高产β-半乳糖苷酶植物乳杆菌的筛选及其酶学性质研究

β-半乳糖苷酶不仅能通过分解乳制品中乳糖解决乳糖不耐症问题,同时能通过转糖苷作用合成具有益生功能的低聚半乳糖。从8株植物乳杆菌中筛选出高产β-半乳糖苷酶菌株K2,比活力高达6620 U/g,并对β-半乳糖苷酶酶学性质进行研究。结果表明:β-半乳糖苷酶最适和最稳定的pH值为6.5,最适温度为60℃,而在40℃稳定性最强。Mg2+对β-半乳糖苷酶活力有明显促进作用,而Cu2+有强烈抑制作用,通过推导求得米氏常数Km,oNPG=1.15 mmol/L,最大反应速率Vmax,oNP=6.34μmol/(min.mg)。研究结果为具有解决乳糖不耐受症的植物乳杆菌微生态制剂的开发奠定了基础。     

一种来源于青霉的β-半乳糖苷酶酶学性质研究

从土壤里筛选到20株产β-半乳糖苷酶的菌株,其中β-半乳糖苷酶活力最高的是菌株L7,通过形态学观察和18SrDNA序列分析,得出该菌株为斜卧青霉;并研究了其β-半乳糖苷酶的酶学性质。结果表明:β-半乳糖苷酶最适作用温度为60℃,最适pH为6.0,在60℃以下和pH3.0 7.0有较高的稳定性;Mg2+、Mn2+对β-半乳糖苷酶活性有显著的激活作用,Cu2+、Fe2+、和Zn+对酶活有较强的抑制作用;以ONPG为底物采用双倒数做图法测得Km为6.25mmol/L;经过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,该酶蛋白的分子量约为110kDa。     

产低温β-半乳糖苷酶菌株的筛选及其酶学性质研究

从新疆高寒冻土、冷冻乳制品及生乳中分离到101株耐冷菌,利用低温β-半乳糖苷酶筛选模型,获得1株低温酶高产菌株L2004,根据其形态特征、生理生化特性,鉴定为短芽孢杆菌属(BrevibacillusShida,1996)。在以乳糖为主要碳源的发酵培养基中,L2004菌最适生长温度和最适产酶温度分别为20、15℃。该低温酶的最适pH值为6.5,最适作用温度为33℃,0℃相对酶活为总酶活的25%,在0～0℃范围内,具有较好的稳定性。不同金属离子对β-半乳糖苷酶活性的影响为:Mn2 >Mg2 >K >Na >Ca2 >Fe2 >Hg2 >Cu2 >Zn2 。Mn2 、Mg2 增强酶活,而Hg2 、Cu2 、Zn2 抑制酶活。该酶Km值为5.29mmol/L,具低温酶特性。     

草菇中木糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

草菇(Volvariellavolvacea)在20L发酵罐中以稻草粉为基质进行培养,所产生的β 木糖苷酶(β 1,4 xylosidase,EC3.2.1.37)经硫酸铵沉淀、苯基 琼脂糖(Phenyl agarose)疏水性柱层析、DEAE Sephacel阴离子柱层析、TOSOHASS HW 5S分子筛过滤分离等提纯步骤,达到了电泳纯,提纯倍数为241倍,收率为14.5%.该酶反应的最适pH值为6.41～6.76,最适温度为55℃;在pH值5.78～7.68之间酶活力相对稳定,52℃的半衰期(t1/2)为1h.由凝胶过滤和SDS PAGE测得酶由4个亚基组成,酶的相对分子质量为2825000.在所测定的底物中,β 木糖苷酶仅对对硝基苯基 β D 木糖苷有专一性水解作用,其对对硝基苯基 β D 木糖苷水解的动力学参数Km值为2.4mmol/L,vmax为42μmol/(min·mg).该酶催化对硝基苯基 β 木糖苷水解将产物β 木糖反转成α 木糖.     

