蛹虫草静置发酵产虫草素的优化

对蛹虫草14014产虫草素的静置发酵培养基和发酵条件进行了优化,旨在探寻大规模制备虫草素的工艺方法。为了提高数理统计的精度,缩短发酵周期,通过单因素实验,获得了种龄为3d,接种量为10%的液体培养物最佳接种方式。通过Placket-Burman设计从7个因素中筛选出了有显著影响的温度、酵母膏和蛋白胨三个因素。通过最陡爬坡实验、中心复合实验设计及响应面分析确定主要影响因素的最佳值及回归模型,并经实验验证模型的可行性。最佳培养基组成和培养条件为:葡萄糖60g/L,KH2PO40.7g/L,MgSO4·7H2O 0.7g/L,酵母膏9.00g/L,蛋白胨17.10g/L,初始pH6.30,温度27.1℃。在优化条件下,虫草素产量达到6.50g/L,含量比优化前提高2倍。      

蛹虫草液体发酵产虫草素研究

以蛹虫草液体发酵菌丝体为原料,通过超声、微波方法提取蛹虫草中的虫草素,超声提取时间为20min;微波功率为200W,微波提取时间为110s,提取得到虫草素结晶体,含量是0.006mg/g.以虫草素为指标,通过正交试验确定蛹虫草液体发酵条件,虫草素含量最高的方案为:接种量15％,温度25℃,转数140r/min,培养时间96h.     

蛹虫草固态发酵产虫草素的优化

为提高虫草素的产量,本实验对蛹虫草固态发酵产虫草素进行优化。通过一系列单因素实验,确定大米为发酵基质,葡萄糖和黄豆粉分别为最适碳源和氮源,得到最佳培养基组成和最佳培养条件:大米30 g(粒径0.90～1.25 mm),料液比(m/v)1∶1.5,葡萄糖3%(按基质算,下同),黄豆粉2%,麦麸1%,接种量30%,种龄2 d,发酵时间12 d。优化后虫草素产量达到4.69%,约为优化之初(0.74%)6.34倍。     

蛹虫草Cordyceps militaris JN168产虫草素液态发酵条件的优化

利用单因素筛选和响应面法对蛹虫草Cordyceps militaris JN168产虫草素的液态发酵培养基进行优化,以确定蛹虫草产虫草素的最佳发酵培养基配方。结果表明,蛹虫草产虫草素的最佳碳源为葡萄糖,最适质量浓度为40 g/L;最佳氮源为牛肉膏,最适质量浓度15 g/L;加入的无机盐及其添加量分别为MgSO40.76 g/L,K2HPO40.63 g/L,CaCl20.66 g/L,Na2HPO40.67 g/L。优化后发酵液中虫草素质量浓度达到633.47 mg/L,是优化前的6倍。     

蛹虫草发酵产虫草素工艺优化

为确定蛹虫草产虫草素放大工艺条件,考察了菌种培养质量和发酵高径比对虫草素合成的影响.确定种子培养最佳条件为:转速250 r/min,接种量15％,扩培级数2次,此条件下虫草素发酵产量可达6g/L左右.另外,装液量最适高径比为2 cm/30 cm.在此条件下,进行了120 L多层反应器发酵工艺验证.发酵25 d,虫草素产...     

液体发酵蛹虫草中虫草素含量分布的研究

研究蛹虫草在5种不同培养基中经液体发酵后菌丝体和发酵液中虫草素占总虫草素含量的分布情况,建立一种高效液相色谱法测定虫草素的含量的方法。色谱柱为Welch Ultimate XB-C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相：水-甲醇（85∶15,V/V）;流速：1 mL/min;检测波长：260 nm;虫草素在0.312 5～20 μg/mL线性关系良好（R=0.999 7）,加标回收试验中发酵液和菌丝体中虫草素的平均回收率分别是99.5%、99.2%,相对标准偏差（RSD）分别为1.081%、1.086%,稳定性和精密度试验检测结果的RSD分别为2.68%和1.9%。表明该方法的准确性、精密度及稳定性良好。结果表明,液体发酵培养蛹虫草时,发酵液与菌丝体中虫草素的质量比约为97:3,改变培养基的种类不会影响总虫草素在发酵液与菌丝体中的分配比。     

