金黄色葡萄球菌抗生素耐药研究进展

临床耐药菌株的出现和感染已成为全球关注的公共卫生健康问题.金黄色葡萄球菌是医院内和社区感染的重要病原菌之一,其抗生素耐药性问题日益严峻,严重威胁人类健康.文章主要对金黄色葡萄球菌的抗生素耐药机制、产生耐药原因及对策等方面进行综述,以期为抗菌药物的规范使用和减少抗生素耐药的新药研究提供理论指导,同时也为应对抗生素耐药性策...     

牦牛屠宰中金黄色葡萄球菌分离菌株的流行特征

为研究牦牛屠宰过程中金黄色葡萄球菌分离菌株的流行特征,本实验选取成都市某牦牛屠宰场采集样品共计150份,采用Baird-Parker选择性培养基初步筛选出金黄色葡萄球菌疑似菌株,通过聚合酶链式反应检测携带金黄色葡萄球菌特有耐热核酸酶基因的菌株。进一步检测分离菌株21种肠毒素基因、6种毒力基因、4种耐消毒剂基因以及14种耐药基因的携带情况。并采用K-B纸片扩散法检测菌株对24种抗生素的耐药表型。结果表明,从150份牦牛屠宰场采集到的样品中,检出金黄色葡萄球菌67株,检出率为44.67%,其中牦牛胴体拭子和环境拭子采样中金黄色葡萄球菌的检出率较高,分别为56.67%和51.61%;分离菌株中共检出12种肠毒素基因,其中selx、seu和sej基因的检出率高;分离菌株检测出溶血毒素基因、杀白细胞素基因以及qacA/B、qacG、qacH等耐消毒剂基因;有11种耐药基因检测出阳性条带,其中,耐甲氧西林基因mecA检出率为62.69%,氨基糖苷类耐药基因(aac6’/aph2’)和大环内脂类耐药基因(ermA、ermB)的检出率较高。K-B纸片扩散法对67株分离菌株进行24种抗生素的药敏实验结果...     

四川省动物性食品中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及污染分析

目的：为分析四川省动物性食品源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称SA)的耐药性,收集菌株,同时分析动物性食品中SA的污染情况。方法：本实验自2006年12月至2007年9月从四川省各地采集猪源、牛源、鸡源动物性食品样品共2560份,利用选择性培养基和生化实验等常规方法分离鉴定SA。结果：用Baird-Parker平板初步筛出疑似SA 118株,结合国标中规定的涂片染色镜检,溶血现象和血浆凝固酶实验结果,判定SA 有108株,而科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板和TH-16S中的双歧索引鉴定结果均判定SA有 113株;依据TH-16S中的16项生化实验结果,118株疑似SA仅有64%(76株)的菌株鉴定为SA。依据国标判定结果,2560份样品中SA的分离率为4.21%,其中生牛奶中SA的分离率最高(10.54%),其次是猪肉(7.11%),鲜鸡蛋中SA的分离率为零。结论：四川地区动物性食品源SA的生化表型复杂且存在一定差异,常规的表型分析具有一定缺陷。各个地方各类样品中SA污染情况有一定差异,与其他报道相比,四川省生肉、生奶和鲜蛋中SA的分离率较低。     

金黄色葡萄球菌噬菌体的分离筛选

以金黄色葡萄球菌为宿主菌,采用富集法从污水、粪便样品中分离筛选噬菌体,纯化后观察噬菌斑特征,电镜形态,并测定其效价、RTD（RoutineTestDilution,常规实验稀释度）值,初步分析该噬菌体的宿主谱。结果获得一株对金黄色葡萄球菌敏感的噬菌体,该噬菌体在宿主菌平板上能形成直径1～2mm、边界清晰、圆形透明的噬菌斑,效价是3.2×1010PFU/mL,RTD值为10-3,电镜观察显示此噬菌体由直径约为30nm的多面体头部和约50nm的尾部组成,可以裂解宿主菌及其它2株金黄色葡萄球菌,不能裂解大肠杆菌,鼠伤寒沙门氏菌及痢疾志贺氏菌。本文为深入研究金黄色葡萄球菌噬菌体的生物学特性及其功能提供了依据,为进一步利用噬菌体检测食源性金黄色葡萄球菌、防治由金黄色葡萄球菌引起的疾病提供了理论基础。      

