阿霉素耐药的乳腺癌MCF-7/Adm细胞系的建立及其耐药特性

建立肿瘤耐药细胞系是研究肿瘤细胞的重要手段之一,也是探讨肿瘤多药耐药机制及其逆转的基础。采用大剂量间歇诱导法诱导MCF-7细胞,建立MCF-7/Adm耐药模型;MTT法检测耐药倍数;流式细胞术检测MCF-7细胞和MCF-7/Adm细胞中阿霉素的积累量;real-time PCR检测MCF-7/Adm细胞中ABCG2、ABCC1、ABCB1基因的表达。结果显示,阿霉素抑制MCF-7和MCF-7/Adm细胞存活的IC50值分别为0.535μg/mL和173.275μg/mL,耐药倍数为324;MCF-7细胞中的阿霉素积累量较MCF-7/Adm明显高;MCF-7/Adm细胞中mRNA水平ABCB1基因表达明显上调,ABCG2和ABCC1基因表达下调。成功获得对阿霉素耐药的人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adm,为进一步研究乳腺癌多药耐药机制及其逆转提供有利工具,并且对乳腺癌化疗药物的筛选具有一定的意义。     

阿霉素耐药的乳腺癌MCF-7／Adm细胞系的建立及其耐药特性

建立肿瘤耐药细胞系是研究肿瘤细胞的重要手段之一,也是探讨肿瘤多药耐药机制及其逆转的基础。采用大剂量间歇诱导法诱导 MCF-7细胞,建立 MCF-7/Adm耐药模型;MTT 法检测耐药倍数;流式细胞术检测MCF-7细胞和MCF-7/Adm细胞中阿霉素的积累量;real-time PCR检测MCF-7/Adm细胞中 A BCG2、A BCC1、A B-CB1基因的表达。结果显示,阿霉素抑制 MCF-7和 MCF-7/Adm 细胞存活的 IC50值分别为0．535μg/mL 和173.275μg/mL ,耐药倍数为324;MCF-7细胞中的阿霉素积累量较MCF-7/Adm明显高;MCF-7/Adm细胞中mR-NA水平 A BCB1基因表达明显上调,A BCG2和 A BCC1基因表达下调。成功获得对阿霉素耐药的人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adm ,为进一步研究乳腺癌多药耐药机制及其逆转提供有利工具,并且对乳腺癌化疗药物的筛选具有一定的意义。     

茶氨酸对酒精诱导人肝HL7702细胞损伤的保护作用及机理

目的探究茶氨酸在酒精诱导人肝HL7702细胞损伤方面的保护作用及机理。方法选取500~1 000 mmol范围内,梯度设置为100 mmol的6个酒精浓度处理组对HL7702细胞进行初步处理,选择不同浓度茶氨酸培养HL7702细胞,MTT法测定细胞的存活率以确定酒精造模浓度和茶氨酸最适浓度范围。以不同浓度茶氨酸预保护模型浓度酒精处理过的细胞,测定细胞的存活率,检测其过氧化氢（H₂O₂）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶活性（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）及总抗氧化能力（T-AOC）的含量。结果初步确定酒精造模浓度为800 mmol;茶氨酸浓度在2 000 μg/mL以下对HL7702细胞无毒性,结合实际情况将茶氨酸给药浓度调整为200~800 μg/mL;与模型组相比,茶氨酸显著提高了酒精损伤模型中HL7702的存活率,对HL7702细胞内H₂O₂和MDA的生成起到了一定的抑制作用,而SOD、GSH-PX活性升高,T-AOC能力也增加。结论茶氨酸在不同方面均被证明对酒精诱导人正常肝细胞氧化损伤具有保护作用。其作用机理是茶氨酸通过抑制酒精刺激下抗氧化关键酶活性的降低及氧化反应中间产物的产生,避免人正常肝细胞在酒精诱导下发生氧化损伤及氧化应激反应。     

p38MAPK抑制剂增强阿霉素抑制乳腺癌细胞增殖的体外研究

以乳腺癌细胞株MCF-7为研究对象,经阿霉素及阿霉素联合p38MAPK抑制剂(SB20580)作用细胞,通过MTT法测定细胞存活率、光学显微镜观察细胞形态变化。实验数据显示相同药物浓度下,SB20580可以明显降低MCF-7细胞存活率。结果表明p38MAPK抑制剂可以促进阿霉素抑制细胞增殖的效果。     