固体培养蛹虫草核苷类次生代谢物的产率

为提高固体培养蛹虫草核苷类代谢物的产率，用高效液相色谱法对培养物的虫草素和腺苷含量进行检测，从菌株、氮源、氮源水平、加水量、培养时间和光照等方面进行研究，在以20％豆粉为氮源、按1：1加营养液、接种Cm-2菌株、遮光培养35d的条件下，培养物的虫草素含量可达5．49mg／g，高于蛹虫草全草，为保健食品增加了新品种和新原料。     

响应面法优化蛹虫草菌丝液体发酵产虫草素培养基

探究利用响应面法优化蛹虫草液体发酵产虫草素的条件,以提高虫草素积累量。以虫草素积累量为指标,同时测定对应的菌丝体产率,利用Plackett-Burman实验筛选影响虫草素积累量的关键因素,再以最陡爬坡实验逼近最大虫草素积累量响应区域,最后应用Box-Behnken方法优化培养基;对虫草素积累量和对应的菌丝体产率数据进行相关性分析。结果表明:在25℃,无光照,160 r/min,p H自然,5 m L/100 m L接种量,优化培养基为:KNO₃0.04 g/100 m L,酵母浸膏1.50 g/100 m L,Fe SO₄·7H₂O 0.03 g/100 m L,KH₂PO₄0.2 g/100 m L,葡萄糖3.82 g/100 m L,Zn SO₄·7H₂O 0.06 g/100 m L,Mg SO₄·7H₂O 0.13 g/100 m L,维生素B₁0.08 g/100 m,虫草素积累量达到852.621μg/m L;在同等条件下,利用优化培养基发酵8 d+静置10 d后,虫草素积累量达到936.225μg/m L。在本实验多组分的条件下,菌丝体产率小于0.857 g/100m L时,虫草素生成的效率较高,而菌丝体产率大于1.703 g/100 m L时,虫草素积累量开始下降;发酵第8 d虫草素积累量和菌丝体产率存在极显著相关关系。      

金属离子对蛹虫草液体培养产胞外虫草素产量的影响

主要研究不同金属离子对蛹虫草液体培养胞外虫草素产量及菌丝体生物量的影响。将含有Mg2+、Fe2+、Fe3+、Zn2+、Mn2+、Cu2+、Ca2+、Co2+及I-的化合物添加到蛹虫草液体培养基中,选择出有利于胞外虫草素产量及菌丝体生物量增加的金属离子,确定其最佳添加浓度。实验结果表明:添加Mn2+、Ca2+、Mg2+能够显著（p<0.05）提高蛹虫草液体培养胞外虫草素产量及菌丝体生物量,其最适浓度分别为Mn2+0.05 g/L、Ca2+0.6 g/L、Mg2+1.0 g/L。      

人工蛹虫草固体培养残基中虫草素的提取分离研究

以人工蛹虫草固体培养残基为原料,采用索氏提取后,用离子交换层析进行分离研究。索氏提取结果表明水比乙醇更优于提取虫草素;离子交换层析分离提取固体培养残基中虫草素的正交实验表明洗脱流速、料水比为主要影响因子,最优条件为:料水比1:16,离子柱pH3.5;洗脱流速为1滴/2秒。     

蛹虫草高产胞外虫草素和虫草多糖的诱变育种

通过诱变获得高产胞外虫草素和虫草多糖的蛹虫草菌株.采用紫外线诱变(UV)、化学诱变(LiCl)、复合诱变(UV-LiCl) 3种方式对蛹虫草孢子进行诱变;发酵检测存活菌株的胞外虫草素和虫草多糖的含量.结果:以胞外虫草素为指标,3种诱变方式的最大正突变率分别为化学突变(29.2％)＞紫外突变(28.6％)＞复合诱变(26.5％);以胞外多糖为指标,最大正突变率分别为紫外诱变(35.7％)＞复合诱变(33.3％)＞化学诱变(27.0％).紫外诱变突变株Z-5-1胞外虫草素产量达0.842g/L,比出发菌株高311％;紫外诱变突变株Z-4-7胞外虫草多糖产量达5.250g/L,比出发菌株高148％.在连续培养5代后,仍具有较好的遗传稳定性.紫外诱变能获得较高的蛹虫草正突变率,同时能获得高产虫草素、虫草多糖的突变株.     

