甲烷氧化菌素-铜配合物模拟过氧化物酶检测面粉中的过氧化钙

通过紫外分光光度计检测CaO₂在288 nm处吸光值的变化,建立了一种快速、准确的Mb-Cu模拟过氧化物酶法来检测面粉中的CaO₂,并讨论了Mb-Cu浓度、反应温度、pH、反应时间对催化过程的影响。结果表明,当Mb-Cu浓度为3.9×10?6 mol/L、反应温度为60 ℃、反应时间为180 s时,CaO₂在浓度为0～8 mg/L时与288 nm处吸光度的变化值呈线性关系,线性方程为y=0.00643+0.02117x,R2=0.99281。方法的检出限为1.82×10?2 mg/L,平均加标回收率为98.2%～100.6%,相对标准偏差RSD为0.49%～1.32%。此方法快速、准确,可用于对实际样品的测量。     

羟自由基氧化对鲢鱼肌原纤维蛋白结构的影响

以鲢鱼肌原纤维蛋白为研究对象,用芬顿体系(H₂O₂的浓度为0.1、1、5、10和50 mmol/L)产生不同浓度的羟自由基对蛋白进行模拟氧化,研究羟自由基氧化对肌原纤维蛋白氧化和结构的影响。结果表明:随着H₂O₂浓度的升高(H₂O₂浓度为0~10 mmol/L),羰基含量和二聚酪氨酸含量显著提高(P<0.05),总巯基和活性巯基含量在H₂O₂浓度大于1 mmol/L时显著下降(P<0.05)。氧化使内源荧光下降,使表面疏水性升高,粒径分布向粒度大的方向移动。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)表明,氧化后的蛋白质发生了不同程度的交联或聚集,交联方式主要是二硫键。氧化还改变了蛋白的二级结构,主要表现为H₂O₂浓度0~1 mmol/L时α-螺旋向β-折叠转化,H₂O₂浓度1~50 mmol/L时β-折叠向无规卷曲转化。氨基酸分析表明,氧化过程中几乎所有氨基酸都会参与反应,但是对羟自由基的敏感程度为:半胱氨酸(Cys) > 丙氨酸(Ala) > 赖氨酸(Lys) > 酪氨酸(Tyr)。综上,羟自由基氧化可使肌原纤维蛋白的结构发生显著改变。     

酶催化显色法测定小麦粉中的过氧化钙

基于过氧化钙(Ca O2)在酸性介质中可生成过氧化氢,过氧化氢在辣根过氧化物酶(HPR)的催化作用下,以KI为增敏剂,可快速氧化季胺[4,4’-(二甲氨基)-二苯基甲烷]显色的原理,建立了小麦粉中Ca O2定性测定的目视比色法和定量测定的分光光度法。研究了HPR用量、KI用量、季胺用量、p H值、反应温度和反应时间对显色的影响,并对测定条件进行了优化。结果表明:在最优化实验条件下,显色体系的颜色随Ca O2标准使用液浓度的升高而加深,根据颜色的渐变与Ca O2浓度的关系制作了目视比色测定的标准比色带;且显色体系吸光度在Ca O2浓度0 mg/L~9 mg/L范围内符合比尔定律,线性回归方程为+=Δ0052.0C107.0A,R2=0.9994。该法用于实际样品的分析,目视比色法可快速确定Ca O2的含量范围,分光光度法检出限为1.64×10-2 mg/L,加标回收率为96.3%~101.7%,RSD为1.74%~3.15%。     

