中国食源性单核细胞增生李斯特菌耐药特征分析

目的研究中国22个省市自治区9类食品中分离的单核细胞增生李斯特菌的耐药特征。方法采用微量肉汤稀释法测定了1 069株单核细胞增生李斯特菌对庆大霉素、氨苄西林、青霉素、四环素、强力霉素、亚胺培南、红霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、头孢噻吩、利福平、万古霉素、氯霉素、氨苄西林/舒巴坦酸和复方新诺明15种抗生素的耐药性。结果 1 069株单核细胞增生李斯特菌耐药率为6.92%,主要耐受的抗生素有四环素、强力霉素、红霉素、氯霉素和环丙沙星,并出现了多重耐药株。在不同食品来源中,分离自速冻米面制品的菌株耐药率最高,为9.64%。在22个省市自治区中,耐药率前3位的是:甘肃、吉林、福建,分别为27.3%、20.4%和17.4%。结论中国食源性单核细胞增生李斯特菌的耐药率较低,不同地区、不同食物来源耐药率差异较大,仍要加强对生产和临床使用抗生素的管理,减缓单核细胞增生李斯特菌耐药趋势的上升。     

2012—2015年北京市西城区单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型及耐药研究

探讨单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型(MLST)与耐药性的关联性,确定某些具有高致病性潜能的流行克隆株的存在。方法 采用Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法和E-test药敏试条法对14种抗生素进行药物敏感性试验,以MLST技术对50株菌株进行基因分型。结果 单核细胞增生李斯特菌耐药率为22.00%(11/50),并出现多重耐药株。50株单核细胞增生李斯特菌MLST分析共获得12个型别,以ST9和ST121为优势型别。结论 特定ST型别在食品生产过程中存在特定菌株之间的传递,人源性和食源性单核细胞增生李斯特菌中均发现耐药株,可能存在耐药基因的传递,应加强对具有潜在致病性的ST型别的监测力度。     

2012年中国食源性单核细胞增生李斯特菌耐药特征及多位点序列分型研究

研究2012年中国23个省市自治区10类食品中分离的635株单核细胞增生李斯特菌的耐药特征及多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)测定。方法 采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,选择氨苄西林、复方新诺明、四环素、庆大霉素、红霉素、环丙沙星、氯霉素和万古霉素8种抗生素,对耐药株进行MLST分型。结果 635株单增李斯特菌检测出66株耐药菌,平均耐药率为10.39%。耐四环素菌株最多为49株,其次为耐环丙沙星20株、红霉素10株、氯霉素7株、复方新诺明3株、氨苄青霉素1株、庆大霉素1株、万古霉素1株。耐受2种抗生素有8株,耐受3种及以上抗生素有7株。77株菌耐药性介于中介度,其中75株菌对环丙沙星耐药性介于中介度。耐药株MLST分型表明,ST155、ST9、ST705和ST87为我国单增李斯特菌耐药株常见型别。四环素和四环素-红霉素-氯霉素耐药谱在MLST聚类分析中有集中趋势,耐药菌株主要来源于熟肉制品和中式凉拌荤菜。结论 我国目前食品来源的单增李斯特菌耐药率普遍较低,但与往年相比呈现逐渐增加的趋势。耐药株的主要MLST型别分布与相关耐药谱在聚类分析中相互关联。     

食源性单核细胞增生李斯特菌的重金属镉抗性及其与抗生素耐药性的关系研究

研究了不同血清型食源性单核细胞增生李斯特菌对重金属镉的抗性及其与抗生素耐药性之间的关系。采用琼脂稀释法检测单核细胞增生李斯特菌对重金属镉的抗性,与菌株的抗生素耐药性进行比较分析。结果表明,73株实验菌株中,36株具有镉抗性,总体镉抗性率达49.3%(36/73)。分离到的5株多重耐药单核细胞增生李斯特菌均为镉抗性菌株,表明食品生产、加工及其储存环境中这种同时携带多重耐药性与重金属抗性的微生物从食品链及有关环境进入到人类,就会对人类健康构成构成潜在威胁。     

