产剑麻皂苷水解酶菌株的筛选与鉴定

目的筛选能酶解剑麻皂苷并释放游离剑麻皂素的菌株。方法用薄层色谱法（TLC）初筛能酶解剑麻皂苷游离出剑麻皂素的菌株,再用酶活性比色测定和高效液相色谱法（HPLC）复筛目的菌株。通过形态学观察和ITS序列测定,初步鉴定菌种。结果筛选到31株目的菌株,其中丝状真菌13株,细菌18株。丝状真菌的酶活性高于细菌。鉴定其中酶活性较高的4株真菌：菌种T1为黑曲霉,T2、T3为链孢霉属,T4为青霉属。结论 TLC可快速筛选酶解剑麻皂苷并释放游离剑麻皂素的菌种。黑曲霉、链孢霉和青霉均有较强的酶解剑麻皂苷并释放游离剑麻皂素的能力。     

稀有人参皂苷C-K转化菌株的筛选鉴定及其转化特性

以原人参二醇型皂苷混合物为底物对10种霉菌进行筛选,发现3.26号菌株能够将高含量的原人参二醇型皂苷Rb1、Rb2、Rc等转化为具有抗肿瘤活性的稀有人参皂苷Compound K(C-K)。经形态学和ITS序列分析鉴定,该菌株属于附球霉属(Epicoccum)真菌。从该菌株培养液中分离出人参皂苷水解酶粗酶E-I,确定其最适pH值和最适温度分别为pH 5.0和40℃。用EI分别转化人参皂苷Rb1和Rb2、Rc,发现它既能水解人参皂苷Rb1,也能水解Rb2和Rc,但是对Rb1的水解活性更强。上述结果说明:3.26号菌株产生的糖苷酶具有广泛的底物专一性,但是对葡萄糖苷键的专一性更高;该菌的生物转化途径为人参皂苷Rb1、Rb2、Rc→Rd→F2→C-K。     

以18S rDNA序列鉴定一株产纤维素酶真菌

采用18S rDNA序列分析和形态鉴定对一株具有较高纤维素酶活性的真菌HY12进行了鉴定.18S rDNA序列分析表明,菌株HY15与木霉属多株菌的18S rDNA的同源性均在99.0%以上,而与其中的绿色木霉(Trichoderma viride)同源性达到100.0%.从构建的系统进化树中可以看出,HY12与Trichoderma viride共同构成一个分支,并与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)聚成一大枝.该菌形态鉴定与绿色木霉比较接近,因此初步确定菌株HY12为绿色木霉菌.     

纸葡萄穗霉降解β-胡萝卜素的产香研究

从采自云南昆明的22份不同陈化时间的烟草样品中筛选到6株可降解β-胡萝卜素的真菌。菌株YNCA9037可降解β-胡萝卜素,获得具甜木香味的发酵产物,经菌落形态、显微形态及转录间隔区(ITS)序列分析进行菌株分类鉴定,菌株YNCA9037初步鉴定为纸葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)。对菌株YNCA9037降解β-胡萝卜素的产香条件进行初步研究,其较佳产香的条件为:pH 6.5,发酵温度28℃,发酵时间72 h,β-胡萝卜素添加量0.2%。菌株YNCA9037降解β-胡萝卜素的发酵产物经气质联用(GC-MS)法分析,检测到致香物质β-环柠檬醛和β-紫罗兰酮。     

黑曲霉固体发酵三七药材的皂苷变化研究

为研究黑曲霉发酵三七药材过程中皂苷类成分的化学变化,利用黑曲霉对三七药材进行固体发酵,根据高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱（HPLC-Q-TOF-MS/MS）联用的检测结果,对三七发酵产物的总皂苷类成分进行分析和鉴定,并探讨了皂苷含量变化。结果表明,黑曲霉可以高效的转化三七药材中皂苷类成分。三七药材经黑曲霉发酵之后,人参皂苷Rb1几乎全部转化生成其他物质,在发酵产物中已未检出,三七皂苷R1和人参皂苷Rg1大幅度减少,三七皂苷R2、人参皂苷Rh1、Rd等含量明显增加,并且在三七发酵产物中检出了稀有人参皂苷F1、Rh4、Rg3、CK、三七皂苷Rh16和T5。     