石河子地区乳源性金黄色葡萄球菌毒力及耐药性的研究

本文研究了石河子地区乳源性金黄色葡萄球菌的污染情况、毒力特性及耐药性。对24份零售鲜奶样品进行金黄色葡萄球菌定量检测,PCR方法检测nuc、16S r RNA和7种毒力基因,利用Kirby-Bauer法对分离得到的金黄色葡萄球菌进行了12种抗生素的药物敏感试验。共分离55株疑似乳源性金黄色葡萄球菌,nuc和16S r RNA基因PCR扩增检测结果中有20株菌为阳性。毒力基因检测结果中有5株(5/20;25%)携带毒力基因,其中3株携带Coa(3/5;60%),1株携带Sei(1/5;20%),1株携带Sea+Sec+Coa(1/5;20%)。发现20株金黄色葡萄球菌中有19株对所测试的一种或多种抗生素具有抗性,且19株均对亚胺培南和氯霉素敏感。本文为指导抗生素在人类临床和动物饲养中的合理应用提供重要的参考性数据,为乳品中有害金黄色葡萄球菌的风险评估提供理论依据。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B的分离纯化

为了分离纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB),在离心、浓缩后,将浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32和葡聚糖凝胶G-75两步柱层析,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得了电泳纯的金黄色葡萄球菌肠毒素B.实验证明,该简化的二步柱层析分离得到的SEB纯度高,方法简便易行,一般实验室均可采用.     

金黄色葡萄球菌肠毒素B的分离纯化

为了分离纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）,在离心、浓缩后,将浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32和葡聚糖凝胶G-75两步柱层析,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得了电泳纯的金黄色葡萄球菌肠毒素B。实验证明,该简化的二步柱层析分离得到的SEB纯度高,方法简便易行,一般实验室均可采用。      

生猪养殖场环境及屠宰加工环节金黄色葡萄球菌污染及耐药谱状况

为了探究养殖及流通环节金黄色葡萄球菌污染及其耐药状况,采集某养殖场环境,屠宰加工环节及某市场生猪肉等507份样本。根据国标GB 4789.10-2010分离金黄色葡萄球菌136株;纸片扩散法、E-test法检测分离菌株耐药谱;聚合酶链式反应(PCR)检测所有菌株携带四环素、大环内酯类、林可酰胺类耐药基因及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicilin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)特异性基因mec A与mec C(即mec ALGA251)状况。结果表明,来自屠宰场生猪肉样本金黄色葡萄球菌污染率达44.11%(60/136),与其它来源的分离率相比有显著性差异(P0.05);对临床用于治疗金黄色葡萄球菌感染的青霉素、四环素及克林霉素耐药率分别为92.64%(126/136)、56.61%(77/136)、50.00%(58/136);多重耐药达56.62%(77/136);耐药谱以CIP/P/CN/TE/CLR/SXT/DA,P/CLR/DA,CIP/P/TE/CLR/C/SXT/RD/DA为主;金黄色葡萄球菌携带耐药基因较为严重,其中耐四环素基因tet K检测率为最高,达90.44%。研究结果为控制多重耐药金黄色葡萄球菌随食物链的传播的提供科学依据。     

