响应面法优化Ganoderma lucidum产漆酶种子培养基

以菌丝体生物量为指标,采用响应面法对产漆酶的灵芝菌UIM281的种子培养基组成进行了研究。首先采用单因素实验确定影响UIM281菌丝体生长的碳源、氮源及无机盐的种类和浓度范围。在此基础上,应用Box-Behnken设计对影响菌丝体生物量的显著因素进行优化,最终建立了以菌丝体生物量为响应值的二次回归方程模型,获得了最适的菌丝体增殖种子培养基。结果表明,在VB10.1g/L的条件下最佳种子培养基组成为:玉米粉18.0g/L,豆饼粉12.3g/L,MgSO4·7H2O 1.8g/L,在28℃,150r/min条件下振荡培养6d后,可获得24.18g/L菌丝体,可为漆酶发酵培养提供质优量大的接种体。     

黑曲霉β-葡聚糖酶产酶培养基的研究

探讨了黑曲霉(Aspergillusniger)FH11菌株产β-葡聚糖酶最佳培养基的组成。通过单因素试验,确定了培养基的组分和一些化学物质对酶合成的影响,结果表明,适当添加某些物质可以促进产酶,提高酶活。根据单因素实验结果,通过正交试验,确定了培养基中最佳碳源为3%大麦粉,最佳氮源为2%酵母粉和0.2%硫酸铵,优化了摇瓶发酵产酶培养基的组成。     

产酶培养条件对一株嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的影响

本实验用MRS培养基嗜酸乳杆菌,并通过添加亚油酸(LA)诱导其产亚油酸异构酶。单因素试验结果表明,在MRS培养基中添加糖类物质总体上不利于产酶,添加尿素、牛肉膏、酵母膏、酪蛋白等有机氮源后,酶活力比对照组有较大幅度提高,而添加无机氮源酶活力增加幅度不如有机氮源。在培养基中添加一定量的NaCl和卵磷脂也有助于酶活力的提高。由正交试验结果确定的最佳产酶条件为:培养温度37℃,培养时间24h,每100ml培养基中添加10mgLA,接种量3%(V/V)。     

耐热过氧化氢酶基因工程菌的构建及其发酵条件

利用PCR扩增技术以嗜热脂肪芽孢杆菌IAM11001染色体DNA为模板，扩增得到嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶编码基因perA。再与经EcoRⅠ酶切的温控表达载体pBV220连接，构建重组质粒，并转化宿主大肠杆菌JM109，得到耐热过氧化氢酶基因工程菌，然后对该工程菌在LB培养基和半合成培养基中的发酵条件进行了优化。结果表明：在LB培养基中，诱导时期和酶合成最佳诱导时间均为5h，最大产酶量达到72．9U／mL；在半合成培养基中，于30℃培养4h，再于42℃诱导培养6h，产酶量最高达到131U／mL。     

红芝漆酶高产菌株的诱变选育

以药用真菌红芝(Ganoderma lucidum)为出发菌,通过紫外线(Ultraviolet ray,UV)、亚硝基胍(Nitrosoguanidine,NTG)及紫外线(UV)-亚硝基胍(NTG)逐级诱变处理其菌丝体片段,采用平板变色法初筛、愈创木酚法测定发酵液漆酶酶活力复筛,获得1株漆酶高产诱变菌株LYL263。用复筛液体培养基震荡培养时,其平均酶活力比出发菌株提高187%,达到145 500 U/L,且产酶稳定。     

米曲氨基酰化酶的固态发酵条件研究

对米曲霉3042产氨基酰化酶的固态发酵奈件进行研究,固态发酵培养基中,培养基组分麸皮与豆粕的最佳质量配比为8:2,产酶到达高峰的时间为38～48h.添加底物或底物类似物作为诱导物时,对提高米曲氨基酰化酶的酶活力作用不明显.添加吐温-80和植酸复合促进刑为培养基总质量的0.05%后,米曲霉产酰化酶达到高峰的时间为28～38h,其酶活力与不添加促进剂时的酶活力相比,提高到原来的271.94%.     

