四川发酵香肠中乳酸菌的分离与鉴定

从四川发酵香肠中分离得到126株乳酸菌,采用透明圈法进行初筛,以发酵特性为复选指标,筛选得到2株乳酸杆菌(L1、L2)和1株乳酸球菌(P3)。对筛选出的3株乳酸菌研究其主要发酵特性,并进行产酸、耐盐和耐亚硝酸实验。结果表明,乳酸杆菌与乳酸球菌的产酸特性不同,杆菌比球菌生长快,pH下降快;3株乳酸菌对食盐和亚硝酸盐均具有较好的耐受性;对蛋白质、脂肪无明显的分解作用;对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有较好的抑制作用。生化鉴定以及菌株的16SrRNA测序结果表明,L1为植物乳杆菌,L2为植物乳杆菌,P3为戊糖片球菌。     

具有抑制单胺氧化酶活性的干酪乳杆菌JH-23生长特性及生理功能研究

以具有体外抑制单胺氧化酶作用的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)JH-23作为研究对象,考察了其部分生长特性和生理功能.Lcasei JH-23属于厌氧型的革兰氏阳性杆菌,无芽孢.该株菌的最适生长温度为37℃,最适生长pH为6.0,最适接种量为3%,MRS中24h培养结束后活菌数可达1.11×109 cfu/mL,在脱脂乳中具有良好的保藏性能.生理功能实验显示,L.casei JH-23在pH为3.0的环境下生长3h后存活率可达到65.32%,对酸性环境有较强的耐受性;最高胆盐耐受浓度为0.5%,最高NaCl耐受浓度为6%,这些结果表明,L.casei JH-23作为益生菌有着很好的工业应用价值和发展潜力.     

发酵蔬菜源食品用益生乳酸菌的筛选及降胆固醇能力评价

为了从发酵蔬菜中筛选出具有降解胆固醇能力的食品用益生乳酸菌,作者以融合魏斯氏菌（Weissella confuse) RW作为对照,采用定向分离法结合16S rDNA分析不同来源的发酵蔬菜样品中得到5株具有降胆固醇能力的益生乳酸菌。结果表明,5株菌对pH 2.0、质量浓度为3 g/L的胆盐以及模拟胃肠液均具有耐受性,降胆固醇能力强（54.79%~62.54%）、能够抑制病原菌且黏附于Caco-2细胞上,表现出优良的益生特性。此外,5株菌均无溶血现象,不产生物胺,对多数抗生素敏感,安全性高。通过16S rDNA鉴定5株菌分别为植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）JCSMC-1、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）SYB和JCSMC6-2、副干酪乳酸菌（Lacticaseibacillus paracasei）SYD和XSMC-1。本研究获得的1株植物乳植杆菌、2株植物乳杆菌、2株副干酪乳酸菌均具有食品用益生菌的基本特性,为开发食品用益生菌提供了新资源。     

发酵肉制品中乳酸菌的分离鉴定及菌种性能的研究

从自然发酵肉制品中分离乳酸菌并对其进行生化试验鉴定,对得到的乳酸菌进行了耐盐、耐亚硝酸盐、产酸能力、生长曲线及抑菌试验。通过分离和鉴定得到5株乳酸菌,3株为乳酸杆菌,2株为乳酸球菌;它们对食盐、亚硝酸盐均具有较好的耐受性,在6％的NaCl、80kg／mg-150kg／mgNaNO2溶液中能生长;对蛋白质,脂肪无分解作用。乳酸杆菌和乳酸球菌对大肠杆菌均有抑制作用,且杆菌的抑制作用大于球菌;乳酸杆菌与乳酸球菌的生长曲线和产酸特性不同,杆菌比球菌生长快,pH值下降快,所需的发酵时间比球菌短。5株乳酸菌都可作为肉制品的发酵剂。     

腌肉中乳酸菌的分离选育

从自然发酵的腌肉中分离到28株菌株,对其进行形态特征和生理生化特征鉴定,有4株属于乳杆菌属(编号L1、L3、L4、L8).发酵性能测试结果表明:L3的产酸能力最强、耐盐性能最好、发酵产品品质优良,为腌肉的优良发酵剂.     

