牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白的生物信息学分析

目的用生物信息学方法分析预测牛奶中主要过敏原α_(s1)-酪蛋白的结构与功能。方法从Genbank搜索α_(s1)-酪蛋白的氨基酸序列,采用多种生物信息学分析手段对该序列进行分析预测,包括信号肽、疏水性、跨膜区、活性位点、B细胞表位、二级结构和三级结构。结果α_(s1)-酪蛋白的1~16位是信号肽,无跨膜区,有3个糖基化位点、5个酪蛋白激酶磷酸化位点、3个蛋白激酶C磷酸化位点。IEDB数据库预测α_(s1)-酪蛋白的抗原区分别为氨基酸的16~29、45~50、52~54、56~70、74~75、77~86、94~104、142~152、173~179和185~210,同时预测构建了α_(s1)-酪蛋白的二级结构和三级结构。结论预测得到的α_(s1)-酪蛋白结构和功能信息,可为牛奶过敏原酪蛋白的致敏机制研究及检测方法建立提供信息基础。     

EGC和EGCG降低αs1-酪蛋白致敏小鼠过敏反应

为研究茶多酚中的表没食子儿茶素(EGC)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的抗αs1-酪蛋白致敏机理,首先用αs1-酪蛋白致敏BALB/C小鼠,在激发阶段用EGC和EGCG给予营养干预,以降低αs1-酪蛋白致敏小鼠的过敏反应。以小鼠体内肥大细胞蛋白酶含量、组胺含量、特异性抗体IgE水平、细胞因子分泌水平以及组织病理学观察为主要指标,评价EGC和EGCG降低αs1-酪蛋白致敏小鼠过敏反应的能力。结果表明:EGC和EGCG均可显著降低过敏小鼠的肥大细胞蛋白酶、组胺、特异性IgE抗体和Th2型细胞因子水平。同时,组织病理学结果显示:EGC和EGCG显著降低肠、胸腺、脾脏和肺的病变程度。本研究结果可为茶多酚调控牛乳过敏原致敏反应发生的路径提供理论参考,未来可从信号转导和基因表达水平方面进一步探讨抗过敏机制。     

包埋固定化酶降解牛奶αs1-酪蛋白过敏性研究

利用海藻酸钠固定化蛋白酶,探求其对牛奶过敏原αs1-酪蛋白的特异性降解。以固定化酶的活力回收率为指标,探究了固定化的条件、固定化酶的部分性质以及固定化酶在去除牛奶过敏原蛋白的应用。结果表明:最优固定化条件为,海藻酸钠质量分数为4.0%,Ca Cl2的质量分数为3.0%,固定化时间0.5 h,固定化酶量为V(海藻酸钠)∶V(酶液)为1∶3,固定化效率达到67.5%;固定后的酶最适反应温度70℃,最适反应p H 10.0,连续使用6次后剩余酶活达到40.0%以上;将固定化酶作用于2.0%脱脂奶粉溶液中,60℃条件下反应25 min过敏原αs1-酪蛋白得到特异性降解。     

基于BALB/C小鼠模型评价牛乳αs1-酪蛋白的致敏特性

目的:评价过敏原的过敏症机理。方法:首先通过口腔灌胃的致敏方式建立αs1-酪蛋白致敏的BALB/C小鼠模型,通过测定小鼠特异性IgE抗体水平进行模型鉴定。评价αs1-酪蛋白对小鼠肥大细胞蛋白酶、组胺、细胞因子水平的影响,并进行临床和病理切片观察。结果:第42天用αs1-酪蛋白大剂量灌胃小鼠后,各组小鼠特异性IgE抗体水平显著升高,都产生不同程度的过敏症状,且中、高剂量组小鼠过敏反应强于低剂量组;以阴性小鼠为对照,致敏小鼠的肥大细胞蛋白酶、组胺、IL-4、IL-5、IL-10和IFN-γ细胞因子含量均显著升高,且随着致敏剂量的增加而增加;组织病理切片结果显示:αs1-酪蛋白中剂量和高剂量组小鼠产生了明显的炎症反应,局部肺泡隔塌陷或增厚,脾脏和胸腺中有淋巴结病灶产生,且小肠黏膜间质有炎细胞浸润。结论:基于BALB/C小鼠模型进一步揭示了αs1-酪蛋白的致敏机理。     

乳状液中αs1-酪蛋白和β-酪蛋白的结构特点及吸附行为

乳状液界面处主要的酪蛋白成分是αs1-酪蛋白和β-酪蛋白.本文主要综述了这两种酪蛋白分子的结构特点并比较其差异,进一步阐述了pH、离子强度、分子聚合、未吸附粒子等因素对其吸附行为的影响.     

