甜菜原生质体培养技术的研究：（1）子叶原生质机分离及愈伤组织形成

取生长在26℃、光照强度3000lux、14h光照/日条件下的14日苗龄甜菜子叶,用2.0％Cellulase Onozuka K-10+1.0％ Macerozyme Onozuka R-10+0.5％ Driselase+CPW9M酶液酶解。原生质培养在改良MS+2.4-D1.5mg/L+IAA 0.5mg/L+6BA0.5mg/L培养基中液体浅层培养。培养第7～10天时,先后发生第一和第二次细胞分裂,此后细胞继续增殖形成细胞团,约40天时,形成微愈伤组织。     

红宝石无核和SO4单芽茎段的增殖与成苗培养

以葡萄栽培品种红宝石无核和砧木SO4的单芽茎段为材料,研究葡萄的初代培养与增殖培养。结果表明,升汞的最佳消毒时间为12min、13min;红宝石无核最适初代培养基为1／2MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．1mg／L,砧木S04的最适培养基为1／2MS＋6-BAl．5mg／L＋NAA0．1mg／L;红宝石无核继代增殖的最适培养基为MS＋6-BA0．8mg／L＋IBA0．2mg／L,砧木S04NMS＋6-BA1．0mg／L＋IBA0．2mg／L。两品种最佳生根培养基为1／2MS＋IBA0．4mg／L,红宝石无核生根率达98％,而SO4则达100％。     

Purification and Characterization of Intracellular α-galactosidase from Rhizopus sp. AOI

根霉Rhizopus sp．A01的菌丝体破碎液依次经过三相分离、SephaαexG-100凝胶过滤获得了电泳纯的α-半乳糖苷酶,纯化了54．8倍,总酶活回收率达到27．3％,在SDS-PAGE上显示相对分子质量为85．6ku的单-条带,凝胶过滤表明该酶表观相对分子质量为302ku。该酶水解对硝基苯-α—D-吡喃半乳糖苷的最适pH值为4．5,最适温度为55％,表观Kn值为（0．242±0．027）mmol／L,表观Kcat／Km值为4．089×10^5L／（mol·s）;对蜜二糖和棉子糖有弱的水解作用,水解速度依次为138．3μmol／（h·mg）、19．7μmol／（h·mg）。水解活性受Fe^2＋和Fe^2＋的显著激活,但受Mn^2＋、Cu^2＋、Hg^＋和Mg^2＋等离子的强烈抑制。该酶活性在pH4．0～8．2保持稳定,在50℃时保温90min,残余酶活达到了48％。     

葡萄早熟杂交胚珠的组织培养

本研究用乍娜×早玫瑰即早熟×极早熟的杂交方式，通过胚珠培养获得了组培杂种苗。试验结果表明：①在杂交授粉后36d采样，用Nitsch大＋MS微 有机元素 LH100mg／L＋Ad10mg／L＋IBA2mg／L＋GA30．4mg／L＋3％蔗糖十0．6％琼脂培养基培养后，幼胶可不经低温处理直接萌发成苗，成苗率为11．5％。②在杂交授粉后45d采样，经低温（2－3C）处理60d后，用MS培养基，萌发成苗率为31．2％。⑤在杂交授粉52d以后采样，无论采取哪组培养基及培养程序，均未培养成功。     

各种维生素及微量元素在酵母菌生长过程中的优化

以玉米糖化液为培养基,采用摇瓶培养的方法,研究了各种微量元素及维生素对酵母生长的影响。通过正交试验优化了培养基的组成,最佳的添加量为盐酸硫胺4．8mg／t、生物素0．12mg／L、D－泛酸钙6．4mg／L、肌醇120mg／L、氯化钙28．8mg／L、硫酸亚铁14．4mg／L、硫酸铜0mg／L。     

激素对甜菜愈伤组织不定芽再生的调节作用

2，4－D能促进胚珠愈伤组织形成，但对不定芽再生有抑制作用，而IAA无此抑制作用。6BA和KT单独或组合使用在胚珠分化芽的愈伤组织诱导上，是不可缺少的。胚珠意伤组织不定芽可在附加IAA与KT（或再附加6BA）的诱导培养基上一步形成。0．5mg／L的6BA与NAA或IAA在一定浓度下的组合能诱导叶柄产生愈伤组织，分化培养后获得了再生芽。无论胚珠或叶柄，愈伤组织不定芽的再生，主要与前期诱导培营基的激素组合与浓度有关。     

玉米粉的L—乳酸发酵研究

采用米根霉（Rh．oryzae）L－A6菌株进行不同碳原，不同氮源和不同发酵条件的试验，获得最佳发酵培养基组成（1）18％玉米粉＋1．5％玉米浆＋适量无机盐；（2）13％玉米粉＋1．0％玉米浆＋适量无机盐。在125r／min往复摇床上，34℃下振荡培养72h，产L－乳酸10．02g／dl（L－乳酸对葡萄糖的转化率达75．4％）和8．36g／dl（L－乳酸对葡萄糖的转化率达92．2％），此结果尚未见报道，具有较高的应用价值。     

