ｐｒｏ┐成熟酶前体”编码特征。其中ｐｒｅ┐序列编码信号肽，ｐｒｏ┐序列编码一段为蛋白酶形成具有生物活性的合适构象所需的肽链。ｐｒｅ┐与ｐｒｏ┐序列都在蛋白酶前体从细胞中分泌出来后被切去。具有相同性质的蛋白酶即使来源于不同菌种，在基因结构上仍具有很高的同源性；而性质不同的蛋白酶，即使来自同一菌种，它们在氨基酸组成，在ｐｒｅ┐、ｐｒｏ┐序列上都存在着很大差异。克隆的蛋白酶基因可用以构建具有蛋白酶高表达活性的基因工程菌，也可被用来研究蛋白酶的结构与性能的相互关系，还可被用于构建具有特殊功能的克隆载体。