新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF39L基因克隆、表达及抗体的制备

为研究新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)核心基因ORF39L在病毒侵染过程中的作用,制备了SGIV ORF39L表达蛋白的抗体;通过生物信息学软件预测SGIV ORF39L的抗原表位基因,并以所选抗原表位基因片段39Ag1和39Ag2构建原核表达质粒pET32a-39Ag1和pET32a-39Ag2;将质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达融合蛋白pET32a-VP39Ag1和pET32a-VP39Ag2;用所得融合蛋白分别免疫小鼠,获得了高效特异抗体39Ab1和39Ab2;利用制备的抗体进行间接免疫荧光试验,结果显示,VP39参与了SGIV的装配。本研究结果为进一步研究ORF39L基因在SGIV感染过程中的作用机制提供了数据资料。     

新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF39L基因克隆、表达及抗体的制备

为研究新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)核心基因ORF39L在病毒侵染过程中的作用,制备了SGIV ORF39L表达蛋白的抗体;通过生物信息学软件预测SGIV ORF39L的抗原表位基因,并以所选抗原表位基因片段39Ag1和39Ag2构建原核表达质粒pET32a-39Ag1和pET32a-39Ag2;将质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达融合蛋白pET32a-VP39Ag1和pET32a-VP39Ag2;用所得融合蛋白分别免疫小鼠,获得了高效特异抗体39Ab1和39Ab2;利用制备的抗体进行间接免疫荧光试验,结果显示,VP39参与了SGIV的装配。本研究结果为进一步研究ORF39L基因在SGIV感染过程中的作用机制提供了数据资料。     

抗狂犬病病毒单链抗体的筛选及鉴定

目的:利用噬菌体展示技术构建的噬菌体抗体库,筛选、表达及鉴定具有体外中和活性的抗狂犬病病毒单链抗体。方法:以21份接受狂犬病病毒疫苗免疫的健康人外周血构建的抗狂犬病病毒scFv噬菌体免疫库为基础,免疫管包被纯化狂犬病病毒颗粒,通过三轮筛选,ELISA检测单克隆噬菌体抗体颗粒的阳性率,DNAStar和Vbase2对阳性克隆进行序列分析。序列正确的单链抗体构建原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达单链抗体。经压力破碎、镍亲和层析对表达的蛋白进行纯化。RFFIT检测纯化蛋白对狂犬病病毒的体外中和活性。同时使用间接ELSIA检测获得的scFv对3aG,CVS,CTN及PV株的交叉反应性。结果:共获得40个阳性、基因测序结果正确的单链抗体。其中7个获得原核表达菌株,但只有3个获得较高的可溶性表达。RFFIT结果表明有4个scFv比活大于500 IU/mg。7个scFv对4种病毒株均有一定的交叉反应。结论:成功从该scFv噬菌体免疫库中筛选出特异性scFv;RFFIT结果表明获得的scFv具有体外中和狂犬病病毒的活性。     

Marc-145细胞微载体模化培养PRRSV

为确定甲型流感病毒在贴壁MDCK细胞上最佳增殖条件。将PRRSV在微载体悬浮培养的Marc-145细胞上增殖,以半数细胞感染剂量为检测指标,对病毒维持液中血清浓度、接毒时间、感染复数(MOI)和收毒时间进行优化。结果表明,细胞培养后72 h接种病毒,病毒维持液中血清含量为2%,病毒感染复数为0.05,病毒感染48 h后PRRSV效价较高达到10~(6.6)TCID_(50)·mL~(-1),确定了PRRSV在微载体悬浮培养的Marc-145细胞上的增殖条件。     

藏药绿萝花水提物对小鼠免疫功能的影响

探讨藏药绿萝花对机体免疫功能的影响,为临床合理用药和进一步开发利用提供科学依据.本研究以L9(34)正交设计试验所获得的绿萝花水萃取干膏制剂为研究材料,以N2Hmice小白鼠为研究对象,以Con A诱导小鼠淋巴细胞转化试验(CCK-8法)、血凝和血凝抑制试验及巨噬细胞吞噬试验为研究方法,以(SI)刺激指数、(HI)新城疫抗体效价、吞噬百分率和吞噬指数为检测指标,探讨不同剂量绿萝对机体免疫功能的影响.实验结果显示低剂量绿萝花能够增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数,其增强作用极显著优于空白组;低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠血清ND抗体产生的作用,作用显著优于空白组;低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠外周血淋巴细胞增殖的作用,作用显著优于空白组.研究结果表明低(1.08g/次/d,7d)、中(2.16g/次/d,7d)剂量绿萝花对小鼠免疫功能具有增强作用.     