具有降糖作用的鼠李糖乳杆菌生物学特性研究

本研究旨在评价一株具有降糖作用的鼠李糖乳杆菌的生物学特性。结果表明,该菌株生长较快,2 h进入生长对数期,14 h后进入稳定期,最适生长p H为5~7,最适生长温度为37℃,最适接种量为1%~2%(V/V)。此外,该菌株在强酸条件下可以生长,对人工胃肠液都具有很好的耐受性,耐受胆盐的延迟时间为0.86 h,在Na Cl浓度为9%(W/V)的培养条件下仍可以存活。更为重要的是,这株菌对Caco-2细胞具有较强的粘附能力。综上所述:该鼠李糖乳杆菌菌株可作为一株具有潜在降糖作用的发酵菌株,用以开发具有降糖作用的新型发酵产品。     

发酵风干肠中乳酸菌的发酵性能

对从自然发酵风干肠中分离的6 株乳酸菌的发酵性能进行评价,主要包括测定菌株的生长曲线、产酸能力、对NaCl及NaNO2的耐受能力,同时通过吲哚实验和抗生素敏感性测定对菌株的安全性进行初步评价。结果表明：6 株乳酸菌生长趋势接近,均在8 h左右进入生长稳定期,pH值在0～8 h下降最快,清酒乳杆菌和发酵乳杆菌的产酸能力更强;所有菌株均可在6 g/100 mL NaCl和0.015 g/100 mL NaNO2条件下生长,植物乳杆菌和弯曲乳杆菌的NaCl耐受能力最优,清酒乳杆菌和发酵乳杆菌则对NaNO2具有最强的耐受能力;吲哚实验中6 株乳酸菌的反应结果均为阴性,对实验所选抗生素无耐药性,说明6 株乳酸菌具有较好的发酵性能和安全性,可作为功能性发酵剂用于发酵肉制品的生产。     

乳酸杆菌对东北酸菜发酵特性的影响解析

为研究不同种乳酸杆菌对于酸菜的接种效果,从自然发酵酸菜中筛选出短乳杆菌（Lactobacillus brevis）、寡发酵乳杆菌（L. oligofermentans）、弯曲乳杆菌（L. curvatus）和植物乳杆菌（L. plantarum）作为接种剂进行酸菜发酵。分析接种组和对照组的酸菜发酵体系的生化指标,使用MiSeq高通量测序技术分析发酵12 d和30 d的细菌群落组成及动态变化。结果显示,接种处理组的酸菜发酵体系中pH下降与乳酸的产生速度均超过对照组,乳酸菌数量在前6天显著高于对照组。高通量测序结果显示,相比对照组,接种处理乳杆菌属（Lactobacillus）相对丰度更高,肠杆菌科（Enterobacteriaceae）和假单胞菌属（Pseudonomnas）的相对丰度更低。各接种处理之间比较的结果显示,在发酵30 d时,L. plantarum接种处理的酸菜pH值最低,L. curvatus和L. plantarum处理乳酸质量浓度相对较高,两组处理间差异不显著。L. brevis和L. oligofermentans接种处理的酸菜乙酸质量浓度最高。从微生物纲水平组成来看,所有处理细菌均由厚壁菌门（Firmicutes）和变形菌门（Proteobacteria）组成。在接种水平上,发酵30 d时,L. plantarum接种处理的酸菜Lactobacillus相对丰度最高,Enterobacteriaceae和Pseudonomnas相对丰度最低。该结果将为筛选符合不同发酵目的的接种剂提供技术参考。     

贵州酸肉中具有高亚硝酸盐降解和耐受能力乳酸菌的筛选与鉴定

从贵州自然发酵的酸肉中分离出19株乳酸菌,选择在MRS培养基中培养24 h的降亚硝酸盐能力最强的3株乳酸菌,经16S r DNA分子鉴定为植物乳杆菌CMRC 3、戊糖片球菌CMRC 7和植物乳杆菌CMRC 19。在模拟肉类发酵的条件下,研究其降解、耐受亚硝酸盐和硝酸盐的能力。3株乳酸菌都具有较好的亚硝酸盐降解能力,发酵120 h后分别降解了65.7%~86.3%的亚硝酸盐;然而它们的硝酸盐降解能力都不显著。CMRC 7和CMRC 19耐受亚硝酸盐的性能最强,最高活菌数分别为8.20lg(CFU/m L)和8.11lg(CFU/m L);这3株菌都具有较好的硝酸盐耐受性,最高活菌数分别为8.21,7.93lg(CFU/m L)和8.20lg(CFU/m L)。试验结果表明,从酸肉中筛选出的这3株乳酸菌都有较强的亚硝酸盐降解能力,同时也有较好的硝酸盐和亚硝酸盐耐受性能,可开发成肉类专用发酵剂。     