徐州市市售生肉中单核细胞增生李斯特菌污染及其分子特征分析

目的 分析2018年和2020年徐州市市售生肉中单核细胞增生李斯特菌检出率及其分子生物学特征。方法 随机采集市区零售鲜或冷冻生禽肉及调理肉，按照GB 4789.30—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》对单核细胞增生李斯特菌进行分离、鉴定，并分析其血清型、耐药性、毒力基因型、脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型。结果 142份市售生肉中有40份检出单核细胞增生李斯特菌，检出率为28.2%（40/142）；血清型主要为1/2a型，占50.0%（20/40）；40株单核细胞增生李斯特菌共分为15种PT型；对氨苄西林及青霉素耐药菌株分别有4株和2株；所有菌株均携带多种毒力基因。结论 徐州市市售生肉中单核细胞增生李斯特菌污染较严重，存在小规模同源菌株，需进一步加强监测管理，以防食源性疾病的发生。     

携带质粒李斯特菌耐药及重金属抵制特性研究

鉴定单核细胞增生性李斯特菌(Lm)携带质粒特性,分析携带质粒Lm对抗生素、重金属镉及苯扎氯铵的敏感性。结果表明,11株Lm携带内源性质粒;所有Lm菌株对阿莫西林、红霉素和利福平均敏感(22/22),对头孢拉定100%耐药(22/22);其中5株对盐酸万古霉中度耐受,部分菌株对盐酸环丙沙星(17/22)、硫酸新霉素(16/22)及盐酸四环素素(9/22)具有一定耐受性。耐镉分析表明,菌株对重金属镉呈现抵制特性(14/22),且均为携带质粒菌株;而在苯扎氯铵敏感性检测中,仅3株携带质粒Lm菌株对苯扎氯铵具有抵制性。对Lm菌株进行噬菌体杀菌检测,结果均能够被噬菌体识别并裂解。综上所述,Lm分离株耐药性增强,且对苯扎氯铵和镉有抵制特性,而噬菌体能够杀灭抵制菌株,为控制耐药及抵制性菌株污染提供了新途径。     

加工环境中单核细胞增生性李斯特菌耐药特征分析

目的分析在流通过程中加工环境来源的食源性李斯特菌耐药性及耐药基因携带情况,探讨加工环境对该菌的影响。方法收集2016~2017年分离自加工环境中的71株单核细胞增生性李斯特菌,利用微量肉汤稀释法对8种抗菌药物进行药物敏感性分析,并采用PCR鉴定11种耐药基因(tet A、tet M、tet S、erm A、erm B、erm C、mec A、aac(6’)-Ib、van A、van B、cfr)。结果 71株Lm对庆大霉素(11.27%)、氨苄西林(4.22%)、头孢他啶(98.59%)、环丙沙星(97.18%)、四环素(21.12%)、红霉素(15.49%)、林可霉素(92.96%)均具有不同程度的耐药性,对万古霉素敏感。其中以耐受3~6种抗菌药为主,耐药情况较为严重。耐药基因检测表明四环素类tet A,tet M为主要耐药基因,检出率高达50%以上,其次为红霉素类erm A、erm B、erm C,检出率约11%,氨基糖苷类aac(6’)-Ib的检出率为5.63%。结论加工环境单核细胞增生性李斯特菌的耐药性呈上升趋势,其耐药表型与耐药基因型并不完全一致,从而表明加工环境中存在影响单核细胞增生性李斯特菌耐药性因素,同时为食源性李斯特菌病的防治及预警提供参考依据。     