阿托伐他汀对糖尿病肾病患者血同型半胱氨酸及纤维蛋白原水平的影响

目的:探讨阿托伐他汀对糖尿病肾病患者血同型半胱氨酸、纤维蛋白原水平的影响。方法:选取50例确诊为糖尿病肾病的患者,根据血脂水平分为A组(血脂正常组)和B组(血脂升高组);A组随机数字表法分为对照组(A1组)和治疗组(A2组)。A1组、A2组及B组均给予糖尿病基础治疗。A2组和B组在糖尿病基础治疗上增加口服阿托伐他汀。比较各组患者治疗前后的血同型半胱氨酸、纤维蛋白原水平等指标的改变。结果:A组治疗前血同型半胱氨酸(Hcy)及纤维蛋白原均低于B组(P<0.05),A1、A2组患者治疗前Hcy及纤维蛋白原无明显差异,A2组治疗后Hcy水平及纤维蛋白原均低于A1组(P<0.05),B组治疗后Hcy水平及纤维蛋白原均显著降低(P<0.05)。结论:阿托伐他汀能降低糖尿病肾病患者血同型半胱氨酸、纤维蛋白原水平,发挥降血脂以外的血管保护作用,以延缓糖尿病肾病进展。     

鲤春病毒血症病毒Shlj1株糖蛋白空间结构及其B细胞抗原表位的预测

为预测鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)Shlj1株糖蛋白(Glycoprotein,G)的空间结构及B细胞抗原表位,采用RT-PCR法从接种SVCV的鲤上皮细胞悬液提取的病毒总RNA中扩增糖蛋白基因,并通过序列测定获得Shlj1株糖蛋白基因的核苷酸序列及氨基酸序列,利用Phyre2对Shlj1分离株的糖蛋白空间结构进行预测,使用DNAStar软件综合分析糖蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性和抗原指数参数。结果表明:获得的SVCV Shlj1株糖蛋白核苷酸序列长1527 bp,推导出其氨基酸序列为509aa;空间结构预测显示,SVCV Shlj1株糖蛋白存在一定数量的α-螺旋、β-折叠、β-转角及大量无规则卷曲结构,空间构象较规则;抗原指数及抗原表位指数分析显示,糖蛋白中存在许多抗原指数较高的区域,该区域平均抗原指数为1.025,最大值达1.250,其中5个区域(4~26、145~157、293~302、315~327、407~491氨基酸区段)可能是B细胞抗原表位的主要分布区域。本研究结果为SVCV糖蛋白表位疫苗的设计及单克隆抗体的制备奠定了理论基础。     

“鸡尾酒”或有新配方——人类免疫缺陷病毒抗体疗法动物实验取得突破

<正>据英国《自然》杂志网站报道,美国科学家们最近对恒河猴的研究表明,一种功效强大的艾滋病病毒(HIV)抗体有望与目前的抗逆转病毒疗法"同仇敌忾",有效对付人类免疫缺陷病毒。抗体疗法成效显著这种名为猿猴和人免疫缺陷病毒(SHIV)的病毒能感染猴子,基因改造使其携带有人类病毒基因组的关键组成部分。两篇发表在《自然》杂志网络版上的研究报告了一种抗体疗法对这种人类免疫     

猪蓝耳病的防控技术探讨

<正>猪蓝耳病又叫猪繁殖和呼吸综合症(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状为特征的一种接触性传染病。国际兽医局(OIE)将PRRS列为B类传染病。本病曾称为"神秘猪病"、"新猪病"、"猪流行性流产和呼吸综合症"、"猪生殖与呼吸综合症"、"蓝耳病"、"猪瘟疫"等,我国将其列为二类传染病。本病是一种高度接触性传染病,呈地方流行性。PRRSV只感染猪,各种品     

妊娠期高血压患者抗磷脂抗体水平与妊娠结局的关系研究

目的:研究妊娠期高血压(HDCP)患者抗心磷脂抗体(ACA)及抗β_2-糖蛋白1(β_2-GP1)抗体水平与妊娠结局的关系,深入探讨抗磷脂抗体(APA)在HDCP发病中的作用,为临床预防及治疗HDCP提供新的理论依据。方法:选择在本院接受常规产检的妊娠期高血压疾病孕妇,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测孕妇ACA及抗β_2-GP1抗体水平,根据ELISA法检测结果分组,观察组A为仅ACA阳性孕妇,观察组B仅抗β_2-GP1抗体阳性孕妇,对照组为ACA及抗β_2-GP1抗体均阴性孕妇,每组均纳入30例。分析三组患者不良妊娠结局,以观察组A和观察组B为对象进行研究,分析APA水平与妊娠结局的相关性,分析不同抗磷脂抗体间相关性。结果:观察A组不良妊娠结局总发生率为46.67%,明显高于观察组A(36.66%)和对照组(10.00%),三组患者不良妊娠结局比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组A和观察组B两组患者ACA-IgM平均为(11.46±4.51)GPLU/mL、ACA-IgG平均为(9.42±3.51)MPLU/mL、抗β_2-GP1抗体平均为(104.63±21.83)U/mL。抗β_2-GPI抗体与围产儿死亡呈正相关(P<0.05),ACA-IgM、ACA-IgG和抗β_2-GP1抗体均与早产呈正相关(P<0.05),ACA-IgM与FGR呈正相关(P<0.05)。HDCP患者的ACA-IgG、ACA-IgM和抗β_2-GP1抗体三者两两间均呈正相关(P<0.05)。结论:HDCP患者ACA及抗β_2-GP1抗体与不良妊娠结局具有一定相关性,APA水平的检测对预测不良妊娠结局具有一定参考。