产β-甘露糖苷酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

本研究通过初筛（魔芋粉为唯一碳源并结合刚果红染色法）和复筛（利于对硝基苯基-β-D-吡喃甘露糖苷法测定β-甘露糖苷酶活力）,从采集的森林土壤中筛选产β-甘露糖苷酶的菌株,获得1株酶高产菌株B19。通过显微形态、革兰氏染色、生理生化特征、16S r DNA序列及系统发育进化树分析等方法,将其鉴定为肠杆菌属（Enterobacter sp.）。菌株B19所产的β-甘露糖苷酶为胞内酶,在37℃、200 r/min条件下培养48 h后,测得的酶活力为1.26 U/m L。初步酶学性质研究表明:该酶的最适反应p H和最适反应温度分别为7.5和50℃,且在p H6.0⁸.0和温度45⁵0℃稳定性较高,浓度为10 mmol/L的Mn2+和Mg2+对该β-甘露糖苷酶具有激活作用,但K+、Fe2+、Ca2+、Cu2+、Co2+及Zn2+抑制酶活力。该菌株可作为产β-甘露糖苷酶的潜在菌株。      

琼胶酶生产菌的筛选、鉴定及其酶学性质的初步研究

从青岛近海的红藻(Gelidium amansii)中分离筛选到一株高活力的海洋琼胶降解菌AT-22，生理生化试验鉴定该细菌为假单胞菌(Pseudomonas sp．)。对其生长、产酶特性和酶活力影响因素的研究结果表明：AT-22所产琼胶酶为诱导酶，0．2％葡萄糖的添加对菌株产酶有抑制作用。该酶作用的最适pH为6．0～7．0，最适温度为40℃，最适底物浓度为1．0％～1．2％，Ca^2 离了的添加对酶促反应有较强的促进作用，而Fe^3 、Mn^2 、Cu^2 和Hg^2 等离子有不同程度的抑制作用。     

β-半乳糖苷酶产生真菌的筛选及酶学性质研究

以乳糖为唯一碳源,从土壤中筛选出产β-半乳糖苷酶的37株真菌,从其中合成低聚半乳糖能力较强的Q5菌株提取胞内酶,进行酶学性质的研究,结果表明,该酶的最适pH为4.5,最适温度为55℃,在pH3-8、低于60℃时稳定;该酶被Fe2+、EDTA激活,受Pb2+、Zn2+抑制,其中被Pb2+完全抑制。     

一株产高温β-半乳糖苷酶低温菌株及其酶学性质研究

从101株低温菌中发现了1株产高温β-半乳糖苷酶菌株G2005,依据形态特征与生理生化反应特性,参照《常见细菌鉴定手册》将其鉴定为乳球菌Lactococcus sp.。该菌株高温β-半乳糖苷酶的最适pH值为6.5,最适作用温度为50℃,65℃相对酶活为总酶活的19%,在30~60℃范围内,具有较好的稳定性。不同金属离子对β-半乳糖苷酶活性的影响为:Mg2+>Na+>K+>Fe2+>Ca2+>Zn2+>Mn2+>Hg2+>Cu2+。Mg2+增强酶活,而Hg2+、Cu2+、Mn2+抑制酶活。经测定该酶Km值为96.8 mmol/L,具高温酶特性。该菌株的最适产酶条件分别为30℃培养48h~60h,培养基初始pH 6.5,培养基乳糖浓度为2%。     

淫羊藿苷糖苷酶的纯化及其酶学性质的研究

对由菌株Absidiasp.E9r在发酵培养中产生的淫羊藿苷糖苷酶进行了分离纯化并对其酶性质进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为65ku,酶反应的最适温度和pH值分别为50℃和4.0,在20～60℃,pH3.0～6.0条件下稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Cu2+对其有很明显的抑制作用;酶反应动力学研究,Vmax=3.012mmol/(L.h),km=58.59mmol/L。     

高温甲壳素降解酶产生菌筛选及其酶学性质研究

采用平板透明圈法,结合摇瓶筛选得到一株高温甲壳素降解酶高产菌芽孢杆菌HU1,其甲壳素降解酶活力达到606U/mL。对其部分酶学性质进行了分析,结果表明:该酶的最适酶解温度为60℃,最适pH为6.5,对GlcNAc-GlcNAc键具有较强的专一性,对CMC、纤维素、可溶性淀粉等无降解活性。一价的金属离子Na+、K+对该酶作用不明显;Mg2+、Zn2+、Ca2+对其有明显的促进作用;而Cu2+、Fe3+则具有显著的抑制作用。此外,酶活力还受DTT及SDS抑制,不受EDTA影响。      

