大米蛋白抗氧化肽的酶法制备工艺研究及其优化

以大米蛋白粉为反应底物,采用酶解法制备大米蛋白抗氧化肽。以酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶3种蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶为最佳用酶。通过BoxBehnken响应面设计法优化木瓜蛋白酶酶解大米蛋白抗氧化肽的工艺条件为p H值5.25、酶解温度61.4℃、加酶量5.6 U/m L、底物质量浓度5.3 g/100 m L。其酶解液稀释5倍后对DPPH自由基的清除率为94.8%。     

双酶法制备银杏抗氧化肽工艺研究

为获得制备银杏抗氧化肽的最佳工艺,采用2709碱性蛋白酶和胃蛋白酶分步水解银杏种仁蛋白,以总还原能力为指标,考察酶用量、酶解温度、pH值和酶解时间这4个因素对银杏种仁蛋白酶解效果的影响。通过响应面试验得出2709碱性蛋白酶的最佳酶解工艺为：酶用量为6976U/g、酶解温度为55℃、pH值为8.9、酶解时间为5h,此时银杏种仁蛋白酶解液的总还原能力(A700nm)为1.278;通过正交试验,得到胃蛋白酶的最佳酶解工艺为：酶用量为9000U/g、pH值为3.0、酶解温度为50℃、酶解时间为2h,此时银杏种仁蛋白酶解液的A700nm为1.636。     

酶法水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽工艺的优化

以牦牛皮为原料,用碱性蛋白酶水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽。以水解度和牦牛皮蛋白水解物对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为评价指标,在单因素实验的基础上,结合响应面（Box-Behnken）试验设计筛选出牦牛皮抗氧化肽的最佳制备工艺。结果表明,最佳制备工艺为:水解温度51 ℃,酶用量10890 U/g,水解时间10.6 h,pH8.5,底物浓度5%,此时水解度为41.39%±0.69%,牦牛皮抗氧化肽清除DPPH·、ABTS+·、·OH的IC₅₀值分别为2.884、2.110、2.523 mg/mL。综上,该制备工艺下的牦牛皮抗氧化肽对自由基有良好的清除能力,且有较强的还原能力,说明牦牛皮抗氧化肽有望作为天然抗氧化剂得到开发利用。     

乳清蛋白源抗氧化肽的酶法制备及评价方法的研究进展

氧化应激可引起细胞损伤和多种慢性疾病,饮食中的抗氧化剂可以帮助人体清除自由基。人工合成的抗氧化剂虽然具有很强的活性,但在机体内存在潜在的风险,因此,人们把目光转向了天然的抗氧化剂。近年来乳清中的乳清蛋白因其衍生肽具有较强的抗氧化活性而备受关注。该文综述了乳清蛋白源抗氧化肽的酶法制备及抗氧化的作用机理,归纳并对比了其抗氧化活性评价方法,指出了目前乳清蛋白源抗氧化肽在动物机体内的活性评价及作用机理方面的研究仍存在不够深入的问题,以期为进一步综合利用乳清蛋白产品提供思路。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

酶解乳蛋白制取乳源肽的研究

用酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶对牛乳蛋白进行水解，研究了水解工艺，并通过正交试验对工艺进行了优化。结果为：酸性蛋白酶水解牛乳蛋白的最佳工艺条件是：水解温度50℃，时间120min，pH值3．0，加酶量8．0％；中性蛋白酶水解温度50℃，时间90min，pH值7．0，加酶量1．60％；碱性蛋白酶水解温度60℃，时间105min，pH值9．0，加酶量8．0％。中性蛋白酶水解物苦昧最小，最适宜作食品。     

绿豆抗氧化肽的酶法制备及其抗氧化活性

为提高绿豆淀粉生产过程中产生的废弃物绿豆蛋白的资源利用率,研究了酶法制备绿豆抗氧化肽的最佳条件,并探究其抗氧化活性。通过选用不同蛋白酶及其复合酶,对绿豆蛋白进行水解,综合考虑反应时间、加酶量等因素,对酶解反应进行优化。通过体外抗氧化实验对水解制得的多肽溶液进行抗氧化能力检测,最终确立了最佳的反应条件,具体如下：选用中性蛋白酶进行酶解,底物质量分数3%,酶解时间3 h,加酶量质量分数2%,pH 7,温度50 ℃。按照该条件所制得的绿豆多肽溶液,质量浓度为5 mg/mL时,DPPH自由基清除率可达（91.58±2.44）%,同时还具有较强的还原能力。经凝胶层析柱分离纯化后得到5个分离组分,其中小分子肽段组分5的抗氧化能力最强,高于其他大分子肽段以及未分离多肽。     

酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

本文研究了酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,通过水解度与羟自由基（·OH）清除率来综合评价水解产物的抗氧化能力。以·OH清除率为指标,从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适酶。在单因素实验研究酶浓度、底物浓度与水解时间对酶解产物·OH清除率和水解度影响的基础上,通过L₉（4³）正交实验对水解工艺进行优化。结果得出,碱性蛋白酶活力高于其他4种蛋白酶,能使蛋白质充分水解,正交实验各因素对水解产物·OH清除率的影响程度依次为底物浓度>酶浓度>水解时间。其中,碱性蛋白酶的最佳水解工艺条件为:底物浓度3.0%、酶浓度3500 U/g、p H9.0、温度55℃、水解时间3.5 h。在此条件下,水解产物的·OH清除率可达82.7%,水解度为23.1%。碱性蛋白酶水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺可行,为滑菇蛋白高附加值产品的开发提供技术参考。      

响应面优化酶法制备茶叶蛋白抗氧化肽的工艺研究

以茶渣为原料,选用碱性蛋白酶,以酶解液的还原能力作为评价指标,制备抗氧化肽,对酶解温度、酶解时间、加酶量、pH、底物浓度五个因素进行研究,并通过响应面分析对酶解工艺进行了优化,结果表明:在最佳条件:底物浓度3.3％、加酶量1.8％、提取温度51℃、pH9、酶解时间2.5h时进行酶解,所得酶解液还原能力最强.     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

双酶水解脱脂麦胚制备抗氧化肽工艺的研究

以脱脂麦胚为原料,利用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶双酶水解制备具有抗氧化活性的麦胚肽。以水解度为考察指标,采用响应面法,对酶解工艺进行优化。实验结果表明双酶水解最佳条件是：[E]/[S]为0.03,温度在52℃,酶解2.2 h时,麦胚蛋白水解度达到最大值为17.26%。     

响应面法优化酶法制备猪血红蛋白抗氧化肽

以猪血红蛋白为原料,研究蛋白酶水解制备抗氧化肽的工艺.通过研究酶解时间、酶与底物比、酶种类对制备的抗氧化肽还原力和水解度影响,筛选出最佳蛋白酶及制备抗氧化肽的最佳工艺条件.结果表明:7种酶中,胃蛋白酶的水解度和还原力最佳.胰蛋白酶和胃蛋白酶复合水解比单酶水解的水解度提高了11.83％,还原力没有显著性差异.在此基础上设计单酶响应面,得到最佳还原力酶解条件为:酶解温度37.31℃、pH1.95、酶与底物比3526.74U/g.脱色条件为活性炭用量3％、pH4.0、温度70℃、脱色时间1h,粉末状活性炭的脱色率达到85.69％,蛋白质损失率20.32％.     

基于乳清蛋白粉水解产物抗氧化活性优化酶解工艺

通过提高乳清蛋白粉水解产物(Whey protein powder hydrolysate,WPPH)的抗氧化活性,对乳清蛋白粉的酶解工艺进行优化。首先以WPPH水解度及抗氧化活性(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、羟自由基清除率、总抗氧化能力)为指标,从4种蛋白酶中筛选得到酶解效果较好的胰蛋白酶和菠萝蛋白酶。然后通过单因素与正交试验确定双酶协同水解乳清蛋白粉的最适酶解条件。结果表明:复合酶最优酶解条件为菠萝蛋白酶和胰蛋白酶以1:1的比例同时添加,pH6.0、温度50℃、酶底比0.3%、底物浓度3 g/100 mL、酶解时间2.5 h,在此条件下WPPH水解度达到34.24%,分子量低于1000 Da的肽段占比在50%以上,DPPH自由基清除率91.42%±0.51%、羟自由基清除率80.85%±0.47%、总抗氧化能力(46±0.65)μmol/L。在本研究确定的酶解工艺条件下,乳清蛋白粉水解产物具有较强的抗氧化活性,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