榛子主要过敏原Cor h 1单克隆抗体识别抗原表位区域的确定

目的 确定已获得的四株榛子主要过敏原Cor h 1单克隆抗体识别的抗原表位区域。方法 构建谷胱甘肽疏基转移酶 (GST)与Cor h 1不同截短体的表达载体并表达GST-Cor h 1融合蛋白, 采用ELISA和Western blot检测单抗与不同融合蛋白的反应, 并结合DNAstar表位分析软件推知不同单抗的抗原识别表位区域。结果 确定了四株Cor h 1单抗的抗原识别表位区域, 分别是4G7和2H3抗体的抗原表位位于Cor h 1第120~126位氨基酸, 5F2和1G4抗体的抗原表位位于Cor h 1第43~52位氨基酸。结论 四株Cor h 1单抗的抗原识别表位区域的确定, 为Cor h 1的进一步研究和食品安全检测奠定了基础。     

as1-酪蛋白IgE抗原决定簇的识别

以αs1- 酪蛋白氨基酸序列为模板,错位合成αs1- 酪蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定αs1- 酪蛋白IgE 抗原决定簇,分析影响致敏性的关键氨基酸,探讨牛乳过敏机理。结果表明：αs1- 酪蛋白IgE 抗原决定簇有5 条,它们在αs1- 酪蛋白的定位分别为aa21～35、aa26～40、aa91～105、aa141～155、aa186～200。影响αs1- 酪蛋白致敏性的关键氨基酸为组氨酸、谷氨酸、脯氨酸。说明特异性水解抗原决定簇或定点修饰过敏原氨基酸实现脱敏的方法是可行的。     

牛乳αS1-酪蛋白与大豆蛋白交叉过敏原的识别鉴定

为识别牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原,鉴定其致敏特性,揭示交叉过敏机理,首先以牛乳过敏患者血清、αS1-酪蛋白小鼠单克隆抗体为探针,通过免疫印迹方法识别大豆蛋白交叉过敏原,然后通过生物信息学工具比对了交叉过敏原与αS1-酪蛋白的氨基酸序列相似性,进而通过体外消化实验和加热实验探究交叉过敏原的稳定性。结果表明：牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原为β-伴大豆球蛋白α亚基（Gly m Bd 60K）,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳结果表明Gly m Bd 60K在2 min消化完全,并且加热对过敏原的交叉反应性没有影响。     

乳状液中αs1-酪蛋白和β-酪蛋白的结构特点及吸附行为

乳状液界面处主要的酪蛋白成分是αs1—酪蛋白和β—酪蛋白。本文主要综述了这两种酪蛋白分子的结构特点并比较其差异，进一步阐述了pH、离子强度、分子聚合、未吸附粒子等因素对其吸附行为的影响。     

水牛αS1-酪蛋白多态性对马苏里拉干酪品质的影响

目的分析水牛α_(S1)-酪蛋白多态性对马苏里拉干酪品质的影响。方法以α_(S1)-酪蛋白AB型、α_(S1)-酪蛋白BB型和混合组水牛乳样为原料分别制成全脂马苏里拉干酪,比较3组水牛乳样和干酪在组成、功能特性和微观结构等方面的差异。结果α_(S1)-酪蛋白AB型水牛乳在脂肪、蛋白质和总固形物含量上显著高于BB型。制成马苏里拉干酪后,AB型干酪的蛋白质含量显著高于BB型和混合组干酪。BB型和AB型干酪在硬度、咀嚼性和胶黏性上显著高于混合组。结论不同基因型α_(S1)-酪蛋白水牛乳的乳成分存在差异,α_(S1)-酪蛋白多态性与水牛乳马苏里拉干酪的组成、质构和融化特性等存在显著关联。     

牛乳α-乳白蛋白IgE线性表位的关键氨基酸识别

α-乳白蛋白是引起牛乳过敏的主要过敏原之一。识别α-乳白蛋白作用表位及影响致敏性的关键氨基酸,对于揭示α-乳白蛋白致敏机理及低致敏乳制品的开发具有重要的意义。本研究采用固相合成技术合成α-乳白蛋白系列多肽,以牛乳过敏患者血清为探针,通过酶联免疫吸附分析法识别α-乳白蛋白的作用表位和关键氨基酸。结果表明:免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig)E作用表位的氨基酸序列定位为aa1-15、aa6-20、aa46-60、aa71-85和aa101-115。α-乳白蛋白IgE作用表位关键氨基酸为第8位的缬氨酸、第9位的苯丙氨酸、第10位的精氨酸、第103位的酪氨酸、第105位的亮氨酸和第107位组氨酸。本研究可以为过敏原c DNA克隆以激活T细胞、降低IgE结合能力提供重要思路。     