食源性单核细胞增生李斯特菌四环素、红霉素耐药基因研究

研究了食源性单核细胞增生李斯特菌四环素、红霉素耐药基因的分布状况及和耐药表型的关系。采用微量肉汤稀释法对2005~2007年河北省疾病预防控制中心分离到的食源性单核细胞增生李斯特菌株进行四环素、红霉素药敏实验;应用PCR方法对实验菌株进行四环素耐药基因tet(M)、tet(S)、tet(L)、tet(K)、tet(B)、及与tet(M)基因关系密切的转座子Tn916、红霉素核糖体甲基化酶基因ermB、ermC、及与ermB基因关系密切的转座子Tn917检测,对阳性样本序列进行鉴定分析;应用血清学分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、及脂肪酸聚类分析方法分析四环素耐药菌株之间的相关性,确定基因型和多态性。结果表明,91株单核细胞增生李斯特菌四环素敏感77株、耐药14株;红霉素敏感89株、耐药2株,其中包含1株菌同时交叉耐药四环素和红霉素;14株四环素耐药株中含tet(M)基因的13株,在13株tet(M)基因阳性菌中,tet(M)位于Tn916转座子上的9株;1株同时交叉耐药四环素、红霉素菌同时携带tet(S)、ermB基因;ermC基因、转座子Tn917均为阴性;四环素、红霉素敏感株中未检测到上述任何耐药基因。14株四环素耐药菌株血清型分布以1/2a型为主(n=12),部分菌株PFGE、脂肪酸分型完全一致。食源性单核细胞增生李斯特菌获得tet(M)基因是耐四环素的主要机制之一,具有水平传播耐药基因能力的接合型转座子Tn916与该菌四环素耐药播散有直接关系;ermB基因介导的核糖体靶位点改变存在食源性单核细胞增生李斯特菌红霉素耐药株中;PFGE基因型结合脂肪酸聚类分析能够用来分析菌株之间的相关性。     

猪肉中单核细胞增生李斯特菌的分离与耐药性研究

了解猪肉中单核细胞增生李斯特菌的污染情况、血清型和耐药性现状。按照国标GB 4789.30-2010程序分离猪肉中单核细胞增生李斯特菌;多重PCR确定血清型;纸片扩散法检测单核细胞增生李斯特菌对抗生素的敏感性。研究结果表明273份猪肉样本中有52（19.02%)个受单核细胞增生李斯特菌的污染,共检出78株该致病菌。33株（42.31%）、24株（30.71%）、16株（20.51%）、3株（3.85%）、2株（2.56%)分别被确定为血清型1/2a（或3a）、1/2b（或3b或7）、1/2c（或3c）、4a（或4c）和4b（或4d或4e）。所有菌株对氨苄西林、 氨苄西林/舒巴坦、亚胺培能、环丙沙星、左氧氟沙星、万古霉素都敏感,对四环素（20.51%）的耐药率最为严重。11.54%的菌株对临床治疗李斯特菌病的青霉素、庆大霉素、红霉素等抗生素出现耐药。tet(M)基因是单核细胞增生李斯特菌耐四环素的主要机制之一,接合型转座子Tn916与该菌四环素耐药散播有直接关系。     

采用高级微生物基因分型系统对食品中单核细胞增生李斯特菌进行同源性分析

采用高级微生物基因分型系统(DiversiLab系统)对食品中单核细胞增生李斯特菌进行基因型分析,将分型结果与血清型和菌株的耐药性进行比对研究。方法 DiversiLab系统是基于rep-PCR原理对微生物进行分型,将分型结果与菌株的血清型进行比较研究,同时对菌株的耐药性与rep-PCR型别进行研究。结果 采用DiversiLab系统将46株单核细胞增生李斯特菌分为9个型别A～I。血清型为1/2a的分离株以A型为主,所测试的6株血清型为4b的分离株均为H型;14株呋喃妥因耐受菌株9株为A型、1株为B型、3株为C型、1株为F型,除2株血清型为3a外,其余均为1/2a。结论 DiversiLab系统分析结果,揭示了46株从食品中分离的单增细胞增生李斯特菌间的亲缘关系,rep-PCR分型结果与H抗原结合位点存在一定联系,呋喃妥因耐受菌株的DNA指纹图谱相似度高,与耐药基因有关。     