北虫草发酵过程中营养成分及代谢物变化研究

研究了北虫草摇瓶发酵过程中培养基营养成分及其代谢物质变化情况,测定了培养基的pH、总糖、还原糖和可溶性蛋白及游离氨基酸等成分含量,探明了北虫草菌体生长、多糖及虫草素生成规律。结果显示:随发酵时间的延长,发酵液的pH、可溶性固形物、总糖和还原糖含量均总体呈下降趋势;游离氨基酸含量呈先变化迟缓而后上升趋势;北虫草菌丝体及虫草素产量随时间延长先增加后下降;粗多糖含量总体略呈下降趋势。      

不同来源北冬虫夏草活性成分差异及其对小鼠免疫功能的影响

目的：探讨不同来源北冬虫夏草主要活性成分的差异,并评价其调节小鼠免疫功能的能力。方法：使用高效液相色谱法测定不同来源北冬虫夏草虫草素和腺苷的含量;通过测定小鼠免疫器官指数以及碳廓清实验和脾淋巴细胞增殖实验研究其对小鼠免疫功能的影响。结果：虫草素含量由高到低依次为蚕蛹虫草3.68 mg/g、小麦虫草2.86 mg/g、大米虫草2.63 mg/g、头状虫草0.95 mg/g;腺苷含量由高到低依次为蚕蛹虫草1.11 mg/g、小麦虫草0.79 mg/g 、头状虫草0.64 mg/g、大米虫草0.094 mg/g。碳廓清指数和脾淋巴细胞增殖能力研究结果表明4 种虫草均有提高小鼠免疫活性的功效,与空白组相比差异极显著,蚕蛹虫草和小麦虫草功效最佳;饲喂4 种虫草的小鼠免疫器官指数与空白组相比差异显著。结论：不同来源北冬虫夏草的虫草素和腺苷含量有所差异,蚕蛹虫草和小麦虫含量最高,其提高小鼠免疫功能的能力也最强。     

人工培养北虫草子座和培养基中多糖和核苷类成分的含量分析

目的建立分析北虫草中多糖和核苷类成分含量的方法,并对比分析北虫草子座和培养基中的成分.方法用硫酸-苯酚法测定北虫草中多糖含量;用RP-HPLC法同时测定北虫草中尿苷、腺苷和虫草素含量.结果北虫草子座中多糖含量分别为4.67%和4.34%,培养基中为3.42%.北虫草2006年样品与2007年样品比较,尿苷(0.267%vs 0.063%)、腺苷(0.247%vs0.082%)和虫草素(0.054%vs0.166%)含量均有显著差异,2007年样品子座与培养基相比,尿苷(0.063%vs0.052%)和腺营(0.082%vs0.117%)含量无显著差异,培养基中虫草素含量(0.318%)显著高于子座(0.166%).结论建立了北虫草多糖和核苷类成分定量分析方法.该方法简便,可靠,可准确测定北虫草中多糖和3种核苷类成分的含量.     

北虫草中虫草素的NIR快速定量测定

应用近红外光谱(NIR)和偏最小二乘法(PLS),建立了北虫草中虫草素的定量分析校正模型。分别采集北虫草子实体的近红外光谱图,应用TQ化学计量学分析软件,对不同化学计量学处理方法进行了比较,并对光谱区域,光谱预处理方法,主成分因子数进行筛选。依据预测效果确定了最佳的校正模型,虫草素含量的预测结果与HPLC检测结果的相关系数为0.9919,校正模型的定标均方差(RMSEC)为102 mg/kg、预测均方差(RMSEP)为281 mg/kg。本方法操作简便,快速无损,可用于北虫草中虫草素含量的快速检测。