低聚半乳糖糖基化法降低牛乳αs1-酪蛋白抗原性和免疫原性

用等电点沉淀法从牛乳中提取酪蛋白,根据αs-酪蛋白对尿素溶液溶解特性从酪蛋白中提取αs-酪蛋白,并用阴离子交换层析使αs1-酪蛋白与αs2-酪蛋白分离。用低聚半乳糖通过在一定条件下的美拉德反应对αs1-酪蛋白进行糖基化处理,通过竞争ELISA实验检测αs1-酪蛋白糖基化产物的抗原性。结果表明,该糖基化产物的抗原抗体结合常数Kd较αs1-酪蛋白上升3.7倍,即低聚半乳糖糖基化处理使αs1-酪蛋白的抗原性得到显著降低。用动物实验和非竞争ELISA实验检测αs1-酪蛋白糖基化产物的免疫原性,结果显示免疫原性降低19%,该实验证实对降低牛乳αs1-CN抗原性和免疫原性具有显著效果,为开发较理想的、切实可行的新脱敏奶粉生产技术提供了科学依据。     

高效降解牛奶过敏原蛋白酶菌种筛选及其重组植物过氧化氢酶的功能验证

αs1酪蛋白是奶制品中主要的过敏原,为了高效地去除过敏原,从3 000株左右野生菌中筛选获得一株脱敏效果好的枯草芽孢杆菌S7,并分别采用高效液相色谱技术(HPLC)和液相色谱串联二级质谱(LC-MS/MS)分析了 目标菌中关键酶制备的脱敏奶制品的风味与生成的生物活性多肽.通过与另一株枯草芽孢杆菌S21对比后发现,S7具...     

辐照对Pen a1抗原表位免疫原性的影响

辐照处理刀额新对虾中主要过敏原Pen a1,采用SDS-PAGE,MOLDI-TOF MS方法分析辐照处理对虾致敏蛋白Pen a1分子质量的影响,同时利用表位抗体进行免疫印迹及间接竞争ELISA法评估Pen a1中5种抗原表位免疫原性的变化情况。结果显示:与未处理相比,6.7 k Gy辐照处理能够破坏部分Pen a1蛋白结构,导致裂解和聚合现象的发生。5种抗原表位免疫原性均未降低,并有不同程度的增加,其中Epitope1,2,3,4的IC50值约为对照的4/5,Epitope5的IC50值变化不大,说明其对辐照处理较稳定。低剂量的辐照处理不能降低Pen a1抗原表位的免疫原性。     

乳腺特异性人α-乳白蛋白真核表达载体的构建

从正常人血液中提取人基因组DNA.以其为模板,扩增人α-乳白蛋白(α-LA)2.36kb的总DNA序列,经测序鉴定后,将其连接到PSV载体SV40启动子后.构建真核表达载体LA-DNA-psv.扩增牛XS1-酪蛋白5'调控序列约1.2kb的片段.测序鉴定.切去LA-DNA-psv栽体原来的SV40启动子,连接牛αS1-酪蛋白5'调控序列约1.2kb的片段为启动子,构建真核表达载体αS1-LA-DNA-psv.为在动物乳腺中特异高效表达人α-乳白蛋白做准备研究.     

黄曲霉毒素M1模拟表位的筛选和鉴定

目的:从噬菌体表面7肽库中筛选出黄曲霉毒素M1抗原的模拟表位。方法与结果:经过4轮淘选,筛选获得了4个与抗AFM1单克隆抗体具有较高亲和性的阳性噬菌体克隆,编号为A1、A2、A3和A4。间接竞争抑制实验结果表明:当噬菌体滴度为2.5×1010CFU时,噬菌体A1、A2、A3和A4对AFM1与抗AFM1单克隆抗体结合的抑制率分别为41.8%、40.6%、36.7%和37.6%。测定其核酸序列,其中A1、A2为同一克隆,氨基酸序列为LTSFPRH;A3、A4为同一克隆,氨基酸序列为MAPSSWR。结论:从噬菌体7肽库中筛选到2个AFM1的理想模拟表位。     

