免疫亲和层析净化-高效液相色谱法同时检测几种食品中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A

建立一种花生食品的前处理方法,通过高效液相色谱法检测黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭曲霉毒素A。样品经过甲醇-水提取,提取液经过滤、稀释后,滤液经过含有黄曲霉毒素和赭曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化,此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A具有专一性,黄曲霉毒素、赭曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用水将免疫亲和柱上杂质除去,用甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱,洗脱液通过带荧光检测器的高效液相色谱仪,柱后碘溶液衍生测定黄曲霉毒素的含量;洗脱液通过带DAD检测器的高效液相色谱仪测定赭曲霉毒素的含量。本方法检出花生中黄曲霉毒素G1、B1和赭曲霉毒素A的检出限均为0.5μg/kg。,黄曲霉毒素B2、G2的检出限均为0.175μg/kg。结果表明利用免疫亲和层析净化-高效液相色谱法检测花生中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭曲霉毒素A,方法准确、可靠。     

中国明对虾乙酰基专一性凝集素分离纯化方法的研究

为研究凝集素在中国明对虾天然免疫中的作用,利用3种不同物质--N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)、胎球蛋白(Fetuin)和小牛黏液素(BSM)为配基,分别与3种柱材料结合进行亲和层析,从中国明对虾血淋巴中纯化凝集素.这3种亲和层析均得到了一种相同的凝集素FCL-1,经SDS-PAGE证明FCL-1的分子量为168kDa.利用新鲜小鼠血细胞进行分离纯化同样获得了这种凝集素.FCL-1与乙酰基糖类和唾液酸类糖蛋白均具有较强的结合特性.     

铜绿微囊藻生物钟蛋白的表达纯化与抗体制备

为了获得融合表达的铜绿微囊藻(Microcystic aeruginosa)生物钟蛋白KaiA、KaiB、KaiC并制备其相应的多克隆抗体,将kaiA、kaiB、kaiC基因分别克隆到原核表达质粒pET-His中.重组质粒pET-His-KaiA,pET-His-KaiB和pET-His-KaiC经酶切和测序鉴定后,分别转化E.coli BL21(DE3)进行融合表达.经SDS-PAGE分析可知,融合表达的KaiA、KaiB和KaiC蛋白表达量可分别达到菌体总蛋白的25%、40%和20%.经亲和层析后融合蛋白KaiA和KaiB的纯度分别达95%和92%,而KaiC经胶回收纯化后纯度也可达93%.将纯化后的三种Kai蛋白作为抗原分别免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA检测抗体滴度表明,制备的抗KaiA、抗KaiB和抗KaiC的多克隆抗体效价高,分别可达到1:50000、1:60000和1:100000.Western blotting结果表明:获得的多克隆抗体具有较高的效价,抗体能识别相应的Kai蛋白,具有较高的特异性,能用于铜绿微囊藻生物钟蛋白KaiA、KaiB和KaiC的表达节律检测.     

吸血蝙蝠纤溶酶原激活剂α2的原核表达及抗体制备

利用人工合成的吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂α2(DSPAα2)基因,研究了其在细菌中的表达及表达产物的纯化和抗体制备.首先人工合成DSPAα2基因,并构建原核表达载体转化大肠杆菌.经IPTG诱导后,DSPAα2在细菌中得到了高效表达.SDS-PAGE结果显示,以包涵体的形式存在的DSPAα2重组蛋白占到细菌总蛋白的32%.包涵体裂解后经亲合层析柱纯化,100mL菌液中能得到2.2mg纯的重组蛋白.用纯化的DSPAα2分别免疫大鼠和小鼠,经ELISA检测,获得了效价达到1∶12800以上的高质量的抗血清.Western blot结果显示抗体能与DSPAα2特异性地结合.     

抗CD3基因工程嵌合抗体片段Fab′的构建、表达和活性测定

PCR扩增抗CD3单抗轻链可变区(VL)和重链可变(VH)片段基因,将其重组到Fab ′表达载体中,构建成抗CD3嵌合抗体Fab′表达载体,转化大肠杆菌16C9进行可溶性表达 . 产物经蛋白G亲和层析柱纯化.免疫荧光竞争结合实验和3H掺入实验证实能与小鼠抗CD3 IgG HIT3a竞争性结合表达CD3的T淋巴细胞,并促进细胞增殖.     

抗微囊藻毒素单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定

利用RT-PCR方法从抗微囊藻毒素-LR(MC-LR)单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增出抗体的V_H和V_L基因,构建了抗MC-LR分子的单链抗体(scFv)基因。SDS-PAGE和Western blot分析结果显示,该单链抗体基因在大肠杆菌Origami 2中特异性表达出分子量约为30kD的融合蛋白。通过Ni-NTA金属亲和层析法对可溶性表达产物进行纯化,获得的目的蛋白浓度为0.115mg/mL。ELISA反应结果表明该单链抗体能与MC-LR特异性结合。此研究为制备多价高亲和力抗MC-LR抗体奠定了基础。     

苏丹红Ⅰ号多克隆抗体的制备与特异性鉴定

采用琥珀酸酐法,分别以BSA、OVA为载体蛋白合成了免疫抗原和包被抗原并通过SDS-PAGE凝胶电泳和紫外扫描法鉴定了合成的抗原为载体蛋白和苏丹红I号的复合物.将合成的免疫抗原用弗氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体,经辛酸纯化,间接ELISA法测得有高效价血清抗体;进一步采用琼脂双扩散试验和免疫金试纸法鉴定出血清中含有苏丹红Ⅰ号特异性抗体.     