上海市食源性金黄色葡萄球菌分布状况

采集上海市食品样品(生牛乳、生鲜肉、水产品、速冻食品、果蔬、豆制品)505份,按国标GB 4789.10—2010《金黄色葡萄球菌检验》方法进行金黄色葡萄球菌的分离和鉴定,并利用PCR技术进行进一步验证。结果表明:505份食品样品中有117份检出了金黄色葡萄球菌,总检出率为23.2%,其中生鲜肉检出率最高,为32.9%;其次为生牛乳和速冻食品,分别为26.3%和26.7%;其他食品中金黄色葡萄球菌的检出率相对较低。该实验结果基本上反映了上海市各类食品中金黄色葡萄球菌的分布状况,为监控金黄色葡萄球菌引起的食物中毒及追溯污染源提供参考。     

基因芯片技术鉴定食源性金黄色葡萄球菌

为了建立快速鉴定食派陛金黄色葡萄球菌的基因芯片技术，采用PCR方法扩增金黄色葡萄球菌16SrRNA基因的DNA片段．序列进行BLAST比较并通过软件设计其特异性探针，采用基因芯片杂交技术鉴定食源性金黄色葡萄球菌样品。结果：对所有样品进行基因芯片杂交技术处理并扫描观察，金黄色葡萄球菌的杂交结果呈阳性，其检测结果与传统方法鉴定结果一致。结论：应用基因芯片鉴定技术可快速、准确地鉴定食源性金黄色葡萄球菌，值得推广应用。     

2015~2018年北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药性分析

目的 掌握北京市食源性金黄色葡萄球菌对常用抗生素的耐药谱和耐药趋势。方法 收集2015?2018年北京市食源性致病菌监测网分离到的金黄色葡萄球菌103株, 采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法检测金黄色葡萄球菌对11种常用抗生素的敏感性。结果 103株菌中有102株表现为对至少1种抗生素耐药, 耐药率排在前三位的是青霉素、红霉素和克林霉素, 其中对青霉素的耐药率最高, 为99.0%。检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌8株, 占7.8%, 未见万古霉素耐药株。45.6%(47/103)的菌株同时耐受3类和3类以上抗生素, 表现为多重耐药, 同时耐受抗生素种类最高为7类。共存在26种耐药谱, 优势耐药谱为青霉素、青霉素-红霉素-克林霉素-复方新诺明-庆大霉素和青霉素-红霉素。结论 2015~2018年北京市食源性金黄色葡萄球菌整体耐药水平较高, 且多重耐药情况严重, 并出现MRSA株, 应继续加强北京市食源性金黄色葡萄球菌的耐药性监测。     

Biofilm Formation of Staphylococcus aureus on Various Surfaces and Their Resistance to Chlorine Sanitizer

This study investigated the effect of material types (polystyrene, polypropylene, glass, and stainless steel) and glucose addition on Staphylococcus aureus biofilm formation, and the relationship between biofilm formation measured by crystal violet (CV) staining and the number of biofilm cells determined by cell counts was studied. We also evaluated the efficacy of chlorine sanitizer on inhibiting various different types of S. aureus biofilms on the surface of stainless steel. Levels of biofilm formation of S. aureus were higher on hydrophilic surfaces (glass and stainless steel) than on hydrophobic surfaces (polypropylene and polystyrene). With the exception of biofilm formed on glass, the addition of glucose in broth significantly increased the biofilm formation of S. aureus on all surfaces and for all tested strains (P ≤ 0.05). The number of biofilm cells was not correlated with the biomass of the biofilms determined using the CV staining method. The efficacy of chlorine sanitizer against biofilm of S. aureus was not significantly different depending on types of biofilm (P > 0.05). Therefore, further studies are needed in order to determine an accurate method quantifying levels of bacterial biofilm and to evaluate the resistance of bacterial biofilm on the material surface.     

