熊猫豆提取物抑制肿瘤活性及诱导结肠癌细胞Caco-2凋亡机制研究

为了探究熊猫豆的抑制肿瘤活性及其诱导Caco-2凋亡的机制,采用80%丙酮浸提法制备熊猫豆粗提物,通过MTT法测定其对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制效果,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、酶联免疫分析等技术与方法检测细胞周期、DNA及凋亡相关蛋白相对表达量的变化。结果发现,与空白对照组相比,0.1~1.0 mg/m L熊猫豆丙酮提取物对Caco-2细胞增殖有明显的抑制作用,且呈现剂量效应关系,IC50为0.72 mg/m L。0.4、0.6、0.8 mg/m L熊猫豆丙酮提取物处理72 h后的Caco-2细胞,可以观察到典型的凋亡细胞的梯状DNA条带,细胞周期G1期延长,Cyt C、caspase-9、caspase-3蛋白的相对表达量均有显著上升。熊猫豆丙酮能够抑制结肠癌细胞Caco-2增殖,这种抑制作用是通过阻滞细胞周期和诱导线粒体通路介导的细胞凋亡实现的。     

黑李提取物对结肠癌Caco-2细胞增殖和调亡的影响

采用80%丙酮浸提法制备黑李粗提物。通过MTT法测定黑李提取物对Caco-2细胞增殖的抑制效果,Annexin V-FITC/PI双染色法、PI染色法、酶联免疫分析法分别检测细胞凋亡、细胞周期以及凋亡蛋白相对表达量变化,探究黑李提取物对Caco-2细胞凋亡信号转导通路的影响。与空白对照组相比,不同浓度的黑李提取物(0.2~2.0 mg/m L)对Caco-2细胞增殖均有明显的抑制作用,随浓度的增大,Caco-2细胞凋亡率明显升高,呈现显著的剂量-效应关系。提取物处理细胞72 h后,使细胞周期G1期和G2延长,Cyt C、caspase-9、caspase-3等凋亡蛋白的相对表达量明显上升。提示黑李提取物通过阻滞细胞周期,诱导线粒体通路介导的细胞凋亡。本结果为将黑李开发为抗癌功能性食品提供了科学依据。     

西兰花芽提取物体外抗肿瘤活性及作用机制研究

西兰花芽是多种生物活性成分的良好来源,营养价值极高,近年来被广泛研究。该文对西兰花芽提取物的抗肿瘤活性及其潜在机制进行探讨。通过观察细胞形态学变化,发现西兰花芽提取物可使结肠癌Caco-2细胞和肝癌HepG2细胞密度下降,且细胞出现凋亡状态。细胞增殖抑制率结果表明西兰花芽提取物能够抑制两种肿瘤细胞增殖,且呈剂量依赖性,CaCl2组对 Caco-2和 HepG2细胞半数抑制浓度分别为（0.030±0.002）、（0.043±0.004）mg/mL。通过流式细胞术检测凋亡率,发现西兰花芽提取物可使细胞凋亡比例达到82.95%。活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和线粒体膜电位检测结果表明,西兰花芽提取物可能通过诱导细胞产生ROS,降低线粒体膜电势,促进细胞凋亡,从而抑制Caco-2细胞增殖。     

奇数链脂肪酸抑制脂多糖诱导的Caco-2 细胞炎症反应研究

为明确奇数链脂肪酸（OCFA）与人体健康的关系,采用气相色谱-质谱法（GC-MS）检测分析健康人群和结肠癌患者血清中OCFA的分布特征差异,并采用脂多糖（LPS）诱导的Caco-2细胞炎症模型探究OCFA对炎症的抑制效应,包括对细胞活性、促炎因子基因表达以及脂肪酸组成的影响。结果表明：健康人群中的OCFA（C15∶ 0和C17∶ 0）含量显著高于结肠癌人群;男性以及高龄（59岁以上）结肠癌人群中C15∶ 0和C17∶ 0水平偏低;C15∶ 0和C17∶ 0对细胞活力无影响,C15∶ 0能够显著降低LPS刺激后Caco-2细胞中促炎因子TNF-α、IL-8和iNOS的表达,C17∶ 0能够显著降低促炎因子IL-6、TNF-α、IL-8和iNOS的表达,两种OCFA均能够起到类似于n-3 PUFA缓解炎症刺激的作用;两种OCFA（C15∶ 0和C17∶ 0）能够在肠道细胞Caco-2中吸收并代谢成C17∶ 0、C17∶ 1。综上,OCFA能够调节肠道炎症因子的表达进而抑制肠上皮细胞炎症反应,对肠道健康有潜在的保护作用。     

