黑曲霉果胶酯酶固定化前后酶学性质比较研究

采用明胶加戊二醛包埋法和蛋壳微粒吸附法分别对黑曲霉果胶酯酶进行了固定化,并研究了两种固定化方法制备得到的固定化黑曲霉果胶酯酶的酶学性质。结果表明,通过固定化,黑曲霉果胶酯酶的各项酶学性质指标都得到了改善,明胶固定化果胶酯酶和蛋壳固定化果胶酯酶的酶活回收率分别为46.3%和42.2%,而且与游离果胶酯酶相比,两种固定化酶的最适温度都由40℃上升到45℃,最适pH由4.4下降到4.0和4.2,Km值0.0113%由下降到0.0033%和0.0027%。      

黑曲霉果胶酯酶固定化前后酶学性质比较研究

采用明胶加戊二醛包埋法和蛋壳微粒吸附法分别对黑曲霉果胶酯酶进行了固定化,并研究了两种固定化方法制备得到的固定化黑曲霉果胶酯酶的酶学性质.结果表明,通过固定化,黑曲霉果胶酯酶的各项酶学性质指标都得到了改善,明胶固定化果胶酯酶和蛋壳固定化果胶酯酶的酶活回收率分别为46.3%和42.2%,而且与游离果胶酯酶相比,两种固定化酶的最适温度都由40℃上升到45℃,最适pH由4.4下降到4.0和4.2,Km值0.0113%由下降到0.0033%和0.0027%.     

固定化果胶酯酶的研究

采用明胶作载体和戊二醛作交联剂制备固定化果胶酯酶,并对其固定化条件、酶学性质和应用进行了研究。结果发现,明胶浓度为15%、戊二醛为5%、固定化酶量0.15mL(稀释6.7倍),缓冲液pH4.0时制备的固定化酶的酶活和回收率较高,分别是48.725U和68.81%;固定化酶的最适温度45℃,最适pH4.0,Km值0.017%,pH2.8～6.0稳定;果胶酯酶固定化后温度稳定性、贮存稳定性和操作稳定性都明显增强,50℃下保温3h,酶活保留86%;4℃贮存16d,酶活保留90.15%。反复利用6次,酶活仍保存80.99%,半衰期为11.7d。固定化酶作用于高酯果胶不同时间后得到甲氧基含量呈下降趋势的低酯果胶。     

利用果胶酯酶制备低酯果胶工艺研究

研究高酯果胶脱酯工艺的最佳条件;利用果胶酯酶对商品高酯果胶进行脱酯,采用L934正交试验法研究确定酶用量、脱酯温度、pH及脱酯时间对脱酯效果的影响.利用果胶酯酶进行脱酯的最佳工艺参数为:果胶酯酶0.06 g,脱酯温度45℃,脱酯pH 7,脱酯时间70 min,所得果胶甲氧基含量为4.96%.利用酶法制备低酯果工艺简单,脱酯效率较高.     

酶法制备低甲氧基果胶的工艺研究

以新鲜橙皮为原料,在盐酸水解乙醇沉淀提取果胶之前,激活并利用果皮中固有的果胶酯酶进行果胶的酶法脱酯,制备低甲氧基果胶,以产品的甲氧基含量和果胶得率为指标,确定最佳工艺条件。结果表明,新鲜橙皮内源酶法制备低甲氧基果胶的最佳工艺条件为:加入果皮浆液量0.15%的内源性果胶酯酶激活剂碳酸钠,控制温度45℃,pH8.0进行脱酯,时间60min;果胶提取温度90℃,时间60min,pH2.0。在此条件下制备的果胶甲氧基含量为5.93%,符合低甲氧基果胶标准,果胶得率为2.46%。     

酶法制备低甲氧基果胶的工艺研究

以新鲜橙皮为原料,在盐酸水解乙醇沉淀提取果胶之前,激活并利用果皮中固有的果胶酯酶进行果胶的酶法脱酯,制备低甲氧基果胶,以产品的甲氧基含量和果胶得率为指标,确定最佳工艺条件。结果表明,新鲜橙皮内源酶法制备低甲氧基果胶的最佳工艺条件为:加入果皮浆液量0.15%的内源性果胶酯酶激活剂碳酸钠,控制温度45℃,pH8.0进行脱酯,时间60min;果胶提取温度90℃,时间60min,pH2.0。在此条件下制备的果胶甲氧基含量为5.93%,符合低甲氧基果胶标准,果胶得率为2.46%。      