基于纳米酶技术检测柑桔果实中葡萄糖

目的建立纳米酶检测体系快速检测葡萄糖含量的技术。方法采用甲烷氧化细菌的发酵代谢产物甲烷氧化菌素(methanobactin,MB)与Cu²⁺、纳米金(AuNPs)、葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,Gox)进行配位结合形成具有过氧化物酶和葡萄糖氧化酶性质的纳米酶检测体系,并对柑桔果实中葡萄糖含量进行测定。结果Gox浓度0.81 U/mL、MB-Cu@AuNPs模拟酶浓度2×10^-5mol/L、对苯二酚浓度5×10^-4mol/L、反应温度60℃、pH 8为最佳检测条件;反应时间5 min,葡萄糖浓度线性范围为1×10^-3-5×10^-2mol/L。结论纳米酶检测体系对柑桔果实中葡萄糖含量的测定具有良好的稳定性,相比较常规快速血糖仪检测速度更快。     

活性氧与蜡样芽孢杆菌菌膜形成的相关性

为阐明活性氧（ROS）与蜡样芽孢杆菌菌膜形成的相关性,以市售原料奶中分离的蜡样芽孢杆菌分离株为目标菌,以细菌中NADPH氧化酶介导产生的ROS为主要靶点,用外源ROS补充剂过氧化氢(H₂O₂)、ROS清除试剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）、NADPH氧化酶抑制剂二苯基氯化碘盐（DPI）处理蜡样芽孢杆菌,测定分析ROS变化与菌膜形成之间的关系。结果表明,0.01 μmol/L H₂O₂、1 μmol/L H₂O₂、100 μmol/L H₂O₂处理组平均菌膜形成量均显著高于对照组平均菌膜形成量（P<0.05）,0.1 μmol/L H₂O₂、10 μmol/L H₂O₂处理组平均菌膜形成量与对照组平均菌膜形成量相比无显著性差异（P>0.05）,随着H₂O₂浓度的升高,ROS逐渐下降。NAC各处理组平均菌膜形成量均显著高于对照组平均菌膜形成量（P<0.05）,随着NAC浓度的升高,ROS逐渐下降。DPI浓度≤1 μmol/L时,随着DPI浓度的升高,平均菌膜形成量均显著高于对照组平均菌膜形成量（P<0.05）,ROS逐渐下降;DPI浓度>5 μmol/L时,随着DPI浓度的升高,平均菌膜形成量显著低于对照组平均菌膜形成量（P<0.05）,ROS含量升高。表明在不影响蜡样芽孢杆菌生长和细胞活性的前提下,一定浓度的H₂O₂、NAC和DPI处理菌株能够诱导ROS减少,增强蜡样芽孢杆菌菌膜的形成。激光共聚焦显微镜结果显示,与对照组相比处理组具有更强的染色效果,呈现红色的网络结构,而未经处理组呈现松散的结构和更少的菌膜生物量,这表明ROS对蜡样芽孢杆菌菌膜的形成存在抑制作用。     

金属卟啉和甲烷氧化菌素-铜过氧化物模拟酶在食品安全检测中的应用

过去,天然过氧化物酶已被成功应用于食品中过氧化氢、葡萄糖、胆固醇等物质的检测。然而,其稳定性差、纯化成本高的缺点限制了其大规模应用。如今,大量过氧化物模拟酶被开发,金属卟啉复合物是其中重要的一种,具有催化活性高、稳定强、成本低等优点。甲烷氧化菌素(methanobactin, Mb)是甲烷氧化菌在限铜条件下分泌的一种铜结合小肽,能够特异性结合铜离子。据报道,甲烷氧化菌素-铜(methanobactin-Cu,Mb-Cu)具有过氧化物酶活性。本文主要介绍金属卟啉过氧化物模拟酶和Mb-Cu过氧化物模拟酶在食品中葡萄糖、胆固醇、多巴胺等生物小分子,以及CaO₂、马拉硫磷、铜离子等有害物质的检测中的应用,并重点阐述其中的反应机制,以期为研究人员完善模拟酶设计与合成提供参考。     