酒醅中高产纤维素酶菌株的筛选及其酶学性质

纤维素酶具有广阔的应用前景,不同来源的纤维素酶具有各自的特点。本研究以浓香型酒醅为材料筛选产纤维素酶微生物,以期望用于酒糟纤维素的降解和利用。研究以羧甲基纤维素钠刚果红培养基对产酶菌株进行筛选,获得一株高产纤维素酶菌株XWS-1,生理生化和分子生物学鉴定结果表明该菌株属于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。在含1%CMC-Na液体培养基中,对该菌株的产酶性能进行研究。结果表明:最佳产酶条件为温度35℃,培养基初始pH5.5,培养时间72 h;进一步对其酶学性质进行研究,结果表明:粗酶液最适反应温度是40℃,最适反应pH为5.5。综上所述,XWS-1所产的纤维素酶为中温酸性纤维素酶,较适合用于酒糟等酸性纤维素原料的降解,从而为进一步酒糟纤维素的降解奠定了一定基础,也为重组降解酒糟的纤维素复合酶提供了基因材料。      

对保健食品中芦荟苷测定标准的改进建议

目的 探讨我国保健食品中芦荟苷测定方法标准中可能存在的问题并提出相关建议。 方法 采用保健食品检验与评价技术规范(2003年版)中测定芦荟苷的方法对大量市售的以芦荟苷为主要功效成分的保健食品样品进行检测分析,通过实践对所遇到的问题进行分析总结。结果 芦荟苷是两个非对映异构体芦荟苷A和芦荟苷B的混合物,采用标准方法所测的保健食品中的芦荟苷含量可能仅为芦荟苷A的含量,而并不是芦荟苷的总含量。结论 建议对保健食品中芦荟苷的测定方法进行进一步深入研究,以逐步完善国家标准。     

一平浪盐矿产蛋白酶嗜盐古菌的鉴定及其酶学性质

从分离自一平浪盐矿的嗜盐古菌中筛选产胞外蛋白酶菌株,并对所产蛋白酶的酶学性质进行初步研究。结果表明,2株高产胞外蛋白酶嗜盐古菌YPL20和YPL26为盐矿盐古球菌（Halococcus salifodinae）。YPL20胞外蛋白酶最适反应条件为50℃,p H9.0和0 mol/L Na Cl。YPL26胞外蛋白酶最适反应条件为50℃,p H7.0⁹.0和2.5 mol/L Na Cl。它们具有良好的热稳定性、酸碱稳定性和盐度耐受性。Mn²⁺、Ca²⁺对YPL20和YPL26的蛋白酶活性均有促进作用,而Cu²⁺、Zn²⁺均有抑制作用。丝氨酸蛋白酶抑制剂完全抑制YPL20和YPL26的蛋白酶活性,说明YPL20和YPL26的胞外蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。      

生淀粉酶产生菌的筛选和研究

利用透明圈法再经单菌分离纯化从土壤中筛到一株产酶为158U/mL的生淀粉酶产生菌TCCC451031,经16S rDNA鉴定为Paenibacillus属。最适发酵培养基:碳源为2%的玉米粉,最佳氮源为酵母粉与玉米浆混用比例为1∶2,用量为1%。最适发酵条件:35℃、pH值为7.0、转速160r/min,发酵5d酶活达312U/mL。该酶最适作用温度40℃,最适作用pH值为4.2,Ca2+、Mg2+、Zn2+对酶有一定的激活作用,Cu2+、Mn2+、K+、Fe2+、Ba2+对酶活有抑制作用。     

米黑毛霉凝乳酶酶学性质研究

研究了米黑毛霉凝乳酶的最适温度、最适pH、热稳定性,探讨了金属离子对酶活力的影响,加酶量对酶反应的影响,测定了酶的蛋白水解活力和酶的K^m与V^m值。结果显示：酶的最适温度为70℃;最适pH6;酶液在65℃保温10min,酶活损失达96％;Na^＋和K^＋对酶稍有抑制作用,Fe^2＋对酶有促进作用,Cu^2＋对酶有强烈的抑制作用;减少酶的添加量,在规定时间内凝乳会导致凝乳酶酶活测定结果偏大;凝乳酶蛋白水解活力为1048U／g;Km为190．84g／L,Vmax=7．8678g／s。     