黑曲霉果胶酯酶在毕赤酵母中异源表达、性质分析及脱酯工艺优化

果胶酯酶作为一种食品酶制剂,因其能够将高酯果胶的甲酯基脱去生成低酯果胶而受到广泛关注,但目前国内尚无自主研发的商品果胶酯酶。为了促进果胶酯酶的应用,该研究合成了密码子优化后的黑曲霉果胶酯酶基因,并实现了其在毕赤酵母X33中成功表达。3 L发酵罐高密度发酵96 h后,得到的发酵液上清液中果胶酯酶的活力为85.12 U/mL,是摇瓶水平的7倍,也是目前果胶酯酶表达的最高水平。对重组果胶酯酶进行分离纯化和酶学性质研究,结果表明,重组果胶酯酶的最适pH和最适温度分别是pH 5.0和55℃,K_m和V_max分别是13.8 mmol/L和9.04μmol/(L·min)。该酶的温度稳定性较好,在55℃处理40 min,剩余活力仍保持在60%以上;其pH耐受范围广,在pH 3.5～6.5下处理120 min,仍保持60%以上的剩余活力。以高酯果胶为底物,对该果胶酯酶的脱酯条件进行优化,优化得到的脱酯工艺参数为：30 g/L果胶、加酶量65.4 U/g、脱酯温度50℃、初始pH 5.5、脱酯时间60 min。在此条件下果胶的酯化度从70.8%降至13.6%。该...     

酶法制备低甲氧基果胶的工艺优化研究

以酸橙皮渣为原料,在酸法提取果胶的基础上,向果胶提取液中加入外源性果胶酯酶,制备低甲氧基果胶.通过单因素试验和Box-Behnken设计以及响应面分析确定酶法制备低甲氧基果胶的最佳工艺参数为加入经1 000倍稀释的果胶酯酶5.39 mL、反应50 min、42.71 ℃、pH 4.61,在此条件下果胶酯化度由67.83%降低至42.55%.     

果胶酯酶制备低酯果胶的研究进展

随着对低糖、低热量食品的需求日益增大,低酯果胶已供不应求。果胶酯酶脱酯制备低酯果胶是一种生产效率极高的方法,对解决国内低酯果胶供不应求的难题将有极大帮助。本文综述了国内外果胶酯酶制备低酯果胶的研究进展。     

果胶酯酶制备低酯果胶的研究进展

随着对低糖、低热量食品的需求日益增大,低酯果胶已供不应求。果胶酯酶脱酯制备低酯果胶是一种生产效率极高的方法,对解决国内低酯果胶供不应求的难题将有极大帮助。本文综述了国内外果胶酯酶制备低酯果胶的研究进展。      

褪黑素对小鼠抗氧化作用的影响

目的:研究小鼠在受到脂多糖(LPS)刺激时,褪黑素的抗氧化作用,并探讨其可能机制。方法:用脂多糖建立氧化应激模型,检测血清、小肠、肝脏和脾组织中的ROS含量,肝脏、脾组织中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化。结果:在LPS刺激后的4h和16h,褪黑素均能降低血清、小肠、肝脏、脾组织中的ROS含量,提升肝脏和脾组织中的GSH-PX、SOD活性,降低MDA含量。结论:褪黑素有助于增强氧化应激小鼠的抗氧化能力,降低组织中NO含量与NO合成酶活性,增加了SOD、GSH-PX等抗氧化酶的活性,保护机体免受氧化损伤。     