2005—2013年河北省即食食品中单增李斯特菌污染及耐药特征研究

研究2005—2013年河北省即食食品中单增李斯特菌污染状况及耐药特征。方法 单增李斯特菌检验参照(GB/T 4789.30),药物敏感性试验应用微量肉汤稀释法,对15种抗生素进行耐药检测。结果 单增李斯特菌总污染率为1.34%,凉拌菜及沙拉(2.62%)、生食水产品(2.51%)的检出率均高于所测其他食品。136株单增李斯特菌对15种抗生素耐药率为13.97%,以氯霉素耐药率最高(7.35%),其次是四环素和复方新诺明(均为4.41%),强力霉素和环丙沙星的耐药率均为2.94%,所有菌株对青霉素、亚胺培南、头孢噻吩、利福平、氨苄西林-舒巴坦酸敏感。结论 河北省即食食品中存在单增李斯特菌污染,分离菌株存在较严重的耐药情况,且耐药性有增长趋势,应加强即食食品的监管以保证食品安全及公众健康。     

鲜活贝类中单核细胞增生李斯特菌的分离鉴定及毒力基因与耐药性分析

目的研究采自产地的鲜活贝类中单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)的污染状况、毒力基因分布与耐药性。方法对采自产地的200份鲜活贝类,按照GB/T 4789.30—2010《食品安全国家标准食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行单增李斯特菌的分离与鉴定;采用Kirby-Bauer纸片扩散法测定分离株的耐药性;通过PCR法分析分离株9个毒力基因(包括prfA、plcB、hly、actA、iap、inlA、plcA、mpl、inlB)。结果在200份鲜活贝类中,共检出阳性样品4份(2.0%);有1株缺失inlB基因,1株缺失mpl基因;分离株对氨苄青霉素、庆大霉素等一线临床治疗药物敏感,但有2株对四环素和复方新诺明同时耐药,1株对复方新诺明和氧氟沙星耐药。结论采自产地的鲜活贝类存在单增李斯特菌的污染,分离株毒力基因有一定程度缺失,提示初级水产品中的单增李斯特菌污染需引起关注,并且需要继续加强食品中该菌的耐药性监测。     

云南省牛乳中单核细胞增生李斯特氏菌的分布特征、耐药性及毒力研究

目的分析云南省牛乳中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的分布特征、耐药性及毒力现状。方法采集云南省主要奶产区牛乳样本,按照GB 4789.30—2016方法分离单核细胞增生李斯特氏菌疑似菌株,采用飞行时间质谱技术结合16SrDNA测序对疑似菌株进行鉴定;采用微量肉汤稀释法对分离菌株进行抗生素药敏实验;通过聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)技术检测单核细胞增生李斯特氏菌中7种毒力基因的存在状况。结果158份样品共有4份检出单核细胞增生李斯特氏菌,检出率为2.53%;共分离获得8株菌。其中,生鲜乳中检出率为3.36%,巴氏杀菌乳中未检出。在生鲜乳中,荷斯坦牛乳、水牛乳、牦牛乳检出率分别为2.13%、0.00%和20.00%;标准化牛场、奶牛合作社和个体户的检出率分别为2.50%、1.51%和15.38%;手工挤奶和机械挤奶检出率为11.76%和1.96%。药敏实验结果显示8株菌均对青霉素耐药,对四环素、复方新诺明、红霉素耐药率分别为87.50%、75.00%和50.00%;多重耐药率为75.00%;但所有菌株对氨苄西林均敏感。8株菌对7种毒力基因的携带程度从12.50%~75.00%不等。结论云南省牛乳尤其生鲜乳中存在一定程度的单核细胞增生李斯特氏菌污染,且该菌具有普遍耐药性并携带一定程度的毒力基因,对消费者的安全具有潜在风险,应加强卫生监督管理。     

Prevalence and antimicrobial resistance of Listeria monocytogenes isolated in chicken slaughterhouses in Northern Greece