铁观音茶提取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制

研究铁观音茶提取物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制。用脂多糖作用于RAW264.7细胞,建立炎症模型,并用吲哚美辛和不同浓度铁观音提取物处理,检测NO和IL-6的分泌情况,qPCR检测一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)mRNA相对表达,Western Blot检测炎症相关蛋白激酶(IKKβ),核转录因子κB抑制因子(IκB)、核转录因子κB p65(NF κB p65)及其磷酸化产物的相对表达。结果显示,铁观音茶提取物能显著抑制炎症介质NO分泌和IL-6蛋白表达量(p<0.05),抑制炎症相关基因iNOS、COX-2、TNF-α和MCP-1等表达,并极显著抑制NF-κB信号通路相关蛋白IKKβ、IkB和p65的磷酸化(p<0.01)。以上结果表明,铁观音茶提取物可明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

槟榔多糖对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

采用CCK-8法测定细胞的存活率、Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率,利用蛋白质免疫印迹检测人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)中抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax及细胞间紧密连接蛋白的表达情况,研究槟榔多糖对DMNQ诱发Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果表明：槟榔多糖能显著抑制促凋亡蛋白Bax的表达并同时促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制DMNQ引起的细胞凋亡并减轻内质网应激,显著上调Caco-2细胞紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin 1的表达,维持细胞紧密连接的完整性,即槟榔多糖能显著改善DMNQ诱导的Caco-2细胞氧化损伤。     

地参游离酚对CCl4所致肝细胞损伤细胞凋亡、细胞周期及炎症因子的影响

通过体外实验,研究地参游离酚对CCl₄所致肝细胞损伤细胞凋亡、细胞周期及炎症因子的影响。采用流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的分布,采用试剂盒测定肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素8（IL-8）的含量和天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）活化程度,同时采用免疫组化检测环氧化酶-2（COX-2）、白介素6（IL-6）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白表达水平。结果表明,与模型组相比,地参游离酚能显著降低CCl₄引起的细胞凋亡,影响细胞周期的分布,能显著降低炎症因子TNF-α、IL-8的含量并阻滞Caspase-3的活化程度（P<0.05）,并不同程度降低COX-2、IL-6和iNOS蛋白表达水平（P<0.05）。地参游离酚通过抑制细胞凋亡、影响细胞周期分布和抑制炎症反应保护CCl₄所致的肝细胞损伤。     

皮蛋蛋白水提物在肠道系统中的抗炎作用研究

皮蛋是我国独创的一种传统大宗蛋制品,也是一种良好的"清热去火"食品。以"去大肠火"为导向,运用TNF-α诱导的Caco-2细胞炎症反应模型和DSS诱导的小鼠结肠炎模型考察皮蛋蛋白水提物的体内、外抗肠炎活性。结果表明:皮蛋蛋白水提物(5和10 mg/mL)显著抑制Caco-2细胞IL-8的分泌,下调促炎细胞因子IL-8、TNF-α、IL-6和IL-1β基因的表达,并上调抗炎因子IL-10基因的表达。皮蛋蛋白水提物(150或300 mg/kg BW)可以有效缓解DSS诱导的结肠炎小鼠体重减轻和炎症临床症状,降低促炎细胞因子TNF-α和IL-6的分泌,并下调结肠中促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、MCP-1和IL-17A基因的表达。体内、外试验结果说明皮蛋蛋白水提物具有抗肠炎活性,可有效保护肠道健康。     

酒糟粗提物对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用

为了解酒糟粗提物对人体肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡的影响,首先采用液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）分析酒糟粗提物成分,再利用不同浓度的酒糟提取物分别处理HepG2细胞,采用RTCA检测其对HepG2细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测其对HepG2细胞周期的影响,采用实时荧光定量PCR检测其对CyclinA、CDK2、Bax、Bcl-2基因表达的影响,采用Western Blot检测其对9种凋亡相关蛋白表达量的影响。研究发现浓香型白酒酒糟粗提物主要含有43种物质,酒糟粗提物可明显抑制HepG2细胞的增殖且呈浓度依赖;酒糟粗提物可以显著下调S期相关周期蛋白CyclinA及其激酶CDK2的mRNA及蛋白的表达,同时使抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA及蛋白的表达减少,促凋亡蛋白Bax的mRNA及蛋白的表达增加（P<0.05）;CYTC、Cleaved-Caspase-9及Cleaved-Caspase-3表达量逐渐升高（P<0.05）,Caspase-9、Caspase-3表达量逐渐降低（P<0.05）。结果表明酒糟粗提物含多种活性物质,可抑制HepG2细胞的增殖,并通过激活介导凋亡的线粒体通路诱导肝癌HepG2细胞发生凋亡。     