产β-葡萄糖苷酶洋虫内共生真菌筛选、鉴定及联合转化人参皂苷作用机制

筛选、鉴定出洋虫成虫体内两株产β-葡萄糖苷酶真菌,两菌株联合发酵提高稀有皂苷转化率和发酵品质,对其动态发酵反应过程进行研究,明确人参皂苷的转化机制。通过MRS(七叶苷,柠檬酸铁)培养基筛选,18S rRNA基因扩增分别对两株产β-葡萄糖苷酶真菌进行鉴定,并与全组分人参皂苷发酵反应,利用LC-MS/MS对发酵产物进行分析。经鉴定两株产β-葡萄糖苷酶分别属于Chaetomium和Aspergillus属;WY1与人参主皂苷反应产物为Rd和Rh1;WY2与人参主皂苷反应产物为Rd、Rh1、Rg3和compound K;WY1/ WY2双菌联合发酵有效提高了Rh1、Rg3和compound K的转化率,其转化途径为Re→Rg1→Rh1;Rf→Rh1;Rb1/Rb2/Rc→Rd→Rg3/compound K,人参二醇类皂苷比人参三醇类皂苷更容易被转化且大部分被转化为Rg3。     

微生物转化人参皂苷Re为人参皂苷Rh1的研究

人参皂苷Re是人参的主要药理活性成分,具有抑制癌细胞增长、阻止癌细胞转移及保护神经等重要生理作用,稀有人参皂苷Rh1在抗癌方面的疗效更为显著。为获得较高含量的Rh1,微生物转化是目前较为有效途径。该研究从人参种植土中筛选可转化常量人参皂苷Re为稀有人参皂苷Rh1的目的菌株S329,以西洋参提取物为反应底物进行微生物发酵实验,利用高效液相色谱（HPLC）法对人参皂苷Re及其发酵产物进行分析。结果表明,通过对菌株形态学观察和18S rDNA测序分析,且通过在NCBI数据库上的Blast比对分析,鉴定高效菌株S329属于溜曲霉（Aspergillus tamarii）,人参皂苷Re转化人参皂苷Rh1的转化率为27.65%。     

苍耳内生真菌的分离鉴定及抗菌活性研究

从植物苍耳中分离内生真菌,选出8株进行抑菌活性测定,有6株对番茄早疫病菌抑制率大于50%。菌株SC008对5种植物病原菌的抑制率均大于50%。对内生真菌SC008进行形态学观察及ITS序列鉴定,初步判定菌株SC008归属于黑孢霉属(Nigrospora Zim.)。碳氮源实验表明,SC008在以乳糖和蔗糖为碳源及以酵母提取物和牛肉膏为氮源的培养基上生长良好。     

5株樱桃果实采后病原真菌分离及rDNA ITS区序列分析

从采后贮藏过程中自然发病的"拉宾斯"、"红灯"樱桃果实中分离到5株丝状病原真菌319~#、323~#、367~#、369~#和370~#。对分离得到的菌株纯化、回接、再分离纯化,并观察菌落形态和个体形态。提取5株病原真菌DNA,PCR扩增rDNA ITS区序列后测序,分析测序结果并构建进化树。综合形态学特征和r DNA ITS区序列鉴定分析结果,得到菌株319~#为匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)、菌株323~#为苹果果腐病菌(Diaporthe perniciosa)、菌株367~#为黑附球菌(Epicoccum nigrum)、菌株369~#为核果褐腐病菌(Monilinia laxa)和菌株370~#为圆孤青霉菌(Penicillium cyclopium),其中D.perniciosa、E.nigrum和P.cyclopium为在樱桃果实上首次分离到的病原真菌。     

藿香内生真菌次级代谢产物抗菌活性研究

【目的】分离纯化藿香花中内生真菌,测定内生真菌次级代谢产物抑菌活性。方法采用组织分离法从藿香花中分离内生真菌,根据显微形态结构进行初步鉴定;用微量肉汤稀释法测定藿香内生真菌次级代谢产物的最低抑菌浓度(MIC)。结果从藿香茎中共分离得到13株内生真菌,鉴定出12株,分别属于丝核菌属、黑孢霉属、长蠕孢菌属、短蠕孢菌属、丝孢菌属、链格孢菌、镰刀菌属、头孢霉属。大多数藿香内生真菌次级代谢产物的乙酸乙酯部位具有抗菌活性。菌株H-2的乙酸乙酯部位抑菌活性最强,对六种供试菌的MIC均为250μg/mL。菌株H-9的乙酸乙酯部位对无乳链球菌的抑制活性最好,为31.25μg/mL,对其他供试菌在500μg/mL能够表现出抑制活性。结论藿香内生真菌的次级代谢产物具有抑菌活性,为进一步的活性指导分离提供了理论依据。     