荞麦对高脂膳食大鼠肝脏中脂代谢相关酶及血清中蛋白的影响

本文研究荞麦(buckwheat,BW)对高脂膳食大鼠肝脏脂代谢相关酶及血清蛋白含量影响。将50只成年Wistar雄性大鼠随机分为基础对照组,高脂模型组,荞麦低、中、高剂量组,30 d后取血及肝脏,测定相关指标。结果表明,与基础对照组相比,高脂膳食大鼠体重增加,肝脏肝脂酶(HL)、脂肪酶(LPS)、脂蛋白脂肪酶(LPL)活性显著降低(p<0.05)。与高脂模型组相比,荞麦高剂量组大鼠体重增加量显著降低(p<0.05);荞麦中、高剂量组LPS、LPL活性显著增高(p<0.05),HL活性降低。各组大鼠血清总蛋白(TP)及白蛋白(ALB)变化差异不显著。相关性分析,荞麦粉剂量与HL、LPS、LPL活性呈现正相关关系,LPL与HL活性呈极显著正相关(p<0.01),LPS与LPL、HL活性呈显著正相关(p<0.05)。综上,荞麦干预高脂膳食可调节机体脂代谢相关酶活性。      

Determination of the variability of both hydrophilic and lipophilic toxins in endemic wild bivalves and carnivorous gastropods from the Southern part of Chile

The aim of this study was to analyse and determine the composition of paralytic shellfish poisoning (PSP) toxins and lipophilic toxins in the Region of Aysén, Chile, in wild endemic mussels (Mytilus chilensis, Venus antiqua, Aulacomya ater, Choromytilus chorus, Tagelus dombeii and Gari solida) and in two endemic carnivorous molluscs species (Concholepas concholepas and Argobuccinum ranelliforme). PSP-toxin contents were determined by using HPLC with fluorescence detection, while lipophilic toxins were determined by using LC-MS/MS. Mean concentrations for the total of PSP toxins were in the range 55–2505 μg saxitoxin-equivalent/100 g. The two most contaminated samples for PSP toxicity were bivalve Gari solida and carnivorous Argobuccinum ranelliforme with 2505 ± 101 and 1850 ± 137 μg saxitoxin-equivalent/100 g, respectively (p < 0.05). The lipophilic toxins identified were okadaic acid, dinophysistoxin-1 (DTX-1), azaspiracid-1 (AZA-1), pectenotoxin-2 (PTX-2) and yessotoxins (YTX). All analysed molluscs contained lipophilic toxins at levels ranging from 56 ± 4.8 to 156.1 ± 8.2 μg of okadaic acid-equivalent/kg shellfish together with YTX at levels ranging from 1.0 ± 0.1 to 18 ± 0.9 μg of YTX-equivalent/kg shellfish and AZA at levels ranging from 3.6 ± 0.2 to 31 ± 2.1 μg of AZA-equivalent/kg shellfish. Furthermore, different bivalves and gastropods differ in their capacity of retention of lipophilic toxins, as shown by the determination of their respective lipophilic toxins levels. In all the evaluated species, the presence of lipophilic toxins associated with biotransformation in molluscs and carnivorous gastropods was not identified, in contrast to the identification of PSP toxins, where the profiles identified in the different species are directly related to biotransformation processes. Thus, this study provides evidence that the concentration of toxins in the food intake of the evaluated species (Bivalvia and Gastropoda class) determines the degree of bioaccumulation and biotransformation they will thereafter exhibit.     

高效液相色谱法同时检测6种甜味剂

建立同时测定6种人工合成甜味剂阿斯巴甜、糖精钠、甜蜜素、安塞蜜、纽甜、甜聚糖甙的高效液相色谱分析方法。以Platicil ODS柱为分离柱,20mmol/L硫酸铵缓冲溶液(pH4.4)-乙腈为流动相,进行梯度洗脱。采用二极管阵列检测器进行检测,整个分离过程在30min内完成。6种甜味剂在0.4～120mg/L范围内其质量浓度与峰面积的线性关系良好,相关系数为0.99967～0.99998,在4.0～10.0mg/kg范围内,样品加标回收率为85%～107%;相对标准偏差小于3.2%。该方法简便、快速,净化效果较好,可用于食品中6种甜味剂的同时测定。     