海参水煮液多糖提取物体外抗炎活性的研究

目的研究海参水煮液多糖提取物(PESCPL)的体外抗炎活性。方法 PESCPL作用于经LPS诱导产生炎症的RAW264.7细胞模型,通过检测其对该模型中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1(IL-1)及白介素-6(IL-6)的分泌水平、NO释放能力、诱导型一氧化氮合酶(iNOS酶)活力及环氧化酶(COX-2)表达水平的影响,共同表征其体外抗炎活性。结果 PESCPL在12.5~200μg/ml范围内可显著降低LPS诱导炎症细胞分泌促炎因子的水平,且对TNF-α和IL-1β的抑制作用呈浓度依赖性;在12.5~50μg/ml范围内可抑制炎症细胞对NO的释放能力,降低iNOS的酶活力,降低COX-2蛋白表达量。结论海参水煮液多糖有良好的抗炎活性,有望成为天然功能食品与药品的良好基料。     

莲房原花青素通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导HepG2细胞凋亡

研究莲房原花青素(LSPCs)诱导肝癌Hep G2细胞凋亡的机制。利用MTT法检测LSPCs对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用,Hochest 33258染色观察凋亡细胞的核形态,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,彗星实验用来检测细胞DNA损伤,JC-1染色用来检测线粒体膜电位,Western blotting法检测细胞凋亡蛋白水平的表达。LSPCs作用细胞后,显著抑制Hep G2细胞的增殖;细胞凋亡征象明显,核染色体高度凝聚,细胞核碎裂,核固缩,染色质凝聚的细胞数从3.86%增至42.76%(p0.01);活细胞率急剧减少,而凋亡率从5.32%增至67.05%(p0.01);LSPCs诱发细胞产生DNA损伤,线粒体膜电位下降,导致Cytochromec、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量增加,Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2蛋白的表达量下调,Bax/Bcl-2的比值上升。而凋亡抑制剂Z-VAD能够削弱LSPCs对Hep G2细胞增殖的抑制作用,显著下调细胞核聚缩,抑制线粒体损伤及Caspase相关蛋白的表达量,最终阻断LSPCs的致凋亡作用。由此得出结论,LSPCs可通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导人肝癌细胞凋亡。     

鼓槌石斛毛兰素诱导人结肠癌Caco-2细胞凋亡

目的:研究毛兰素对人结肠癌Caco-2细胞增殖的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:采用SRB法检测毛兰素对Caco-2细胞增殖的抑制作用,用Hoechst33342染色法观察细胞的形态学改变,流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达水平。结果:与对照相比,毛兰素能抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖,且抑制率随着药物浓度与时间增加,呈剂量时间效应,48 h半数抑制浓度IC50为0.845μg/m L;毛兰素能诱导Caco-2细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G₂期;Caspase-3活性裂解片段表达增高。结论:毛兰素对肿瘤细胞的增殖具有一定抑制作用且通过线粒体途径诱导Caco-2细胞凋亡。      

柚叶总黄酮对LPS所致Caco-2结肠上皮细胞间高通透性的保护作用

探讨柚叶总黄酮(PLTFE)对脂多糖(LPS,2 μg/mL)诱发Caco-2高通透性细胞模型的保护作用。Caco-2模型细胞以不同浓度的PLTFE(0、10、50、100、150 μg/mL)处理培养24 h进行后续实验。MTT法测定细胞生存率,细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平依说明书使用试剂盒测定。酶联法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定白介素(interlukin-1β,IL-1β)、IL-8和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌水平。跨上皮细胞电阻(trans epithelial electrical resistance,TEER)值和异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD40)透过度用于评估细胞通透性水平。实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测细胞IL-1β、IL-8、TNF-α、闭锁蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(claudin-1)、封闭小带蛋白(ZO-1)和肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的mRNA表达。结果表明,柚叶总黄酮能显著提高受损细胞生存率至86.1%,抑制受损细胞中LDH的溢出(p<0.05)。同时还能有效抑制受损细胞中炎性细胞因子(IL-1β、IL-8、TNF-α)的分泌及mRNA转录。此外,柚叶总黄酮可增强细胞紧密连接因子(Occludin、claudin-1、ZO-1)的mRNA转录,抑制MLCK的mRNA转录,改善细胞间高通透性qRT-PCR法检测细胞中相关因子的mRNA转录水平。结果提示,柚叶总黄酮具有较强的抗炎活性,能通过上调细胞内细胞紧密连接相关因子的mRNA转录显著改善LPS造成的Caco-2细胞间高通透性的发生(p<0.05)。     

银条水苏糖抑制人结肠癌Caco-2细胞增殖的作用及机制

研究中国传统蔬菜银条中所含天然活性成分——银条水苏糖对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制作用及其可能机制。采用无血清培养基培养Caco-2细胞,分析银条水苏糖对Caco-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术考察银条水苏糖对Caco-2细胞凋亡的影响,通过检测LDH释放率分析细胞损伤程度。结果表明:银条水苏糖对Caco-2细胞株具有生长抑制作用,且存在剂量和时间依赖关系,Annexin-V-PI双染的结果提示,Caco-2细胞凋亡率随着银条水苏糖浓度的升高而上升,同时比较各试验组Caco-2细胞LDH释放率,发现银条水苏糖抑制了Caco-2细胞还原丙酮酸为乳酸的能力,限制了Caco-2细胞能量通路,影响了细胞周期,进而导致细胞凋亡,说明抑制细胞能量通路,"饿死细胞"可能是银条水苏糖抗肿瘤作用的机理之一。     