RP-HPLC法分析测定人参、西洋参、三七中的皂苷类化合物

利用反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)技术对人参、西洋参和三七不同方法提取物中的8种皂苷进行定量分析。采用乙醇回流、温浸法和超声辅助提取法提取3种药材中的有效成分,并结合高效液相色谱技术进行分析。结果表明:不同提取方法比较,超声辅助法所提取的3种药材中皂苷含量较高;3种五加科人参属的药材中,三七提取物中主要皂苷含量较高,人参提取物中的皂苷种类较多。     

珠子参中皂苷成分及其药理活性研究进展

珠子参为五加科人参属药用植物,属于珍稀物种。珠子参具有保护心脑血管系统、中枢神经系统、肝脏以及抗炎、抗肿瘤等药理活性。与同属的人参、西洋参和三七等植物相类似,珠子参中的主要活性成分为三萜皂苷,根据苷元结构的不同可将珠子参皂苷分为2大类,分别为:齐墩果烷型五环三萜皂苷和达玛烷型四环三萜皂苷。本文结合近20年来的研究文献,就珠子参的资源分布、不同部位中的皂苷成分及药理活性进行了综述,以此对以珠子参为原料的药品及保健食品的开发利用提供理论参考。     

不同种类人参及其各部位中皂苷组成和比例的研究

研究了不同种类人参中皂苷含量 ,以及人参不同部位中的皂苷成分及比例。总皂苷含量测定结果为 ,三七参根中含 14 .2 % ,西洋参须中含 10 .1% ,人参根中含 4.4% ,人参头中含 8.6% ,人参皮中含 6.7% ,人参叶中含 7.7% ,人参须中含 9.9%。对西洋参须、三七参根及吉林产的人参头、人参皮、人参叶、人参根、人参须中的总皂苷作TLC检测及薄层扫描表明 ,三七参根中Rg1含量最高 ,西洋参须中Rb1含量最高 ,人参根中Rd的含量可以忽略 ,人参叶中含有特征皂苷F2 ;它们的Rb1/Rg1值分别为 ,西洋参须中 2 2 .2 ,三七参根中 0 .6,人参头中 4.3 ,人参皮中 6.7,人参叶中 0 .2 ,人参根中 2 .4,人参须中 11.9。     

3种拟青霉发酵三七及其产物检测

采用3种拟青霉:蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)、蛹草拟青霉(Paecilomyces militaris)和蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)分别发酵三七药材,并检测发酵产物的功效成分。结果显示,蝙蝠蛾拟青霉和蛹草拟青霉能有效地将人参皂苷Rb1转化为Rd,从而高产稀有人参皂苷Rd,同时合成甘露醇、虫草素和腺苷。表明药用微生物与植物药相互作用可获得丰富的、新的药用资源。     

微波辅助萃取人参总皂苷与单体皂苷含量分析

通过单因素试验和正交试验对微波辅助萃取人参皂苷的工艺条件进行优化,采用分光光度法和高效液相色谱法对萃取物中的人参总皂苷及8种单体皂苷进行测定,考察不同提取条件下所得人参皂苷产率和组成的差异。结果表明:1)以总皂苷为提取目标时,最佳提取条件为萃取功率600 W、萃取温度45℃、萃取时间5 min、料液比1∶20,萃取3次;2)以8种单体皂苷为提取目标时,最佳提取条件为萃取功率300 W、萃取温度35℃、萃取时间15 min、料液比1∶25,萃取3次(提取率为0.98%);3)在最佳提取条件下,以体积分数80%甲醇为提取溶剂时,总皂苷提取率为6.02%,而单体皂苷提取率之和为0.43%;以水饱和正丁醇为提取溶剂时8种单体皂苷提取率达到0.71%。综上所述,人参质量评价和工艺优化结果与提取方法、提取条件、评价指标密切相关。     

三七冻干粉及其活性组分对小鼠1型辅助性T细胞分化和活性的影响

目的:观察三七冻干粉及其有效成分对小鼠CD4+T细胞向1型辅助性T(Th1)细胞分化的影响,探究三七作为药食同源药物改善机体免疫力的可能作用机制。方法:提取C57BL/6小鼠脾细胞并分选出CD4+T细胞进行培养;分为空白对照组,三七冻干粉低、中、高剂量组(160、320、640 μg/mL)和三七总皂苷低、中、高剂量组(5、10、20 μg/mL),加入对应药物48 h后,采用CCK-8法筛选三七冻干粉及三七总皂苷的最佳给药浓度并检测二者对细胞活力的影响,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中 IFN-γ的变化。结果:与对照组相比,三七冻干粉组和三七总皂苷组的细胞因子IFN-γ水平,IFN-γ mRNA和T-bet mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:三七冻干粉及其活性成分均能抑制CD4+T细胞向Th1细胞分化。     

