一株酸性淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质研究

用含有淀粉的选择培养基,通过透明圈法筛选到一株产酸性淀粉酶的菌株,其发酵液酶活力达到123U/mL。通过形态观察。生理生化实验和16S rDNA序列分析等方法初步鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus lincheniformis BW-2。对其产生的淀粉酶的酶学性质进行分析发现,该菌株产生的淀粉酶最适反应温度为70℃;最适反应pH为4.5,同时具有较好的热稳定性和pH稳定性;Ca2+和Mg2+对该酶有激活作用,Mn2+和Cu2+对该酶有抑制作用,抑制剂PMSF(苯甲基磺酰氟)及DTT(二硫苏糖醇)对该酶活力影响较小。通过PAGE分析发现BW-2产生的淀粉酶与已知热稳定淀粉酶分子量或结构可能存在差异。Bacillus lincheniformis BW-2是一株具有研究开发潜力的产酸性淀粉酶的菌株。     

一株酸性淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质研究

用含有淀粉的选择培养基,通过透明圈法筛选到一株产酸性淀粉酶的菌株,其发酵液酶活力达到123U/mL。通过形态观察。生理生化实验和16S rDNA序列分析等方法初步鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus lincheniformis BW-2。对其产生的淀粉酶的酶学性质进行分析发现,该菌株产生的淀粉酶最适反应温度为70℃;最适反应pH为4.5,同时具有较好的热稳定性和pH稳定性;Ca2+和Mg2+对该酶有激活作用,Mn2+和Cu2+对该酶有抑制作用,抑制剂PMSF（苯甲基磺酰氟）及DTT（二硫苏糖醇）对该酶活力影响较小。通过PAGE分析发现BW-2产生的淀粉酶与已知热稳定淀粉酶分子量或结构可能存在差异。Bacillus lincheniformis BW-2是一株具有研究开发潜力的产酸性淀粉酶的菌株。      

产蛋白酶菌株的鉴定及酶学特性

通过形态学观察、生理生化实验以及16S rDNA基因序列分析对分离自味精糖化废渣中的产蛋白酶菌株NX-PB17进行鉴定,并对其蛋白酶特性进行研究。结果表明：菌株NX-PB17为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其蛋白酶最适酶解温度为50℃,最适pH值为7.0,并且具有良好的热稳定性和pH值稳定性。     

海洋源蛋白酶产生菌筛选及酶学特性的初步研究

从海洋源鱿鱼中筛选高产蛋白酶菌株。通过检测蛋白酶产生水解圈结合蛋白酶活性测定的方法筛选高产蛋白酶菌株,采用PCR技术对筛选菌株进行16S rRNA鉴定,并构建目的菌株的系统发育树,同时研究粗蛋白酶的酶学特性。结果表明:筛选得到的10株产蛋白酶活力较高的菌株,经鉴定分别属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、普罗威登斯菌属(Providencia sp.)和假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。其中SW5菌株产酶活性最高达257.67±2.44 U/mL,为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。该菌株所产粗蛋白酶的酶学特性研究发现,其最适pH为8.0,最适温度为40℃,终离子浓度为1 mmol/L时Mn2+、Ba2+和Ca2+对该蛋白酶活性有较高的激活作用,而Fe~(2+)和Zn~(2+)能明显抑制该蛋白酶活性。     

酸性脲酶产生菌诱变育种、产酶条件及粗酶提取的研究

从土壤中分离到一株产酸性脲酶的菌株，该菌株经紫外线（UV）照射，硫酸二乙酯（DES）处理，UVDES复合诱变及培养条件优化，酶活达到2.26u/mL，经诱变后的菌株，在pH6.5、温度28－30℃、尿素深度为5g/100mL时产酶最佳。Ni^2 、Mn^3 对产脲酶有促进作用；Ca^2 、Cu^2 、Zn^2 、Al^3 对产脲酶没有影响；Fe^3 、Ag^ 对产酶有抑制作用，Hg^2 对产酶有强抑制作用，该菌株所产脲酶为胞内酶，经超声波破碎后，用pH6.5，浓度0.05M柠檬酸缓冲液抽提，再用乙醇分级沉淀法获得粗酶液。     