产胞外β-葡萄糖苷酶乳酸菌的筛选及其酶学性质的初步研究

用荧光底物法从20种可利用纤维二糖的乳酸菌中筛选出10株产胞外β-葡萄糖苷酶的乳酸菌,在MRS培养基中筛选出粗酶液酶活较高的1株植物乳杆菌KLDS1.0320,进一步研究了其产酶的特点、酶学性质,结果表明,植物乳杆菌KLDS1.0320产生的胞外β-葡萄糖苷酶受底物纤维二糖的诱导,但与底物浓度有关。粗酶液酶活的最适pH为4.8,最适温度为37℃。在pH值为4.0,温度为48℃条件下仍具有酶活力。     

植物乳杆菌β-D-葡萄糖苷酶的定位及活性研究

以对硝基苯基β-D-葡萄糖苷为底物,通过比色法从5株植物乳杆菌中筛选出2株有较高β-D-葡萄糖苷酶酶活力的菌株,并利用差速离心分级沉淀对其β-D-葡萄糖苷酶进行定位。根据对植物乳杆菌的生长状况的分析,测定其在不同生长条件下β-D-葡萄糖苷酶的酶活力。结果表明:目的菌株体内的β-D-葡萄糖苷酶为胞内酶,属于细胞膜结合酶;该酶在对数生长末期(培养至12 h)酶活力最高,最适产酶培养基为改良MRS培养基;以完整细胞为参照对象,植物乳杆菌520、XJ-25菌株所产的β-D-葡萄糖苷酶均受纤维二糖及熊果苷的诱导,熊果苷的诱导作用较强。     

黑曲霉固体发酵β-葡聚糖酶培养基优化的研究

对黑曲霉 (Asp·niger)FSN6 5固体发酵产β-葡聚糖酶培养基优化研究结果表明 :培养基中C/N(以麸皮与豆饼粉比例计 )为 8:1 ;最佳无机氮源为NH4NO3;培养基中添加大麦对产酶没有明显的诱导作用 ;培养基最适水分比例为 1 :1 (g/g) ;30℃下发酵 70h产酶水平高达 1 36 1 2 2 .5u/g     

固定化谷氨酰胺酶及其性质的研究

采用聚乙烯醇,将黑曲霉AS3350菌丝体用包埋法固定化,经活化与诱导,其酶活力远高于游离细胞,固定化酶的作用最适温度为37℃,耐热性比游离细胞提高,活化的最适温度为30℃,pH7.0—7.5,时间为45hr,并探讨了其耐盐性。     

产漆酶真菌筛选及其固态发酵条件的初步研究

目的筛选产漆酶真菌,优化固态发酵培养基组成,研究粗酶的酶学性质.方法平板筛选获得菌株,通过测定漆酶活性优化培养基的组成.结果获得了固态发酵条件下产漆酶活性较高的菌株.优化后培养基的组成:豆粕和木屑比例1:1,木糖0.5%,酒石酸铵2.0%,培养基含水量65%.漆酶最适温度60℃,低于50℃时漆酶较稳定,最适pH 3.5,pH 6.5～9.0之间漆酶稳定性较好.结论得到了产漆酶活性较高的菌株,培养基优化后漆酶活性提高7倍.     

产几丁质降解酶菌株的筛选及其产酶条件

采用平板透明圈法从土壤中分离筛选到一株产几丁质降解酶菌株L12酶活力为0．63U／mL。通过产酶条件优化，初步确定了该菌株较适产酶培养基和摇瓶发酵条件。条件优化后酶活力提高约1．6倍，达到1．06U／mL。     

高产蛋白酶菌株的筛选及产酶条件优化

从山西临汾汾河滩涂的表层土壤中分离到22株产蛋白酶菌株,用检测蛋白酶产生水解圈和蛋白酶活性测定相结合的方法,从中筛选出一株高产蛋白酶菌株P5,并通过正交试验对其产酶条件进行了研究。结果表明,影响P5菌株发酵产酶因素的主次顺序为培养温度、接种量、培养时间;影响P5菌株发酵培养基组成因素的主次顺序为氮源含量、起始pH值、碳源含量;确定的P5菌株的最佳产酶条件为,在以30 g/L葡萄糖为碳源,50 g/L蛋白胨为氮源,起始pH7.0的最适产酶培养基中,培养温度35℃,接种量为8%的条件下发酵培养48 h,具有最大产酶量,其蛋白酶活力可达129.2 U/mL。     