分离自传统发酵肉制品乳酸菌的发酵特性研究

对分离自传统发酵肉制品的植物乳杆菌(La04)和米酒乳杆菌(La22)的特性进行了研究.结果表明:两株菌均有良好的生长特性、产酸能力、耐盐能力和抑菌性能,具有分解亚硝酸盐的能力,但无蛋白质分解能力.最适生长温度为32～35℃,最适pH为5.5～7.5,具备作为肉用发酵剂的优良特性.     

农杆菌介导转化黑曲霉条件优化及脂肪酶表达

优化了农杆菌介导转化黑曲霉的方法,优化条件包括共培养材料、农杆菌种类、诱导剂浓度、共培养时间、共培养温度以及共培养时农杆菌的菌体浓度。结果表明,农杆菌介导转化黑曲霉的最适条件为107个/mL不萌发的新鲜孢子与OD_(600)培养至0.9～1.0的农杆菌以1∶1的比例混合后,在乙酰丁香酮浓度为200μmol/L的IM平板上,23℃避光培养48 h后进行转膜,转化子个数可达到(60±5)个转化子/10~6个孢子,且阳性率达到90%以上。并且构建了同源黑曲霉脂肪酶的组成型和诱导型启动子表达载体,通过优化后的农杆菌介导转化方法转化至黑曲霉中,利用罗丹明橄榄油平板对产酶转化子进行筛选鉴定,并获得了阳性克隆。     

鼠李糖乳杆菌利用不同益生元的增殖及耐受性研究

作者旨在通过对比鼠李糖乳杆菌（Lactiplantibacillus rhamnosus）与不同益生元组合后,在生长情况、pH和胆盐耐受性及乳酸产量方面的变化筛选出鼠李糖乳杆菌与益生元的最佳组合。结果表明,鼠李糖乳杆菌GG（L. rhamnosus GG, LGG）、鼠李糖乳杆菌HN001在以低聚半乳糖为唯一碳源生长时,最大生物量分别为1.253、1.552,最大比生长速率分别为0.316、0.290 h^-1,乳酸产量分别为3.654、10.914 g/L,与其他益生元组合相比,表现出显著优势。为验证这两种组合在不同胁迫条件下的生长情况,进一步测定了其在不同pH和胆盐质量浓度下的耐受性。这两种组合在1 g/L胆盐条件下的最大生物量分别为0.712和0.694,在pH 4.0条件下的最大生物量分别为0.639和0.728,与其他组合相比存在极显著差异。该研究结果有助于推动鼠李糖乳杆菌与低聚半乳糖组合在食品、医疗等领域的广泛应用,为后续益生菌-益生元组合产品的开发提供了理论依据。     

均质及杀菌处理对暗纹东方鲀鱼汤品质的影响

暗纹东方鲀（Takifugu obscurus）鱼汤冻品味道鲜美,但是市场上未见常温鱼汤相关产品。为解决鱼汤贮藏过程中易发生絮凝、分层等不稳定问题并延长其贮藏期,作者以暗纹东方鲀鱼汤为实验对象,以鱼汤中微纳米胶粒的平均粒径、多分散系数和ζ-电位为指标,研究均质条件对鱼汤稳定性的影响及不同杀菌方式对鱼汤营养、风味等品质的影响。结果表明：当均质压力为30 MPa、均质温度为60 ℃、均质次数为2次时,鱼汤稳定性最好;比较不同杀菌方式,超高温杀菌组中营养物质损失比巴氏杀菌组和高温杀菌组小,鱼汤中总氮、氨基酸态氮和胶原蛋白质量浓度与对照组相比分别下降了0.92%、2.73%、4.38%,风味成分与对照组最为相似,特征风味成分仅增加了反-2-辛烯醛。巴氏杀菌组鱼汤生产成本低,但贮藏时间仅6周;热力杀菌组鱼汤贮藏时间长达20周,但会导致呈现蒸煮味的化合物相对含量增加,对鱼汤风味产生不良影响。本研究可为河豚鱼汤工业化生产提供理论参考与数据支持。     