一株α-淀粉酶产生菌的分离、鉴定及产酶条件研究

为获得具有高产α-淀粉酶能力的菌株,从不同土壤环境中分离产酶菌株,对其进行分类鉴定和产酶条件研究。通过透明圈法初筛、3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)法复筛分离得到产α-淀粉酶能力较强的菌株,利用形态学和生理生化反应特征,结合16S rDNA序列分析,对其进行分类鉴定;通过单因素试验和正交试验确定该菌株的最佳产酶条件。结果表明:从土壤环境中分离得到一株产α-淀粉酶菌株MF04,初步鉴定为蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus),其初始产酶活力为32.5 U/mL;产酶条件试验结果显示其最适培养温度为37℃,初始pH值为6.0,培养时间为72 h,经优化后液体发酵得到的粗酶液酶活力为60.2 U/mL,是优化前的85.2%。因此分离得到菌株MF04在工业生产中具备潜在开发价值。     

半纤维素降解菌J-25的筛选、鉴定及产酶特性研究

以腐烂的木材为菌源,经过初筛、复筛,采用半纤维素水解圈法和胞外酶测定法进行菌株筛选获得一株半纤维素高效降解菌株J-25。通过对菌株J-25的16S r DNA进行测序分析,鉴定为纤维单胞菌属命名为Cellulomonas sp.J-25。对菌株J-25进行产酶条件和酶学性质研究,结果表明:菌株J-25发酵产酶的优化条件为:培养时间为60 h、温度30℃、初始p H为7.0、麸皮浓度为20 g/L、酵母粉浓度为10 g/L、装液量为50 m L（250 m L三角瓶）,半纤维素酶活性可达到62.8 U/m L。最适酶反应条件为:p H为6.5、温度为40℃、底物浓度为15 g/m L、反应时间为30 min。这些将为半纤维素的生物降解提供实验依据。      

果胶酶产生菌的筛选鉴定和酶学性质研究

以果胶为唯一碳源,从海南采集的土样中筛选出一株能够利用果胶生长并产生果胶酶的菌株,采用3,5-二硝基水杨酸定糖法测定果胶酶酶活,通过生理、生化特性以及16S rRNA基因序列分析比对对菌株进行鉴定,并对其所产果胶酶的酶学性质进行研究。结果表明,分离筛选出一株果胶酶产生菌,编号为YY01,被鉴定为Bacillus niabensis。菌株YY01所产果胶酶的最适pH值为7.0,最适反应温度为45 ℃;在pH 10.0孵育12 h,仍有52.5%残余酶活力,50 ℃孵育6 h,仍有64%的残余酶活力。结果显示该酶有较好的耐碱性及较高的热稳定性,具有应用于果汁加工和胡椒脱皮的应用前景。     

一株产酸性α-淀粉酶产生菌的分离鉴定及所产酶学特性的初步研究

从食醋厂内土壤中分离得到一株产酸性α-淀粉酶能力较强的菌株,通过形态学和ITS区基因序列分析的手段对其进行鉴定,对其生长温度及发酵液初始p H值等生物学特性进行分析,并对其所产酶的特性进行研究,研究结果表明:通过形态学及分子生物学鉴定为黑曲霉,并命名为Aspergillus niger ZTL;菌株最适生长温度为35℃;最适产酶温度为40℃;最适生长p H值为6.0,最适产酶p H值为5.0;所产α-淀粉酶在p H值4.5~7.0时酶活性保持在80%以上;该酶的最适作用温度范围是40~50℃;通过测定该酶的热稳定性表明,在40~50℃时酶较稳定,但在60℃时保温一段时间后,酶稳定性显著下降;Ca2+对该酶有一定的激活作用,Na+对该酶的活性作用不明显,而Mg2+、Fe2+和Cu2+对酶的活性均有比较明显的抑制作用;该酶的Km值为4.52×10-3g/L。从而确定该菌株所产的α-淀粉酶具有具有很大的开发价值。     