鲤鱼(Cyprinus Carpio) 促性腺激素基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从鲤鱼脑垂体获得了两种GtH β亚基的cDNA, 克隆在pMD18-T载体.经测序确证后,将这两个基因克隆到原核表达载体pET -32(a)中,转化E.coli表达菌BL21(DE3),以IPTG诱导融合蛋白的高效表达.利用初步纯化后的抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.应用制备的兔抗血清与抽提的鲤鱼脑垂体的总蛋白分别进行Western-blot及ELISA分析,结果显示获得的多抗能特异识别各自的天然蛋白.该结果为纯化天然GtH蛋白提供了有效的检测手段,为进一步制备GtH单克隆抗体奠定了基础.     

基于(100)定向金刚石薄膜的辐射探测器研究

采用微波等离子体化学气相沉积（MPCVD）方法制备了100μm米厚高质量(100)定向金刚石薄膜. 利用(100)定向金刚石薄膜成功制备了α粒子探测器, -100V偏压下电荷平均收集效率为37.7%, 最大的电荷收集效率达到60%以上. 在此基础上, 通过在α粒子探测器条状电极面蒸镀一层合适厚度的硼(10B)膜转化层, 成功研制了金刚石中子探测器. 镀硼之后探测器对中子有明显的响应, 在1V/μm电场下, 对252Cf中子的能量分辨率达到9.3%,探测效率达到1.67%. 同时还研究了电场强度和硼(10B)层厚度对器件探测效率的影响规律. 在厚度<1.5μm时, 随着厚度的增加, 探测效率上升, 当厚度>1.5μm时, 探测效率下降.     

中药黄芪蛋白成分的分离和分析

中药黄芪(Huangqi)的茎的抽提液经CM-SFF柱和Sephacryl S-200柱分离纯化,得到一种毒蛋白,用高效凝胶蛋白柱和反相高效液相色谱法分离后,利用光电二极管阵列检测器峰的光谱特性确认分离峰的纯度和蛋白特性,在高效凝胶蛋白柱上制备了少量毒蛋白纯样,测定了毒蛋白分子量和氨基酸组成。     

Si（111）衬底上沉积LaNiO3薄膜的取向控制和导电性能研究

通过金属有机物沉积的方法在Si（111）衬底上成功制备出了高度（100）和（110）取向的LaNiO3薄膜。研究了不同热处理过程、薄膜厚度、前驱体溶液对LaNiO3取向的影响,以及厚度热处理温度、（100）方向的取向度与薄膜方阻之间的关系。LaNiO3薄膜的相结构由XRD（X射线衍射）分析,薄膜的晶粒大小和表面粗糙度由AFM（原子力显微镜）分析。     

中等强度恒定磁场作用下的神经元钠通道特性

为了从离子通道的角度研究中等强度恒定磁场（静磁场）对神经细胞的影响,利用线圈及磁铁产生3 mT、30 mT和100 mT的恒定磁场,作用于急性分离的小鼠前额叶皮层锥体神经元,应用全细胞膜片钳技术精密测量其钠通道的电流情况.实验发现：不同中等强度的恒定磁场均使神经细胞钠通道激活电位向超极化方向移动,钠电流峰值随磁场强度、暴露时间的改变而不同程度地增大.100 mT恒定磁场作用可改变激活和失活过程,使激活/失活曲线的半数激活/失活电压和斜率因子发生变化（激活曲线的半数激活电压由（-33.73±0.42）mV变为（-37.06±1.03）mV,斜率因子由（4.19±0.32）mV变为（6.79±0.93）mV,而失活曲线的半数失活电压由（-54.35±0.46）mV变为（-51.43±0.36）mV,斜率因子由（6.54±0.40）mV变为（7.31±0.31）mV）.结果表明,3 mT、30 mT和100mT恒定磁场均可改变神经元钠通道特性,从而影响神经元的生理功能.本实验为深入探讨恒定磁场对细胞离子通道的影响与作用提供了一定的实验基础.     