Morphological Characterization,Chemical Components,and Biofunctional Activities of Panax ginseng,Panax quinquefolium,and Panax notoginseng Roots: A Comparative Study

The pharmacological activities of Panax ginseng, Panax quinquefolium, and Panax notoginseng as herbal medicinal resources were reviewed to evaluate their biofunctional effects. P. ginseng contains relatively many kinds of ginsenoside that possess pharmacological activity compared with P. quinquefolium and P. notoginseng. However, the ratio of panaxatriol and panaxadiol of ginsenoside in P. notoginseng is higher than those of P. ginseng and P. quinquefolium. The free sugar content of P. ginseng is similar to P. quinquefolium but is different from P. notoginseng. The total free amino acid content is highest in P. ginseng and lowest in P. notoginseng. P. ginseng has the highest antioxidative effects and P. ginseng and P. quinquefoilum possess more potent cytotoxicities on A549 and SK-OV-3 cell lines than P. notoginseng. Particularly, red ginseng of P. ginseng shows the highest antidiabetic effects, suggesting that it possesses activity to enhance insulin secretion as well as to prevent a destruction of pancreatic islet cells.     

松香基大孔吸附树脂对三七总皂苷的吸附特性研究

为了开发出一种分离纯化三七总皂苷的绿色新型吸附剂,本文合成了分别带有羧基（-COOH）、酯基（-OR）、羟基（-OH）的3种松香基大孔吸附树脂,采用静态吸附法对制备的三种松香基大孔树脂吸附性能进行初步筛选,优选最佳树脂并研究其对三七总皂苷的吸附机理。结果表明,以-COOH为功能基的大孔树脂吸附效果最优;其对三七总皂苷的吸附过程符合Langmuir模型,吸附动力学与准二级方程更吻合,吸附热力学参数ΔS为159.46 J·mol?1·K?1,ΔH为30.73 kJ·mol?1,表明吸附是熵驱动的自发吸热过程;用40%乙醇解吸三七总皂苷,其纯度可由粗提液的35.37%提升到74.56%,树脂重复使用10次后吸附量几乎没有变化;通过量子化学计算验证了以-COOH为功能基的大孔吸附树脂在吸附三七总皂苷时表现出的优异性能主要原因是氢键的作用;细胞毒性实验显示树脂安全环保,且安全性优于商业化树脂D-101。因此,制备的带有羧基的松香基大孔树脂适用于三七总皂苷的分离纯化,并具有一定的应用前景。     

Retention of Ginsenosides in Dried Ginseng Root: Comparison of Drying Methods

North American ginseng (Panax quinquefolius) has a long history of use and is currently a commercially reliable natural health commodity. Ginsenosides or triterpene saponins are generally regarded as bioactive constituents for several observed health effects associated with ginseng. North American ginseng was dried using 3 different drying techniques to assess the ginsenoside content of prepared extracts. Drying methods included freeze‐drying (FD), air‐drying (AD), and vacuum microwave‐drying (VMD) of ginseng root. High‐performance liquid chromatography (HPLC) analysis showed that FD ginseng processing gave greater (P≥ 0.05) amounts of the fingerprint ginsenosides Rg1 (28 ± 0.9 mg/g, dry weight) and Re (45 ± 0.1) compared with AD (Rg1 19 ± 0.7, Re 29 ± 0.1) and VMD (Rg1 22 ± 0.8, Re 24 ± 0.1); whereas, VMD produced greater amounts of Rb1 (83 ± 0.1) and Rd (13 ± 0.0) than FD (Rb1 62 ± 0.1, Rd 9 ± 0.1) and AD (Rb1 69 ± 0.1, Rd 5 ± 0.0), respectively. Total ginsenoside content was similar for FD and VMD and was the lowest (P≥ 0.05) for AD. Electrospray mass spectrometry (ESI‐MS) analysis showed a total of 12 compounds detected in FD ginseng compared with 10 compounds in ginseng dried by both VMD and AD. Our results support the fact that FD and VMD drying methods of North American ginseng can improve both extraction efficiency and actual retention of individual ginsenoside in root material.