碳氮源优化提高兼养三角褐指藻生物量和岩藻黄素产量

岩藻黄素（Fucoxanthin）是一种参与海洋藻类光合作用的类胡萝卜素,具有抗氧化、抗癌、抗肥胖和抗糖尿病等多种功效,作为生物医药和功能性食品具有重要应用价值。海洋硅藻三角褐指藻含有高含量岩藻黄素,被认为是褐藻之外的藻基岩藻黄素的新来源。为提高岩藻黄素产量,作者以三角褐指藻（Phaeodactylum tricornutum CCMP2561）为研究对象,系统评价了兼养（光发酵）条件下有机碳源、氮源种类和浓度对其生物量和岩藻黄素产量的影响,筛选出最优碳氮源组合为0.10 mol/L甘油和含氮量为0.02 mol/L的胰蛋白胨与尿素（浓度比1∶1）混合氮源。采用此优化组合,在光照强度2 000 lx、培养温度20 ℃、摇床转速150 r/min条件下,可获得三角褐指藻生物量、岩藻黄素质量分数和产量最大值,分别为3.94 g/L、20.83 mg/g和81.97 mg/L,是优化前的3.15倍、11.64倍和36.59倍。本研究开发的优化兼养培养基和培养策略,为显著提高三角褐指藻岩藻黄素产量提供了实用新技术。     

牛膝多糖降血糖活性成分的分离鉴定

研究牛膝多糖与降血糖活性的关系。牛膝粉碎后先经乙醇提取,再用热水提取,水提液减压浓缩后经醇沉得到牛膝水提醇沉物。采用链脲佐菌素（streptozocin,STZ）诱导方法建立小鼠糖尿病模型,每日给药牛膝各分离组分,连续给药8周,通过测定小鼠血糖、糖化血红蛋白,检测牛膝中具有降血糖活性的组分。采用DEAE、HW-55F、Sephacryl S-400等凝胶色谱柱对具有降血糖活性的牛膝多糖组分进一步分离。运用Sephadex G-100凝胶色谱、飞行时间质谱（time of flight mass spectrometer,TOF-MS）、气相色谱（gas chromatography,GC）、核磁共振（nuclear magnetic resonance,NMR）等手段鉴定多糖纯度、测定相对分子质量、分析结构。结果表明,牛膝的水提醇沉物能显著降低糖尿病小鼠的空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）和糖化血红蛋白（HbA1c）浓度（P＜0.05）。将水提醇沉部分进一步分离得到具有降血糖活性的牛膝多糖,并鉴定其纯度为均一多糖,相对分子质量为1 800.5,该多糖由1分子葡萄糖和10分子果糖组成,以葡萄糖分子为起点,与果糖C₂相连,果糖之间以β-1,2 糖苷键连接形成主链,支链连接在果糖的C₆上,该研究明确了牛膝中具有降血糖活性的多糖分子结构。     

环丙沙星降解菌的筛选及其降解特性探究

为获取一株有效降解环丙沙星的菌株,并探究其在降解过程中的降解特性,利用高效液相色谱法筛选环丙沙星降解菌,根据菌落形态、生理生化特性以及16S rDNA基因序列分析,对降解菌进行鉴定;并研究菌株活性、胞内外物质以及细胞壁对质量浓度为4 μg/mL环丙沙星的降解作用。结果表明,罗伊氏乳杆菌WQ-Y1在物理吸附和生物降解的共同作用下,降解率最高可达70.2%,其胞内物质、胞外物质以及细胞壁对环丙沙星的降解率分别为17.7%、23.4%和37.0%,远低于活菌的降解率。可见罗伊氏乳杆菌WQ-Y1对环丙沙星的物理吸附作用和菌株体内的酶都并非是菌株降解环丙沙星的单一途径,而是依赖于完整的菌株活性。     