基于ZnS纳米材料的生物分子检测

利用三种发光波长的ZnS基纳米材料（ZnS、ZnS：Cu和ZnS：Mn）作为荧光标记物进行人免疫球蛋白（IgG）分子的免疫检测,X射线衍射（XRD）表明,过渡金属离子掺杂会导致ZnS纳米晶的结晶化尺寸减小;荧光光谱显示,ZnS、ZnS：Cu和ZnS：Mn纳米材料的发光波长分别为430nm、560nm和590nm。利用羊抗人IgG作为捕获抗体,分别制备免疫检测金基底和ZnS基荧光探针,分别进行空白实验、加入待测物人IgG实验,表明具有很好的检测选择性。     

液相色谱-串联质谱法测定土壤中霜霉威

建立了高效液相色谱-串联质谱（LC-MS／MS）分析土壤中霜霉威（Propamocarb）残留量的方法,前处理先用乙腈-水-甲酸（1＋9＋0．1）,再用100％乙腈提取,石墨化碳黑／氨基丙基柱净化。液相部分以0．1％甲酸水溶液、乙腈组成的体系作为流动相,ODS-4C18色谱柱分析,质谱方面采用二级串联质谱、电喷雾正离子多反应监测方式。乙腈稀释标准外标法定量线性范围0-250pg／kg,线性相关系数0．997。不同土壤2．5和100g／1（g两个水平添加回收的回收率在60％～100％之间,方法定量限为17g／kg。     

辐射固化用聚硅氧烷的合成及表征

以端氢硅油（PHMS）和二缩三丙二醇二丙烯酸酯（TPGDA）为原料在铂催化剂的作用下,用硅氢加成反应合成了两端带有双键的辐射固化聚硅氧烷。采用红外光谱内标法测定了端氢硅油中活泼氢的转化率,通过正交试验确定了最佳反应条件：反应温度为100℃、反应时间为4h、二缩三丙二醇二丙烯酸酯与端氢硅油的物质的量比为1．2：1．0,反应催化剂氯铂酸为0．4％。产品经IR和HNMR表征,证明是所需产物。     

高效液相色谱法检测食品接触材料中三聚氰胺的残留量

建立了一种用液相色谱技术检测分析食品接触材料中三聚氰胺残留量的方法。样品采用0.1 mol/L盐酸作为提取溶液,70℃水浴超声提取。色谱分离采用NH2柱,流动相为V(乙腈):V(5mmol/L磷酸盐缓冲溶液,pH 6.5)=75:25,二极管阵列检测器检测。在优化条件下,三聚氰胺浓度在0.2-100 mg/L范围内与其峰面积线性关系良好,检出限(S/N=3)为0.02 mg/L。在100μg的添加水平下,三聚氰胺的回收率在80-99%之间,相对标准偏差(RSD)为2.80-4.32%。揭示了原料中三聚氰胺残留量与成型品的三聚氰胺迁移量的正相关关系。结果表明,该法简便、快速,可准确测定食品接触材料中三聚氰胺残留量。     

液相色谱法测定花生酱中植物生长调节剂

采用固相分散萃取-高效液相色谱法同时测定花生酱中的吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)和α-萘乙酸(NAA)三种植物生长调节剂。无水硫酸钠作分散剂、甲醇作萃取剂。色谱条件:Diamonsil C18柱;甲醇-水(55:45,V/V,甲酸调PH=3.0)为流动相;流速:1.0mL/min;检测波长:272nm。在0.50～100μg/mL范围内线性良好。方法检出限均为1.25μg/g,平均回收率为98.97%、86.41%和84.24%,相对标准偏差为2.23%、1.75%和1.90%。     

温度场对金刚石薄膜质量的影响

在引进的韩国微波等离子化学气相沉积（MPCVD）设备中,利用氢气和甲烷作为气源,在单面抛光的（100）单晶硅片上研究了不同的形核温度和生长温度条件下制备出金刚石薄膜。通过Raman光谱、XRD光谱和扫描电子显微镜（SEM）对制备的金刚石膜的质量进行表征。研究结果表明,形核温度和生长温度对金刚石膜的生长均有影响。形核温度过低会增大薄膜中的非金刚石相的含量,促使二次形核增加,降低了金刚石薄膜质量。随着生长温度的升高,金刚石中非金刚石相含量越少,金刚石的质量提高,但金刚石的晶面同时也被大量刻蚀。     

脊柱结核的CT及MRI影像诊断价值

目的：探讨脊柱结核CT、MRI影像特点,评价两种技术的诊断价值。方法：选取脊柱结核患者48例,分别进行X线、CT、MRI诊断,对比相关指标。结果：MRI、CT、X线片诊断符合率分别为100%、67.42%、56.82%,X线、CT、MRI评估单个椎体结核病灶均破坏范围分别为（35±12）%、（69±14）%、（80±11）%,正常椎体CT值（253±16）、骨桥（552±100）、硬化骨（522±1）、亚正常骨（312±21）、死骨（463±10）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：MRI诊断脊柱结核病变效用较好,但考虑到MRI价格昂贵、检查繁琐以及可能对预后产生不良影响,应结合CT联合诊断。     

基底材料对沉积氮化钛薄膜及其性能的影响

研究了利用直流反应磁控溅射法,以Si—P（111）和Si—P（100）两种不同Si片做基底,对制备TiNx薄膜性能的影响。结果表明,以Si--p（111）为基底制备的TiNx薄膜性能优于Si--p（100）基底,表现在颗粒更细润,XRD衍射峰峰形更明锐且与TiNx的衍射峰不会重叠。因而,选用p--Si（111）做基底沉积氮化钛薄膜,可满足制备光学薄膜质量方面的要求。