鲍鱼肠道海带降解菌株的筛选、鉴定及粗酶学性质研究

从皱纹盘鲍肠道中筛选出能够高效降解海带的菌株,并进行菌种鉴定及粗酶学性质研究。首先以褐藻酸钠为唯一碳源,筛选出褐藻胶裂解酶酶活较高的YY7菌株,通过16S rRNA初步鉴定YY7为弧菌属菌株;通过各种选择性培养基鉴定,YY7菌株不具有溶血性,产蛋白酶和淀粉酶,菌株生长速度快,其褐藻胶裂解酶活力在20 h达到最高54. 31 U/mL,最适温度为35℃,最适pH 7. 5,Na~+、Mg~(2+)、K~+等金属离子对褐藻胶裂解酶活力具有促进作用,Fe~(2+)和Cu~(2+)起抑制作用。利用YY7菌株发酵液降解海带粉,降解得率可达65%以上,降解效果佳。     

一株产酯化酶菌株的分离鉴定及产酶

从浓香大曲中分离筛选得到一株产酯化酶的菌株,鉴定并研究了其产酯化酶的特性。利用微生物分离技术筛选得到产酯化酶的红曲霉FBKL3.0018,根据形态特征、培养特征、生理生化特征并结合分子生物学方法进行鉴定。结果鉴定菌株FBKL3.0018为红曲属的紫色红曲霉(Monascuspurpureus)。菌株的酯化力较高,可用于生产酯化酶制剂和高酯化大曲等。     

脂肪酶产生菌产酶条件的研究

对脂肪酶产生菌进行了筛选,并对优势菌株杆菌的产酶条件进行研究.研究包括培养基组成(碳源、氮源、无机盐)、初始pH值等影响因素.通过正交试验,获得了较为优化的脂肪酶产酶条件,获得的最大酶活为68.58 U/mL.     

豆豉溶栓酶工程菌的发酵条件及重组溶栓酶的分离纯化

对豆豉溶栓酶工程菌株WB DFE5进行了摇瓶发酵条件的研究 ,确定了发酵的优化条件为 :可溶性淀粉 2 % ,酪蛋白 2 % ,大豆蛋白胨 0 5 % ,酵母粉 0 15 % ,K2 HPO40 2 5 % ,KH2 PO40 0 5 % ,CaCl2 0 0 2 % ,MgSO40 0 5 % ,pH7 0。通过硫酸铵分段盐析、离子交换和凝胶过滤 ,从 1L工程菌株WB DFE5的发酵液中分离纯化出 12 5mg重组豆豉溶栓酶 ,酶的比活为 5 918 7IU/mg。     

大豆异黄酮糖苷转化酶产生菌株的筛选及培养条件的研究

通过菌株筛选,确定了黑曲霉3866为糖苷转化酶高产菌株。产酶最适培养基配方为:麸皮4%, (NH4)2SO40.1%,KH2PO4 0.1%,抗坏血酸0.1%,MgSO4 0.1%,水杨苷0.05%。产酶的最佳培养条件为:发酵起始pH值6.0,发酵温度30℃,摇床160r/min,发酵时间84h。酶活力最高可达152.45U。     

一株蓝色素产生菌的鉴定及色素特性

为了确定一株筛选自低温污水的产蓝色素细菌B9-8分类地位和其色素的特性,通过对菌株的形态观察和16S rRNA基因序列比对分析,确定菌株B9-8归属为Janthinbacterium属菌,可能为新种。色素特性研究表明:该蓝色素在可见光区579nm波长处有最大吸收峰,具有较好的水溶性和有机溶性,较好的热稳定性和酸碱稳定性,但光稳定性较差,在自然光条件下放置3d色素损失61.3%。低浓度金属离子对色素的影响不大,而高浓度的金属离子,尤其是Al3+对色素的影响较大,损失率达73.1%,推测此色素极可能为紫色杆菌素。     

1株纤溶酶菌株的筛选鉴定及提高产酶量的方法研究

从齐齐哈尔市拜泉县的自酿农家豆酱制品中分离筛选出1株产纤溶酶菌株HDBF-DJ3,对其进行菌体、菌落、生理生化特征分析,并结合16S rDNA序列分析结果,鉴定其为枯草芽孢杆菌.经亚硝基胍诱变筛选得到突变株HDBF-DJ3N7,其纤溶酶活力为368.78 IU/mL,是出发菌株的2.1倍.对菌株HDBF-DJ3N7进行连续10代的培养,结果表明该突变株的高产纤溶酶特性能够稳定遗传.该菌株有望应用到生产领域.     