气相色谱法检测饮料中二羰基化合物

建立同时在线检测丙酮醛和乙二醛的气相色谱方法。确定检测二羰基化合物的最佳条件为：以丁二酮为内标,以邻苯二胺为衍生化试剂,邻苯二胺的用量67 倍于二羰基化合物、衍生化时间10 min、萃取溶剂二氯甲烷、超声时间15 min、萃取2 次、柱箱初始温度40 ℃、程序升温5 ℃/min,色谱柱载气流量2.0 mL/min,分流比1∶1。丙酮醛和乙二醛的定量限（RSN≈10）分别为0.06 mg/L和0.08 mg/L,检出限（RSN≈ 3）分别为0.02 mg/L和0.03 mg/L,方法灵敏度高。     

亚甲基蓝对单增李斯特菌菌膜的光动力杀伤作用

探讨单增李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）生物菌膜的生长特性及亚甲基蓝对LM生物菌膜光动力杀伤作用。通过结晶紫染色法判断与观察LM生物菌膜的形成并用酶标仪在595 nm波长处对其不同生长阶段的生物量进行测定,同时通过细菌平板菌落计数法研究亚甲基蓝对LM生物菌膜的光动力杀伤作用。结果表明：结晶紫染色法可用于定性判断与观察LM生物菌膜,且随着培养时间的延长,LM生物菌膜生物量不断增加,形成的网状结构越来越致密。当光敏剂质量浓度为10 μg/mL的亚甲基蓝在光功密度为200 mW/cm2 的可见光照射30 min时,即可使LM生物菌膜的失活率达到99.99%以上,其菌落数降低了4.08（lg（CFU/mL））。亚甲基蓝对LM生物菌膜的光动力灭活作用非常显著,其杀伤效果主要取决于光敏剂质量浓度和光照时间。     

亚精胺对小鼠骨骼肌自由基代谢影响及抗疲劳的效果研究

目的：研究亚精胺（spermidine,SPD）对骨骼肌自由基代谢的影响以及抗疲劳作用。方法：实验分为生理盐水组、SPD低剂量组（0.5 mmol/（kg·d））、中剂量组（1.0 mmol/（kg·d））、高剂量组（1.5 mmol/（kg·d））以及西洋参口服液阳性对照组（总皂苷30 mg/（kg·d））,每周灌胃6 d共30 d,每次灌胃前称量小鼠体质量调整灌胃溶液量,灌胃期间进行每天45 min无负重游泳训练。各组随机选取10 只小鼠测试力竭游泳时间;各组剩余10 只负重游泳30 min,休息30 min后取材,检测血清肌酸激酶（creatine kinase,CK）、骨骼肌谷胱甘肽-过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（total-superoxide dismutase,T-SOD）、琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase,SDH）活性和骨骼肌丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果：与生理盐水组比较,SPD能显著延长小鼠力竭游泳时间（P＜0.05）;低、中剂量组骨骼肌中GSH-Px、T-SOD、SDH酶活性显著提高（P＜0.05）,MDA含量显著降低（P＜0.05）;SPD组与西洋参组比较,低、中剂量抗疲劳效果有非常显著性（P＜0.05）差异,高剂量抗疲劳效果略优（P＞0.05）。结论：0.5～1.0 mmol/（kg·d） SPD可以增加抗氧化酶的活性,减少自由基的积累,提高骨骼肌细胞膜代谢能力和抗损伤能力,显著推迟小鼠疲劳发生。     

抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

分子印迹固相萃取-化学发光法测定蔬菜中的马来酰肼

马来酰肼对高良姜素-高锰酸钾-多聚磷酸体系的化学发光具有增敏作用,据此结合分子印迹固相萃取技术建立测定蔬菜中马来酰肼含量的流动注射-化学发光分析方法。以马来酰肼为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,用热聚合法合成了马来酰肼分子印迹聚合物,并以此分子印迹聚合物作为固相萃取填料制成固相萃取柱,对样品进行固相萃取后进行发光检测。在最优条件下,相对化学发光强度与马来酰肼的质量浓度在5.0×10-5～3.0×10-2mg/mL范围内呈良好的线性关系,检出限2.6×10-5mg/mL(3σ),相对标准偏差2.7%(1.0×10-3mg/mL马来酰肼,n=10)。将该法应用于马铃薯、洋葱及大蒜中马来酰肼含量的测定,加标回收率在95.2%～111.7%之间,相对标准偏差分别为1.8%、2.4%和2.1%。