This study was conducted to determine the prevalence and antimicrobial resistance of Listeria monocytogenes recovered from chicken carcasses in slaughterhouses in Northern Greece. A total of 100 poultry samples (300 carcasses) were examined for Listeria spp. The samples were neck skin taken from four different slaughterhouses in Northern Greece. Forty samples were also taken from the environment of the slaughterhouses. Identification of L. monocytogenes was carried out by PCR and fingerprinting of the isolates by random amplified polymorphic DNA. L. monocytogenes strains isolated from chicken carcasses and from the environment of the slaughterhouses were also examined for antibiotic resistance. Fifty-five isolates of L. monocytogenes were tested for susceptibility to 20 antibiotics using the disk diffusion method. Listeria spp. were present in 99 of the poultry samples tested (99%), and 38 yielded L monocytogenes (38%). L. monocytogenes was also isolated in 80% of samples from the environment of a certain slaughterhouse, while the other slaughterhouses were found to be contaminated only with Listeria spp. All isolates were resistant to nalidixic acid and oxolinic acid, the majority of them to clindamycin, and only a few to tetracycline and oxytetracycline, whereas they were found to be susceptible to all other antimicrobials. The results of this study demonstrate a high prevalence of L. monocytogenes contamination in chicken carcasses, and all isolates were found to be sensitive to the antimicrobials most commonly used to treat human listeriosis.     

2015年江苏省网店自制食品中食源性致病菌的 监测分析

目的 监测江苏省网店自制食品食源性致病菌的污染状况。了解金黄色葡萄球菌产毒及耐药特点。方法 GB4789《食品安全国家标准 食品微生物学检验》方法,选取无锡、常州、盐城等3个监测点,采集我省范围内的网店自制食品共214份,进行沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌的检验。对分离得到的金黄色葡萄球菌进行葡萄球菌肠毒素检验和药物敏感性试验。结果 共检出食源性致病菌13株,总检出率为6.1%。其中金黄色葡萄球菌9株单增李斯特菌4株,未检出沙门菌。3份样品金黄色葡萄球菌污染超出国家食品限量值。9株金黄色葡萄球菌中6株产生葡萄球菌肠毒素。结论 江苏地区网店自制食品存在食源性致病菌污染状况。其中金黄色葡萄球菌污染比较严重,产肠毒素比例高,且对多种抗生素耐药,对青霉素产生普遍耐药, 对四环素、万古霉素和利福平耐药率较高, 对苯唑西林、环丙沙星、奎奴普丁/达福普汀和呋喃妥英等耐药率相对较低;对耐莫西沙星、利奈唑胺、替加环素和甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑有较好的敏感性。     

Incidence and characterization of Listeria spp. from foods available in Korea

A total of 410 domestic Korean food samples were analyzed for the presence of Listeria spp. by the conventional U.S. Department of Agriculture protocol, and presumptive strains were identified by morphological, cultural and biochemical tests according to Bergey's manual and confirmed by API-Listeria kit. Among the total 410 food samples, 46 samples (11.2%) were found to be contaminated with Listeria species. Among the 46 strains of Listeria spp. isolates, 8 strains (17.42%) for Listeria monocytogenes, 3 strains (6.5%) for Listeria seeligeri, 33 strains (71.7%) for Listeria innocua, and 2 strains (4.4%) for Listeria welshimeri were identified, respectively. Also, only beef, chicken, pork, frozen foods, and sausage were contaminated with L. monocytogenes, and the other products were free of L. monocytogenes. Of 46 Listeria spp. isolates, L. innocua (71.7%) was the most predominantly isolated in a variety of foods compared to other Listeria spp. An in vitro virulence assay for Listeria spp. using myeloma and hybridoma cells from murine and human sources was performed. The result showed that only L. monocytogenes killed approximately 95 to 100% hybridoma cells after 6 h and the other Listeria species, such as L. innocua, L. seeligeri, and L. welshimeri strains had about 0 to 10% lethal effect on hybridoma cells. Also, an antibiotic susceptibility test showed that Listeria spp. isolates were very susceptible to the antibiotics tested, except for nalidixic acid. Also, serotyping results showed 75% of L. monocytogenes isolates from beef, chicken, and frozen pizza belonged to serotype 1 and 25% from sausage were type 4.