低温α-淀粉酶产生菌GS230发酵条件与酶学性质研究

对分离自连云港海域的低温α-淀粉酶产生菌Pseudoalteromonas sp．GS230进行了产酶条件的优化和酶学性质的研究。结果表明,该酶在0．4％可溶性淀粉、0．25％牛肉膏、1．5％蛋白胨以及5％接种量、培养32h产酶量达到最高。对低温仪．淀粉酶性质进行研究发现,该酶的最适作用温度和pH值分别是30℃和pH8．0、0℃时相对酶活达28％。对酶稳定性的研究发现,该酶对热敏感,30℃半衰期为1．5h,Ca^2＋可以提高酶的稳定性;在反应体系中添加5mmol／L Ca^2＋,30℃保温1．5h,残余酶活达93％。Na^＋K^＋、Ca^2＋等对酶有激活作用,而Pb^2＋、Cu^2＋、Fe^3＋等强烈抑制酶活性。     

锰过氧化物酶产生菌的发酵优化及酶学性质研究

采用愈创木酚初筛平板从无锡惠山、龙山等地筛选出6株阳性菌株,通过摇瓶复筛从中得到一株产MnP活性较高的菌株SYBC—M3;同时进行部分发酵产酶条件的研究。在此基础上,对得到的MnP进行了粗酶的部分酶学性质研究。结果表明,当培养基中豆粕20g／L、蛋白胨10g／L、Tween-200．5g／L、Mn^2＋ 1．5mmoL／L,起始pH5．0时,MnP的活力有较大程度的提高,可达1775U／L;其最适作用温度55℃,最适pH5．0;同时其温度和pH稳定性也较好;pH9．0下24h还可保持90％以上的活性。     

混种固定化细胞发酵海藻豆乳醋酸饮料的研究

以海藻汁液和大豆浆混合液为原料，固定化清酒酵母或产香酵母A-2于25℃或30℃发酵12h，再接种固定化醋酸杆菌于35℃发酵18h，发酵液经过滤后，制成海藻豆乳醋酸饮料，经测定该饮料总酸含量为4．2g／L-4．5g／L，总酯含量为1．6g／L-1．8g／L，乙醇含量为0．83%-0．86％（v／v），碘含量为15mg／L-16mg／L。     

不同培养条件对银杏愈伤组织生长及黄酮含量的影响

以胚为外植体,通过固体培养,研究了培养基,激素和光照对银杏愈伤组织诱导的影响,以及继代培养中激1素和活性炭对愈伤组织生长和产黄酮的影响,结果表明:愈伤组织的诱导的最佳条件为DCR培养基+1.0mg/L2,4-D+0.5mg/LBA+完全暗条件培养。继代培养过程中既能促进愈伤组织生长又使黄酮含量最高的处理为0.3mg/LBA+2.0mg/L2,4-D,活性炭抑制愈伤组织生长但能促进黄酮的积累。     

甘蔗新品种桂糖48号的组织培养技术研究

甘蔗组织培养技术是加速繁殖新品种和加快新品种大面积推广的主要手段,不同品种的离体培养中其培养基中激素配比存在差异,因此筛选合适培养基是提高品种快繁效率的关键。本文以桂糖48号为材料,以MS基本培养基加外源激素浓度梯度进行试验处理设计,对品种的愈伤组织诱导、愈伤分化、试管苗增殖和生根阶段进行培养基筛选试验,以其筛选出最合适桂糖48号的培养基配方。试验结果表明:诱导愈伤组织培养基为MS+2,4-D 3.0 mg/L;愈伤组织分化培养基为MS+BA 1.0 mg/L;初代增殖培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA 0.5 g/L;继代培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1mg/L;生根培养基为1/2 MS+NAA 12 mg/L。在该培养基下,生根最好,苗绿,比较高,长势好,对加快甘蔗新品种桂糖48号在广西大面积推广起到积极的作用。     

高效液相色谱法快速测定多维片中的维生素B12

目的建立高效液相色谱法快速测定多种维生素片中的维牛素B_(12)含量。方法样品用水作为溶剂经超声波提取,以0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=2.5)和乙腈作为流动相采用高效液相色谱法测定,以外标法定量。结果本研究将检测波长改为546 nm,可减少多维片中其他组分的干扰。维生素B_(12)在0.5~10 mg/L范围内线性关系良好(r=0.9999),在1、2和5 mg/L的添加水平下测得回收率分别为98.1%、97.2%和99.0%(n=6),相对标准偏差分别为3.6%、2.0%和4.6%,方法检出限为0.2 mg/L,定量限为0.5 mg/L。结论该方法快速、简便、准确且干扰少,可适合于多种维生素片中维生素B_(12)的定量分析。     

Study on Flax Genetic Transformation Mediated by Agrobacterium tumefaciens

Abstract

Flax is an important natural material for the linen spinning industry and as an oil crop in China. Flax products worth US $100 million are exported every year. Recently, with the development of a market economy and China's entry into the WTO, farmers and flax factories have shown a need for new varieties that have a short vegetation period, are resistant to herbicides and lodging, and have a high fiber content. In order to resolve these problems quickly, we have studied flax genetic transformation since 1998.