纤维素酶高产担子菌株的筛选鉴定及酶学性质初探

从河北省棉田土壤样中分离出一株纤维素酶高产菌株,经中科院微生物所鉴定,初步确定为一株担子菌(a basidiomycetous specie),将其命名为担子菌LKY01.对该菌株酶学性质进行了初步探索.研究表明,本酶反应最适pH值为5.0左右;最适反应温度约60℃;Co2+、Mn2+对本酶酶活有明显的抑制作用,Cu2+、Fe2+、Ca2+、Na+、K+、Sr2+、Mg2+对本酶有一定的促进作用;在50℃下本酶有较好的稳定性,其酸碱稳定范围在pH 4.0～8.0.     

高效液相色谱法测定芦荟甙的4个标准方法比较

目的比较4个标准方法中高效液相色谱法测定芦荟及其制品中芦荟甙含量的优劣。方法分别采用4个标准的前处理方法处理芦荟及其制品,并对样品做低、中、高3个浓度水平的加标实验,采用4个色谱方法测定芦荟甙的含量。通过计算相对标准偏差和回收率等方面来评价4个方法的优劣。结果芦荟甙的出峰时间为8.807 min。线性方程为Y=13700X+16000,相关系数r为0.9994。4种方法的相对标准偏差为0.21%、0.37%、0.35%和0.18%,加标回收率为97.3%、98.3%、98.8%和98.5%。结论 4个方法的测定结果均满足对芦荟及其制品测定芦荟甙前处理要求,其中QB/T2489-2007《食品原料用芦荟制品》的前处理步骤最方便快捷,使用的有机试剂量最少,回收率最高。适用于芦荟及其制品中芦荟甙含量的测定。     

海藻酸钠固定化碱性蛋白酶制备及酶学性质的研究

对采用海藻酸钠固定化碱性蛋白酶的方法和酶学性质进行了研究。在单因素实验基础上,采用响应面优化方法确定固定化的最优条件,得到的最佳条件为:海藻酸钠浓度3.1%,pH9.4,CaCl2浓度3.0%,游离酶添加量10000U/g,时间1.8h,固定化酶活力可达5518U/g。固定化酶的最适pH为10,最适温度为60℃,制得的固定化酶的热力学稳定性和操作稳定性较好。此外,固定化酶重复利用5个循环后酶活力仅降低40%。     

Effects of temperature,pH and light on the stability of aloin A and characterisation of its major degradation products

This study explored the stability and degradation products of aloin A under varying pH, temperature and light conditions usually encountered in processing. The stability of aloin A was significantly affected by temperature and pH. The content of aloin A decreased by more than 90% within 12 h at 50 °C and within 6 h at 70 °C, respectively. A significant decrease in stability was also observed at higher pHs. At pH 8.0, less than 2% of aloin A remained within 12 h. However, aloin A exhibited good stability at acidic pH levels with 94% remaining at pH 2.0 for 14 days. Light exerted no influence on the stability during the experimental period (14 days). Aloe‐emodin, elgonica‐dimers A and B were characterised as major degradation products of aloin A at pH 5.0 or below, and elgonica‐dimers were mainly formed at 4 °C as well. 10‐hydroxyaloins A and B were found under any condition except at pH 2.0 and 3.0, and they were mainly formed under high temperature, neutral‐basic and any light conditions.     

产木聚糖酶菌株的筛选、鉴定及其酶学性质研究

以木聚糖为唯一碳源,采用平板筛选和摇瓶发酵相结合的方法,从腐朽木头中分离、筛选到一株高产木聚糖酶菌株XE-13-1,根据菌株的形态特征,并结合18S rDNA序列分析,初步鉴定菌株XE-13-1为桔绿木霉（Trichoderma citrinoviride）。经测定,菌株XE-13-1所产木聚糖酶的最适反应温度为50 ℃,最适反应pH值7,具有较好的pH稳定性。在30 ℃、pH 5～10的条件下保温2 h,该酶仍具有78%以上的酶活力。Mg2+、Fe2+、K+、Zn2+对该酶具有明显的促进作用,Cu2+对该酶具有明显的抑制作用。酶学性质研究结果表明,该酶在工业应用上具有较好的前景。