笛鲷鱼鳞源功能多肽对Caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用

本实验利用650μmol/L H₂O₂构建Caco-2细胞氧化应激损伤模型,探究笛鲷鱼鳞源功能多肽(crimson snapper scale peptides,CSSPs)对Caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用。通过测定细胞上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)质量浓度、胞内抗氧化酶活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)相对含量、相关凋亡基因(Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2)的相对表达量,从细胞氧化还原状态和细胞凋亡两方面阐明CSSPs对损伤Caco-2细胞的抗氧化作用。结果显示,CSSPs能够通过抗氧化防御系统来减轻H₂O₂对Caco-2细胞的损伤,主要包括增加胞内抗氧化酶活性以抑制LDH释放、胞内ROS积累、MDA及IL-8的生成。此外,CSSPs抑制氧化应激损伤诱导的细胞凋亡与线粒体...     

基于酶活力模型和细胞模型分析红毛藻多糖降血脂活性

目的：对红毛藻（Bangia fusco-purpurea）中多糖组分进行分离纯化，分析多糖组分的体外降血脂活性，阐明红毛藻的降血脂活性功效机理，为红毛藻的精深加工和高值化应用提供科学依据。方法：采用热水提取-乙醇沉淀法从红毛藻中提取粗多糖；除去蛋白质后，通过Sephadex G75葡聚糖凝胶柱层析纯化后得到红毛藻多糖（B. fusco-purpurea polysaccharide，BFP）；采用DEAE-cellulose 52柱层析对BFP进一步分级纯化得到3 个多糖组分F1、F2和F3；通过酶动力学分析各组分对胰脂肪酶活性的影响；采用噻唑蓝法测定BFP组分F1、F2和F3对HepG2细胞和Caco-2细胞活力的影响；通过高血脂/高胆固醇HepG2细胞模型、油酸诱导Caco-2细胞模型分析BFP组分F1、F2和F3的体外降血脂活性。结果：酶动力学分析结果表明，BFP组分F3显著抑制了胰脂肪酶活性，且为可逆竞争性抑制；细胞模型结果表明，F1、F2和F3在质量浓度0～500 mg/mL范围内对所试细胞均无显著毒性作用；F1显著抑制Caco-2细胞对游离脂肪酸的吸收；F3对高血脂HepG2细胞模型中甘油三酯的合成和高胆固醇HepG2细胞模型中脂类的合成均有显著抑制作用。结论：BFP组分可有效抑制胰脂肪酶活性和细胞对游离脂肪酸的吸收、降低胆固醇和甘油三酯的合成，具有潜在的降血脂活性。     

皮蛋模拟胃肠道消化物对HepG2细胞的影响

皮蛋是中国传统食品,其水解物具有抗氧化、抗炎和抗癌等功效,具有良好的医学前景,但目前皮蛋发挥抗癌功效的途径及作用机制尚不清楚.探究了皮蛋模拟胃肠道消化物(preserved eggs simulated gastrointestinal digests,PESD)对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响.将皮蛋经体外...     

胶红酵母CICC 33013胞外多糖抑制肝癌细胞活性研究

采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法对胶红酵母胞外多糖组分(Rhodotorula mucilaginosa exo-polysaccharide2-A,REPS2-A)抑制10种常见癌细胞(血癌细胞K562、胃癌细胞BGC823、胃癌细胞SGC7901、胃癌细胞MKN28、肝癌细胞HepG2、BEL7402、Hep3B、胰腺癌细胞HS66T、乳腺癌细胞SKBR3、宫颈癌细胞HeLa)能力进行了筛选,结果证明胞外多糖组分REPS2-A对肝癌细胞HepG2有较好的抑制效果。通过胞外多糖组分REPS2-A对HepG2细胞抑制作用最佳浓度及时效性的研究,探讨胞外多糖组分REPS2-A对肝癌HepG2细胞的生长抑制及其作用机制。结果表明:当胞外多糖组分REPS2-A的浓度为1mg/mL时,肝癌细胞HepG2的抑制率高于IC50时的抑制率,抑制效果明显优于其他浓度。肝癌细胞HepG2的自发凋亡率为0.40%,当胞外多糖组分REPS2-A浓度为1mg/mL,分别处理24,48,72h,肝癌细胞HepG2的凋亡率依次为77.70%,88.18%,97.08%。胞外多糖组分REPS2-A能有效抑制肝癌细胞的...