Antibiotic Resistance Traits and Molecular Subtyping of Staphylococcus aureus Isolated from Raw Sheep Milk Cheese

The main objective of the present research was to evaluate the antibiotic resistance profiles of Staphylococcus aureus isolated from raw sheep milk cheese. A total of 150 strains were isolated from curd cheese samples and identified as S. aureus. The survey on antibiotic resistance was carried out on 47 strains, selected among isolates showing differences in the banding pattern after Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) screening or, belonging at the same pulsotype but isolated from different cheese samples. On selected strains antimicrobial resistance against ampicillin, penicillin, cloxacillin, tetracycline, erythromycin, and vancomycin was assessed by broth microdilution method. The presence of the genes coding for antibiotic resistance and virulence factors (agr alleles, sea‐see, and tst) was also investigated by PCR. Thirty‐one isolates belonging to agrI and agrIII groups carried at least one gene coding for enterotoxins or toxic shock syndrome toxin. Approximately 60% of the selected strains were susceptible to the tested antibiotics. Twelve of 47 isolates showed multiple resistance against ampicillin and penicillin. Only 1 strain, represented by a unique PFGE profile showed simultaneous resistance to ampicillin, penicillin and cloxacillin. Single resistance against tetracycline was found in 5 isolates belonging to 2 different pulsotypes. The results of this study suggest that the recovery of S. aureus resistant strains in raw milk cheese samples is quite common but it is limited to few antibiotic classes, mainly β‐lactams and tetracyclines. None of the strains showed resistance to erythromycin and vancomycin.     

牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性变迁及β内酰胺类药物耐药基因分析

采用肉汤微量稀释法,对203 株源于2006—2011年四川牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sa)进行10 种常用抗生素药敏性检测,多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,M-PCR)法对其耐甲氧西林基因(mecA)和β-内酰胺类药物耐药基因(blaZ)进行分析,了解Sa耐药性变迁。结果表明:牛乳源Sa菌株对青霉素、氨苄西林耐药率一直居高不下;对阿莫西林/克拉维酸、红霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药率有增强趋势;对林可霉素、四环素耐药率呈降低趋势;对环丙沙星耐药率不定;对苯唑西林和头孢噻呋敏感;Sa分离株多重耐药率介于72.1%～100.0%,显示出不尽相同的耐药谱,却呈现出不断增宽的趋势。M-PCR检测显示,2006—2011年分离Sa菌株未从基因水平扩增出mecA基因;不同年度分离株均不同程度携带blaZ基因,不同年度分离株blaZ+检出率介于49.1%～87.5%。药敏实验结果与相关耐药基因检测结果存在对应关系,部分菌株的耐药性与耐药基因的检出率不一致,推测还存在其他耐药机制。结论:四川地区牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性不容乐观。     

2016—2020年上海地区乳源金黄色葡萄球菌耐药性及最低抑菌浓度变迁情况分析

目的 分析2016—2020年上海地区乳源金黄色葡萄球菌对常见抗菌药物的耐药性及其最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)变迁情况.方法 采用微量肉汤稀释法对2016—2020年间采集的349株金黄色葡萄球菌进行10种常见抗菌药物敏感性测试,通过分析药敏数据了解5年间上海...     

云南乳饼中金黄色葡萄球菌污染状况及其耐药性分析

目的了解云南省乳饼中主要致病菌的污染状况及耐药情况。方法采集云南省乳饼主产地区样品62件,用传统方法结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分离鉴定,采用微量肉汤稀释法对金黄色葡萄球菌进行12种抗生素敏感性分析。结果共检出18株金黄色葡萄球菌,检出率为29.03%,沙门氏菌和单增李斯特氏菌均未检出。农贸市场、加工店和奶牛养殖户检出率分别为44.44%、26.67%和16.67%(P=0.321),超市和网店的样品均未检出;散装和包装样品检出率分别为34.38%、23.33%(P=0.433)。所有菌株的耐药性如下:青霉100%,红霉素44.44%,复方新诺明33.33%,苯唑西林、克林霉素和头孢西丁的耐药率均为27.78%,四环素22.22%,多重耐药率为72.22%。18株菌对环丙沙星、达托霉素、万古霉素、氯霉素和庆大霉素均为敏感。结论金黄色葡萄球菌为乳饼中的主要食源性致病菌,其对抗生素耐药性较普遍,需加强畜禽养殖及乳饼加工卫生条件监管。