积雪草酸A环衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

以积雪草酸为先导化合物,对其A环以及C-28位羧基进行结构改造,得到12个积雪草酸类衍生物.其结构经MS、~1H-NMR和元素分析确证.采用MTT法,选用人肝癌细胞(HepG2)和人胃癌细胞(SGC7901)对所得化合物进行初步的体外抗肿瘤活性测试.结果表明:目标化合物的抗肿瘤活性均优于母体积雪草酸,其中化合物Ⅱ_4、Ⅲ_4显示出较强的抗肿瘤活性,与阿霉素相当.通过分子对接模拟研究Ⅱ_4和Ⅲ_4与Survivin蛋白之间的相互作用.     

普朗尼克F127/P123-雷公藤甲素载药胶束的逆转肿瘤耐药作用

为了考察雷公藤甲素靶向制剂的逆转肿瘤耐药性,薄膜水化法制备了装载雷公藤甲素的双普郎尼克载药胶束(F127/P123-TPL),选择内在性和获得性耐药的A-549和MCF-7/ADR细胞作为耐药细胞模型,MTT试验检测制备的载药胶束,空胶束以及裸药TPL对两种耐药细胞的细胞毒作用,多功能酶标仪以及微弱发光测量仪测定不同浓度的空胶束对荧光探针R-123在A-549耐药细胞内的蓄积量,线粒体膜电势,以及ATP含量的影响。结果表明:TPL和F127/P123-TPL对两种耐药肿瘤细胞都有抑制和杀灭作用,且F127/P123-TPL载药胶束增强了TPL的作用。而作为TPL载体的F127/P123,在使用剂量范围内对耐药肿瘤细胞的存活率无影响,但能够使R-123在A-549耐药细胞内的蓄积量增加,并且使细胞的线粒体膜电势和ATP的含量降低。TPL具有逆转肿瘤耐药作用,而F127/P123-TPL能增强其作用。实验结果将为TPL的新制剂研究打下基础。     

火焰原子吸收光谱法测定鱼鳞中的痕量镉

提出了表面活性剂增敏火焰原子吸收光谱法测定鱼鳞中痕量镉的新方法.研究了操作条件、酸介质及表面活性剂的增敏作用对测定的影响,方法在镉含量为0～50 μg*mL-1范围线性良好.实验检出限为0.0037 μg*mL-1,回收率为95 %～106 %.相对标准偏差(RSD,n=9)<3 %,方法简便、快速、准确,实际测定结果令人满意.     

长白瑞香提取物的急性毒性及其体外抗弓形虫的研究

为研究长白瑞香提取物的急性毒性及其体外抗弓形虫的作用,采用最大耐受量法测定小鼠口服长白瑞香乙醇提取物的急性毒性,采用四唑盐(MTT)比色法测定长白瑞香乙醇提取物及其4个萃取物体外抗弓形虫的作用.结果显示:在观察期14 d内,高(10 g/kg)、低(5 g/kg)剂量组均未见小鼠死亡,且小鼠体重和主要脏器无变化; 长白瑞香乙醇提取物对小鼠的半数致死量(LD₅₀)大于10 g/(kg·BW),属实际无毒.乙酸乙酯和二氯甲烷萃取物抗弓形虫的作用较为明显,二者对感染弓形虫前后的HeLa细胞     

溶瘤腺病毒联合不同浓度阿霉素对肝癌细胞增殖的抑制

研究肿瘤特异性增殖腺病毒联合不同浓度化疗药物阿霉素(ADM)对肝癌细胞增殖的抑制作用.肿瘤特异性增殖腺病AdCN103分别联合不同浓度的阿霉素处理肝癌细胞和正常肝细胞,用实时定量PCR分析腺病毒增殖能力,MTT法检测细胞存活率.结果表明,对于试验细胞株,不同浓度阿霉素存在时AdCN103的复制能力与AdCN103单独感染均没有显著差异.0.64～16 ng/mL ADM对肿瘤杀伤力弱;80～400 ng/mL ADM杀伤肿瘤细胞作用随浓度升高增强,并显著高于AdCN103或ADM单独施药组(p<0.05);但是过高浓度的ADM对正常细胞毒性大,并且与溶瘤病毒联用时失去协同作用.所以,溶瘤腺病毒与适当浓度阿霉素联合用药能显著提高对肝癌细胞的杀伤作用.     