发酵法制备乳清抗氧化活性肽的研究

采用乳酸菌发酵法制备乳清抗氧化活性肽。从发酵菌株的筛选到发酵条件的优化以及多肽抗氧化活性比较方面做系统的研究。采用液态发酵法,以水解度和O2·-清除率为指标,筛选组建二元混菌体系;通过正交试验优化二元混菌体系的发酵工艺条件,以确定最佳发酵时间。试验结果表明,最佳发酵条件:初始pH6.4,发酵温度37℃,接种量5%,在此条件下测得乳清水解产物O2·-清除率为39.45%,最佳发酵时间14h。乳清多肽抗氧化活性的比较结果显示,随着活性肽浓度的升高,其总抗氧化能力、·OH清除率、O2·-清除率、总还原能力都有明显提高,表明乳清多肽具有抗氧化性。     

酶解双孢菇蛋白制备抗氧化肽的研究

为建立木瓜蛋白酶酶解双孢菇蛋白制备抗氧化肤的最优工艺,采用响应面分析法研究酶解时间、酶与底物比([E]/[S])和酶解温度对工艺的影响.以羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2ˉ·)的清除率为响应值,最终确定酶解双孢菇蛋白制备抗氧化肽的最佳条件是:时间4.11 h,[E]/[S] 3.79％,温度54.76℃.在此条件下酶解液的·OH清除率和O2ˉ·清除率分别为89.61％和60.63％,与理论预测值90.41％和61.43％的相对误差均在1％以内,说明所建模型具有较好的拟合性.酶解液抗氧化肽经Sephadex G-50凝胶层析法分析,相对分子质量主要分布在600～2600之间.     

乳清蛋白肽美拉德反应产物的抗氧化活性与稳定性

以乳清蛋白碱性蛋白酶水解物为原料与葡萄糖发生美拉德反应,制备得到乳清蛋白肽美拉德反应产物（whey protein peptide Maillard reaction products,WPP-MRPs）,并研究其抗氧化活性以及温度、pH值、光照、金属离子和过氧化氢对其抗氧化活性的影响。结果表明,WPP-MRPs具有较强的总还原力、羟自由基（·OH）清除能力和2,2’-连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸）二铵盐自由基（ABTS+·）清除能力,且抗氧化活性随着WPP-MRPs质量浓度的增加而加强。WPP-MRPs在90～100 ℃时具有较高的活性;在碱性环境中的抗氧化活性大于在中性及酸性环境中;室外自然光照射会降低WPP-MRPs抗氧化活性;金属离子Cu2+、Fe2+、Fe3+和氧化剂--过氧化氢能够显著降低WPP-MRPs的抗氧化活性。     

酶法水解荞麦球蛋白制备抗氧化活性肽的研究

分别采用3 种蛋白酶水解荞麦球蛋白,以酶解液水解度和对O2·的清除率为指标,研究酶解荞麦球蛋白的最佳工艺。并进一步对酶解产物进行Sephadex G-25 凝胶柱层析分离,然后对其各分离组分清除O2·、·OH 和DPPH·的能力及分子量分布进行研究。结果显示：采用碱性蛋白酶水解荞麦球蛋白效果优于胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,最佳酶解工艺条件为：加酶量20000U/g,温度55℃,pH9,底物浓度5%,反应时间2h;经柱层析分离得到的分子量小于1000D 的组分Ⅲ显示了较强的抗氧化能力。其清除O2·、·OH 与DPPH·的IC50 分别为0.75、0.897、0.38mg/ml,高于分子量较大的组分Ⅰ和未经分离的荞麦球蛋白酶解液。     

酶法制备明胶过程中工艺参数的优化

明胶是胶原蛋白部分水解的产物,是从动物的皮、骨等结缔组织中提取而成,广泛应用于感光材料、药品和食品中。为达到提高明胶的产率和质量的目的,采用酶法制备明胶,对胃蛋白酶酶酶解过程进行了研究,并对相应参数进行了优化。最终得出了最佳的工艺参数为使用胃蛋白酶酶解,酶解的初始pH为2～3;间歇搅拌,反应时间为5 h～6 h;酶用量为0.28 g(以每公斤生皮计);溶胶过程的初始pH为5,溶胶温度为70℃→75℃→85℃;搅拌速度为20 r/min～40 r/min。在此条件下,明胶产率可以达到20.37%,黏度可达9.53 mPa.s,提高了明胶的产率和质量,取得了较好的效果。