产纤溶酶海洋放线菌的筛选及初步鉴定

从渤海湾海水和海泥样本中筛选得到产纤溶酶的菌株。通过添加抑制剂对样品预处理、调整培养基配方和添加目标蛋白诱导培养以筛选得到菌株,通过生理生化实验和16S rRNA序列分析,进行菌株种属鉴定。结果表明,调整富集和筛选的培养基配方,获得了一株产纤溶酶的菌株MY0504,初步推断为链霉菌属（Streptomyces sp.）。     

产过氧化氢酶的乳酸菌的筛选和产酶条件的研究

从不同生态环境分离到21株产酸菌,从中筛选出一株产乳酸力强、产胞外过氧化氢酶活力较高的菌株TL012,其产酶最适温度为38℃,初始培养始pH6、培养50小时,在脱脂奶粉培养基中产酶可达98.40μ/ml。     

对菊粉酶产生菌B-3-3发酵条件、酶的分布及酶学特性的研究

经过对pH、摇瓶装量、底物浓度及碳源种类与酶合成之关系进行研究,发现B-3-3菌株在碱性条件,较大通气量,和较高的碳源浓度下产菊粉酶较高,可达21u/ml。当以蔗糖代替菊粉为碳源时,产酶更高。而其它所试糖类较小或没有诱导菊粉酶合成的作用。改进种子液的制作和种子液培养基的成份,大大缩短了酶合成的时间,并提高了酶的产量。 对B-3-3的菊粉酶在胞内外分布进行了研究,结果为胞内酶:胞外酶约为1∶2;pH和温度对酶的活性和稳定性影响较大,其最适pH为6.5,最适温度55℃。在pH6～8的范围内和55℃以下,酶较稳定。     

白腐菌Pleurotus eryngii-Co007产木质素降解酶条件的优化

木质素降解酶是参与降解木质素的酶类,广泛存在于白腐真菌中。为提高白腐菌Pleurotus eryngii-Co007的产木质素降解酶的活力,研究了该菌株的产酶曲线、发酵参数及培养基组分对其产木质素降解酶的影响。单因素试验结果表明该菌株发酵第8天时发酵液中木质素降解酶酶活最高;较优的发酵参数是pH 5.0~6.0、发酵温度25~27℃,接种量10%~15%,其中pH影响最显著;麦芽糖和有机氮源有利于木质素降解酶的表达。但考虑到酶表达的增加量和生产成本的经济性选择3%的葡萄糖、0.2%酵母粉和0.2%牛肉膏组合氮源;诱导剂中秸杆、Cu2+和吐温80诱导产酶效果明显。     

青霉菌α-葡萄糖苷酶固体发酵及酶学特性的研究

研究青霉菌种P1固体培养生产α-葡萄糖苷酶的发酵条件,固体培养条件下培养基中碳源、氮源及添加物对青霉P1产α-葡萄糖苷酶的影响以及青霉P1产α-葡萄糖苷酶的最适温度、pH、热稳定性及pH稳定性等酶学特性。     

产壳聚糖酶的海洋青霉菌筛选及其寡营养发酵的探究

从海边海螺、贝壳及其附着物的微生物中筛选出产壳聚糖酶的青霉菌。以此菌为出发菌,以降低发酵产酶成本为目的,采用不同的发酵温度,分别添加不同诱导物进行发酵产酶,探讨温度、诱导物对菌种生长、酶活力的影响。实验结果表明:低聚糖诱导产酶效果最好,室温25℃进行壳聚糖酶发酵,普通培养基酶活力最高达3.57U/mL。海水寡营养发酵产酶的适宜培养基配方为(g/L):蛋白胨9g、葡萄糖10g的海水培养基,酶活力可以达到3.16U/mL,初步实现利用海水进行寡营养发酵产酶,该菌株具有工业应用潜力。     

中药药渣发酵生产毛云芝菌漆酶培养基的工艺研究

为充分利用中药药渣,该研究探索不同中药药渣对毛云芝菌漆酶产酶效果的影响。结果表明:大黄、麻黄和芍药药渣可有效促进毛云芝菌漆酶的产量。在选择大黄药渣的基础上,优化药渣培养基的组成为麸皮3%,蛋白胨0.2%,大黄药渣12%,MgSO43g/L,KH2PO43g/L,pH值5.0,该培养基产酶酶活可达到4 828.2 U/mL,约是优化前培养基产酶酶活的1.4倍。