Characterization of a Bacteriocin from Lactobacillus plantarum Strain LR/14

A rhizospheric isolate of a lactic acid bacterium, identified as Lactobacillus plantarum strain LR/14, was characterized to produce a bacteriocin. A supernatant from 20h culture growth was used as the source of bacteriocin. The antimicrobial compound showed remarkable stability at high temperatures (100°C for 30 min and 121°C for 15 min under 15 psi pressure) and to the presence of organic solvents, detergents and surfactants. It was also active in the pH regime of pH 2.0–6.0. Moreover, the compound was stable under different storage temperatures as tested up to 24 months. While antimicrobial function was not lost by catalase or β-glycerophosphate treatment, the same was sensitive to a number of proteolytic enzymes. The crude preparation inhibited not only related strains but also other gram-positive and gram-negative bacteria, such as Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes and urogenic E. coli. Bacteriocinogenic activity co-migrated as a single protein band on tricine-SDS-PAGE with molecular mass of ～3.6 kDa.     

β-1,3葡聚糖酶高产菌株的筛选及其产酶条件研究

从土壤中分离筛选出一株β-1，3葡聚糖酶活较高的菌株，编号为M014，初步鉴定为木霉。研究了碳源、氮源、培养温度与时间等因素对M014产酶的影响。实验结果表明，MOl4在含3％茯苓粉、0．5％酵母膏及一些无机盐的液体培养基中(pH6．0)，于30℃，150r／min振摇培养6d，β-1，3葡聚糖酶活最高，达到4．95U／ml。另外，还就β-1,3葡聚糖酶的酶解条件进行了研究，结果显示，β-1,3葡聚糖酶的最适反应pH为4．5,最适反应温度为60℃.粗酶液在40℃和50℃保温12h，酶活基本稳定，最适反应温度为60℃保温时，酶活迅速下降。     

产蛋白酶波茨坦短芽孢杆菌的鉴定及产酶条件优化

该研究旨在提高一株环境分离菌株的产酶效率,为后续菌株及其蛋白酶的应用提供前期实验基础。通过水解圈法初步检测菌株S8的产蛋白酶能力,并通过16S rRNA序列比对确认其为波茨坦短芽孢杆菌。通过单因素试验确定了最佳培养条件和培养基添加成分。并采用Plackett-Burman设计和最陡爬坡试验对培养条件和培养基进行响应面优化。优化结果显示,在发酵时间为38.70 h、菌液接种量为1.84%（V/V）、发酵温度为35 ℃、酵母粉添加量为23.70 g/L、胰蛋白胨添加量为11.70 g/L、MgSO4添加量为20.20 g/L的条件下,菌株的产酶活力可达到114.79 U/mL,相比优化前提升了209.70%。研究结果为该菌株的后续发酵应用提供了科学数据。     

Purification and Characterization of a Novel Protopectin-Solubilizing Enzyme from Aspergillus niger Z-25

A mutant, Aspergillus niger Z-25 derived from A. niger XZ-131 with N⁺ supplementation, produced a protopectin-solubilizing enzyme (protopectinase). The enzyme was purified to homogeneity by a procedure involving ammonium sulfate fractionation and gel chromatographies on DEAE-Sephadex A-50 and Sephadex G-100 columns. The molecular weight of the protopectinase was estimated at 68.4 KD by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme was stable from pH 3.0 to 7.0 and up to 60°C. The optimum pH and temperature for enzyme activity was 4.0 and 50°C, respectively. The purified enzyme had 268-U/mL PPase (protopectinase) activity on citrus protopectin, and also showed 100-U/mL PGase (polygalacturonase) activity, which catalyzed the hydrolysis of polygalacturonic acid. The Km value for protopectin was 0.215 mg/mL, while the Km value for polygalacturonic acid was 39.09 mg/ml. The PPase/PGase q-value was 2.68, more than 0.5. Therefore the enzyme was considered a novel pectinase and classified as protopectinase.