The paper is about flax genetic transformation by Agrobacterium tumefaciens strain EHA105. The explants were hypocotyl segments from 5-7 day old seedlings. The segments cannot form a callus when the concentration of kanamycin is 30 mg/L and 50 mg/L. Therefore, 50 mg/L of kanamycin was selected as an efficient concentration to select the transgenic plants. The segments of hypocotyl were treated with EHA105 and then were inoculated in different media (Ms, B5, N6). The experiment showed that Ms is a preference medium for flax genetic transformation. Agrobacteriumtieated segments of hypocotyl were cultured on the surface of modified Ms medium (Ms agar medium supplemented with 3.5 mg/L IAA, 2 mg/L KT, 150 mg/L LH). Callus was formed by 71.4%-81.6% of the hypocotyls. Callus inoculated in a regenerative medium of Ms with little BA and NAA could regenerate at the rate of 31.8%-40.2%, and 87.4% of regenerative plants could root in the medium of 1/2 Ms supplemented with 0.001 mg/L NAA. This transformation system has been tested by the GUS-INT gene. After co-cultivation of the segments of hypocotyl and GUS-INT, the segments of hypocotyl were moved to callus medium. After 3 days, the transformation rate of new callus was 72.0%; after 4 weeks the transformation rate of callus was 24.0%; the transformation rate of regenerative plants was 7.5%. The experiment allowed for the establishing of a flax genetic transformation system mediated by Agrobacterium tumefaciens.     

固定化银杏克隆细胞悬浮培养产生黄酮的研究

采用银杏果实为原料诱导得到颗粒状愈伤组织,在MS培养液中筛选克隆细胞,单细胞在MS+3·0mg/LNAA+1·0mg/LKT中培养。细胞悬浮液与3%的海藻酸钠混合后滴入2%CaCl2MS,制成小球凝胶。固定化细胞在MS+3·0mg/LNAA+1·0mg/LKT+10mg/L肌醇的培养基中悬浮培养25d,黄酮生物合成量为85·63mg/L,克隆细胞增长速度提高24·45倍。     

杜仲愈伤组织继代培养及抑制褐化的研究

对杜仲愈伤组织的继代培养及其褐化现象的抑制进行了研究,结果表明:B5培养基+0.5mg/LNAA+1.0mg/L6-BA是杜仲愈伤组织继代培养和褐化控制的适合培养基;培养基中添加0.5%活性炭(AC)能有效的抑制杜仲愈伤组织的褐化;与中强光和红光相比,蓝光和黑暗能减轻组织的褐化。     

紫苏细胞悬浮培养生产迷迭香酸条件研究

通过诱导紫苏下胚轴和子叶外植体产生愈伤组织,建立细胞悬浮培养体系,以提高细胞产量及细胞中迷迭香酸含量。结果表明,在MS液体培养上添加3.0mg/L 6-芐氨基嘌呤(6-BA)＋0.3mg/L萘乙酸(NAA)培养基上,下胚轴愈伤组织呈嫩黄色松散状态,出愈时间短,出愈率可达100%。紫苏细胞悬浮培养产生迷迭香酸的最佳条件为培养时间7d、接种量鲜质量浓度20g/L、摇床转速110r/min、蔗糖30g/L、L-苯丙氨酸0.15g/L,此条件下可获得高达2.283mg/g的迷迭香酸。     

二步培养和AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴芽再生的影响

以甘蓝型油菜（Brassica napus L．）品种浙双758为材料,研究二步培养及添加AgNO3对甘蓝型油菜子叶和下胚轴外植体离体再生的影响。外植体先在含0．5—1．5mg／L2,4-D的MS培养基上预培养3d或7d诱导愈伤组织的产生,再转到含有3mg／LBA和0．15mg／LNAA及添加或不添加2．5mg／LAgNO3的分化培养基上诱导芽的分化。结果表明,外植体愈伤组织诱导率和芽再生率与2,4-D浓度、预培养时间和AgNO3密切相关;分化培养基中添加银离子可显著增加不定芽的再生频率;二步培养及添加AgNO3可使半子叶、完整子叶和下胚轴外植体芽再生频率分别达到了96．1％,96．7％和96．7％。     

Acceptability of diets containing olive oil fried sardines (Sardina pilchardus) in the prevention of dietary hypercholesterolaemia in rats

Garlic (Allium sativum L) bulb explants produced undifferentiated white globular callus when grown on MS medium having 2,4-dichlorophenoxy-acetic acid (2,4-D) and Kinetin (Kn). Such callus when grown on medium having indole-3-yl-acetic acid (IAA) and/or Kn developed into the differentiating callus which had comparatively more allicin than that of undifferentiated callus. The effect of sucrose, NH/NO ratios and hormone concentrations on growth and allicin development in the callus was investigated. There was a significant increase in allicin development in callus when grown for up to 4 weeks on medium (a) having sucrose at 3% and 5% levels; (b) having NH and NO ratios at 2:1 and 1;1; and (c) with Kn alone at a concentration of 0.5 mg litre^?1, which produced a tenfold increase in allicin content.