水牛乳αs1酪蛋白多态性对类蒙特利杰克半硬质 干酪品质的影响

目的分析水牛乳αs1酪蛋白(αs1-cαsein)多态性对类蒙特利杰克干酪品质的影响。方法采用反相高效液相色谱法分析不同水牛乳样品αs1-cαsein的多态性,依据αs1-cαsein多态性制成半硬质类蒙特利杰克干酪,比较其在组成、质构和色差等方面的差异。结果水牛乳αs1-cαsein存在AB和BB两种表型。以混合样品为对照制成类蒙特利杰克干酪后,在干酪成份上,BB型干酪中乳脂肪含量显著低于AB型;在质构方面,BB型干酪的硬度和弹性分别为41.21 N和6.3 1 mm,显著高于AB型(29.45 N,5.56 mm)和混合组(38.21 N,5.25 mm),此外BB型具有更高的胶粘性和咀嚼性;在色泽方面,BB型干酪的B值显著低于AB组,表明黄色程度低于AB型。结论水牛乳αs1-cαsein存在多态性,且αs1-cαsein的多态性会影响类蒙特利杰克干酪的品质。     

牛乳α-乳白蛋白免疫球蛋白G线性表位的关键氨基酸识别

α-乳白蛋白是牛乳中的主要过敏原,开展α-乳白蛋白表位定位及氨基酸特性研究可深入了解过敏原的致 敏机理,有助于更好地认识免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）在乳过敏反应中的作用,为制备低过敏乳制 品提供理论指导。本研究采用丙氨酸免疫表位扫描技术识别α-乳白蛋白的关键氨基酸,即用牛乳过敏患者血清中 IgG识别α-乳白蛋白系列合成的多肽,筛选作用表位,然后用丙氨酸依次取代作用表位的氨基酸合成新的多肽,以 牛乳过敏患者血清池为抗体识别关键氨基酸。结果表明：α-乳白蛋白IgG作用表位的氨基酸序列定位为aa6～20、 aa21～35、aa36～50和aa86～100;关键氨基酸为第9位的苯丙氨酸、第15位的亮氨酸、第24位的脯氨酸、第26位的 色氨酸和第32位的组氨酸。     

牛乳主要过敏原αS1-酪蛋白的纯化鉴定及其多克隆抗体的制备

目的:从牛乳酪蛋白中纯化获得α_S1-酪蛋白并对其进行综合鉴定,以及制备特异性识别α_S1-酪蛋白的兔多克隆抗体。方法:采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析色谱对α_S1-酪蛋白进行分离纯化,利用酪蛋白的理化性质（等电点和含量）、免疫学技术和质谱技术对纯化的α_S1-酪蛋白进行综合鉴定,然后通过透析和冷冻干燥获得高纯度的α_S1-酪蛋白,最后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并分析其特异性。结果:在4种酪蛋白中,α_S1-酪蛋白在阴离子交换层析色谱中的出峰时间最晚、峰面积最大,在电泳图中的位置最高,最终获得纯度高达94.26%的α_S1-酪蛋白,得率为27.19%。免疫5次后,两只兔子的抗血清效价分别为128万和32万,抗血清除了与大豆蛋白存在轻微交叉反应（<0.25%）外,与α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、蛋清蛋白、花生蛋白均无交叉反应,表明特异性高。结论:本研究制备了高纯度的α_S1-酪蛋白及其高特异性的多克隆抗体,为过敏原蛋白的纯化与综合鉴定提供了思路,为α_S1-酪蛋白免疫学检测方法的建立提供了物质基础。     

花生主要过敏原Ara h 1线性B细胞表位的预测及鉴定

花生过敏由于其高致敏率和致敏严重性而引起了人们的广泛关注。Ara h 1是花生中的主要过敏原,属于Cupin超家族,通过抗原表位识别结合免疫球蛋白E引发花生过敏。本研究采用生物信息学分析花生主要过敏原Cupin超家族Ara h 1线性B细胞表位氨基酸组成,及其与Ara h 1二级、三级结构之间关系,通过质谱分析Ara h 1氨基酸序列中的抗消化肽段,并分析抗消化肽段与预测线性B细胞表位的关系。结果表明,Ara h 1的线性B细胞表位富含亲水性氨基酸和带电氨基酸;其二级结构没有明显的分布规律,具有一定的回转折叠结构;分析Ara h 1三级结构发现,表位主要位于单体之间的疏水相互作用区域,部分表位埋入三聚体构象内部;Ara h 1抗消化序列与表位之间存在部分重叠。综上,质谱检测体外模拟胃肠道消化肽段并结合表位生物信息学分析可以作为鉴定Cupin超家族线性B细胞表位的新方法。