羟自由基氧化对鲢鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的影响

采用含不同浓度H₂O₂(0.0～10.0 mmol/L)的Fenton体系(H₂O₂-VC-FeCl₃)模拟氧化应激环境对鲢鱼肌原纤维蛋白进行氧化,测定蛋白的巯基含量,以及蛋白凝胶的凝胶强度、白度、持水性、水分分布状态及微观结构,探究氧化度对蛋白凝胶特性的影响。结果表明：随着H₂O₂浓度的增加,蛋白的总巯基含量和白度、持水性呈先升高后降低的趋势。当体系中H₂O₂浓度较低(0.1～0.5 mmol/L)时,蛋白凝胶强度增大,白度得到改善;凝胶的三维结构孔洞的面积较小,且分布较为均匀,凝胶的持水力有所增强。但是当体系中的H₂O₂浓度较高(5.0～10.0 mmol/L)时,蛋白凝胶的白度下降,凝胶结构的有序性降低,孔洞面积变大,分布变得不均匀,凝胶的持水力下降,凝胶品质发生劣变。因此,适度氧化(0.1～0.5 mmol/L H₂O...     

羟基自由基氧化对蛋清蛋白质结构的影响

研究蛋清蛋白质经过FeCl₃/抗坏血酸（Asc）/H₂O₂产生的羟基自由基氧化体系氧化后化学结构的变化。用不同浓度的H₂O₂（0、1、5、10和20 mmol/L）对蛋清蛋白质氧化3 h,研究氧化前后蛋清蛋白质羰基、游离巯基、总巯基、游离氨基、粒径分布及二级结构的变化趋势。结果表明:氧化可使蛋清蛋白质羰基含量显著升高（p<0.05）,游离巯基和总巯基含量显著下降（p<0.05）,游离氨基显著下降（p<0.05）,平均粒径逐渐增大。当H₂O₂浓度为20 mmol/L时,与对照组相比羰基含量增加2.01倍,游离氨基降低了29.1%,平均粒径增加到666 nm。在H₂O₂浓度低于5 mmol/L时,α-螺旋和β-折叠含量升高,β-转角降低;H₂O₂浓度高于5 mmol/L时蛋清蛋白质的肽链发生断裂,进一步导致蛋白质结构发生了变化。以上结果表明氧化能在一定程度上改变蛋清蛋白的结构特性。      

多巴胺快速自聚-沉积改性涤纶的润湿性能

为改善涤纶织物的亲水性,利用多巴胺氧化自聚合的特性,采用CuSO₄/H₂O₂氧化体系诱导多巴胺快速自聚-沉积涤纶表面进行改性。结果表明:与空气氧化条件相比,CuSO₄/H₂O₂氧化条件下涤纶表面的聚多巴胺涂层含有较多的共价交联成分,涂层更致密均匀。考察了各因素对快速沉积PDA改性涤纶织物润湿性能的影响,得到较优的工艺参数,即多巴胺2 g/L,CuSO₄5 mmol/L,H₂O₂ 10 mmol/L,反应时间60 min。该条件下改性涤纶对水的接触角由原来的122.5°降至4.6°,且耐久性好。     

纳米二氧化铈的制备及其过氧化物酶活性的分析

为制备具有催化活性的过氧化物模拟酶,本文以CeO₂为研究对象,采用水热法制备具有过氧化物酶活性的纳米二氧化铈（Nano ceria,CeO₂）颗粒。通过四甲基联苯胺（Tetramethylbenzidine,TMB）显色反应研究水热合成的制备条件,包括:料液比、反应温度、反应时间对纳米CeO₂催化过氧化氢性能的影响,筛选出一种催化活性最优纳米CeO₂,并对其进行结构表征及催化反应稳态动力学研究。结果表明:当料液比为1:60 g/mL、反应温度为80 ℃、反应时间为8 h时,吸光度值最大,为0.501,水热法制备的纳米CeO₂催化性能最佳,此方式合成的纳米CeO₂晶体呈萤石型结构,催化反应与米氏方程吻合,对H₂O₂的K_m值为0.021 mmol/L。结果表明,上述方式合成的CeO₂反应条件简单纯度优异,对H₂O₂催化性能较好。