蛹虫草及其下脚料水提物联合壳聚糖涂膜对西葫芦保鲜效果的影响

为研究壳聚糖涂膜以及蛹虫草及其下脚料水提物对生鲜果蔬的保鲜作用，探究了质量分数为1%的壳聚糖（Chi）、蛹虫草水提物（CM）、蛹虫草下脚料提取物（SS）、壳聚糖复合蛹虫草水提物（Chi+CM）和蛹虫草水提物复合蛹虫草下脚料提取物（Chi+SS）5种涂膜剂的抗氧化活性和抑菌能力。结果发现Chi+CM复合涂膜剂的DPPH自由基清除能力较好。抑菌圈实验证明，壳聚糖与蛹虫草水提物结合可提高对革兰氏阳性菌的抑制能力。将5种涂膜剂应用于西葫芦后发现，在6 ℃条件下冷藏，蛹虫草水提物联合壳聚糖涂膜能减少西葫芦在储藏期间的质量损失，降低褐变以及延缓硬度下降，保持西葫芦的可溶性固形物和抗坏血酸含量，降低MDA含量及延缓POD和PPO酶活的上升，抑制微生物繁殖。     

高温热处理对鲭鱼异尖线虫基因和蛋白质的影响

为探讨热处理后鲭鱼中异尖线虫幼虫能否被检测、幼虫残留体蛋白质是否被破坏及其对于消费者的致敏风险。选用高温灭菌和油炸两种高温加工方法处理异尖线虫体蛋白质,利用聚合酶链式反应和实时荧光定量聚合酶链式反应检测其基因变化,采用圆二色谱及十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳观察异尖线虫全虫体蛋白质变化情况,借用蛋白免疫印迹技术测定热处理过敏蛋白抗原性变化。结果表明,高温热处理后,异尖线虫幼虫DNA和蛋白质被破坏,抗原性降低。高温灭菌处理60 min过敏蛋白抗原性下降98.2%。实时荧光定量PCR用于检测热加工食品中异尖线虫幼虫残留非常有效。油炸处理对异尖线虫体蛋白质的破坏作用比高温灭菌方法更为显著。实时荧光定量PCR能够快速检测出鲭鱼体内异尖线虫幼虫残留,高温灭菌和油炸热加工方法都能有效破坏残留的异尖线虫体蛋白质,从而降低过敏风险。     

耐盐芽孢杆菌R1高效壳聚糖酶异源表达及特性分析

采用同源克隆获得耐盐芽孢杆菌壳聚糖酶基因,并异源表达制备重组耐盐芽孢杆菌壳聚糖酶（CsnBh46）,通过表征分析获得重组CsnBh46酶学特性。重组CsnBh46全长278个氨基酸,三维结构显示其分为上下两个半球,包含9个α螺旋和2个β折叠。在7 L发酵罐中,重组工程菌bh-5的最高酶活力和总蛋白质质量浓度分别为6 375 U/mL和4.3 g/L。纯化后的重组CsnBh46最适反应pH和温度分别为6.0和60 ℃,金属离子Mn²⁺、Ca²⁺和Mg²⁺对重组CsnBh46具有激活作用。重组CsnBh46最适底物为脱乙酰度95%胶体壳聚糖。重组CsnBh46能够高效水解胶体壳聚糖并且根据反应时间可以定向制备不同聚合度壳寡糖。本研究为CsnBh46产业化应用奠定基础。     

利用CRISPR-Cas9和Cre/loxP系统删除34个非必需基因构建L-苏氨酸生产菌

L-苏氨酸是一种被广泛应用于食品、饲料及医药等领域的必需氨基酸。大肠杆菌以葡萄糖为碳源合成L-苏氨酸的过程中,一些非必需基因的转录和翻译会消耗碳源。利用CRISPR-Cas9和位点特异性重组系统Cre/loxP,敲除了大肠杆菌MG1655基因组中puuE和ynaI区间的34个非必需基因（共30.372 kb）,获得了突变菌MG003,然后通过高表达L-苏氨酸合成途径中关键基因thrA*、thrB和thrC以及L-苏氨酸转运酶编码基因rhtA和rhtC提高L-苏氨酸产量。与对照菌MG1655/pFW01-thrA*BC相比,MG003/pFW01-thrA*BC生长加快,L-苏氨酸产量提高25.5%;MG003/pFW01-thrA*BC-rhtA的L-苏氨酸产量提高了43.3%;MG003/pFW01-thrA*BC-rhtC的L-苏氨酸产量提高了74.5%。研究结果表明,大肠杆菌基因组中34个非必需基因的删除有利于其提高L-苏氨酸合成能力。