甜瓜蒂中葫芦素类成分分离及体外抗癌活性研究

研究了甜瓜蒂中葫芦素类化学成分及体外抗癌活性.采用硅胶柱色谱从甜瓜蒂的乙醇提取物中分离得到葫芦素A、葫芦素B-2-O-葡萄糖苷、葫芦素B和葫芦素E四个葫芦素类化合物,采用MTT法测定它们体外对人子宫颈癌Hela细胞抑制作用的IC₅₀分别为0.176,0.18,23.79,2.32μg/mL,对人肝癌HepG-2细胞抑制作用的IC₅₀分别为0.216,0.176,16.69,2.37μg/mL.葫芦素A为首次从甜瓜蒂中获得.葫芦素A,B,E对Hela细胞和HepG-2细胞均有较好抑制作用,其中葫芦素A,葫芦素B活性较强.     

Synthesis and Characterization of Chitosan-based Biomateriais Modified with Different Active Groups and Their Relationship with Cytotoxicity

The cytotoxicity profile of three chitosan derivatives with different affinity to water was evaluated in vitro.The derivatives selected were carboxymethylated-chitosan(CMCH),linoleic acid modified- chitosan(LACH)and deoxycholic acid modified-chitosan(DACH),respectively,and the results of FTIR and NMR confirmed the successful modification.Cytotoxicity of these polymers was investigated via the red blood cell lysis assay and the MTT assay.The red blood cell lysis test showed that CH elicited a certain level of red blood cell toxicity,while CMCH,LACH and DACH all displayed low membrane damaging effects, with the hemolysis rates of 2.385%,1.560% and 4.404%,respectively,which comes well within permissible limit(5%).The MTT assay revealed that CH exhibited significant inhibitory effect on fibroblast proliferation at higher concentration,while its three derivatives showed no cytotoxicity.CMCH had stimulatory effects on fetal mouse fibroblast proliferation.Differences in cytotoxicity of CH and its derivatives may result from the specific chemical modifications leading to the alteration of molecular charge density and type of the cationic functionalities,structure and sequence,and conformational flexibility.     

Synthesis and Characterization of Chitosan-based Biomaterials Modified with Different Active Groups and Their Relationship with Cytotoxieity

The cytotoxicity profile of three chitosan derivatives with different affinity to water was evaluated in vitro. The derivatives selected were carboxymethylated-chitosan （CMCH）, linoleic acid modifiedchitosan （LACH） and deoxycholic acid modified-chitosan （DACH）, respectively, and the results of FTIR and NMR confirmed the successful modification. Cytotoxicity of these polymers was investigated via the red blood cell lysis assay and the MTT assay. The red blood cell lysis test showed that CH elicited a certain level of red blood cell toxicity, while CMCH, LACH and DACH all displayed low membrane damaging effects, with the hemolysis rates of 2.385%, 1.560% and 4.404%, respectively, which comes well within permissible limit （5%）. The MTT assay revealed that CH exhibited significant inhibitory effect on fibroblast proliferation at higher concentration, while its three derivatives showed no cytotoxicity. CMCH had stimulatory effects on fetal mouse fibroblast proliferation. Differences in cytotoxicity of CH and its derivatives may result from the specific chemical modifications leading to the alteration of molecular charge density and type of the cationic functionalities, structure and sequence, and conformational flexibility.     

HAP纳米粒子与传统抗癌药物的抗癌效果比较

采用MTT法检测HAP纳米粒子及5种传统化疗药物对体外培养肝癌Bel-7402细胞及正常对照细胞的敏感性，研究对比HAP纳米粒子及传统抗癌药物对体外肝癌细胞的作用特点。在相同的作用时间内，不同浓度的常用抗癌药物大部分表现出良好的抑癌效果，而HAP纳米粒子较大部分化疗药物对肝癌细胞抑制作用低，但对于正常对照细胞无影响，结果HAP纳米粒子能够作为一种抗癌药物，与传统抗癌药物相比，它存在着优越性。     

积雪草酸衍生物的合成及抗肿瘤活性的研究

以积雪草酸为先导化合物,对其2位、3位、12位、23位和28位进行结构修饰,设计并合成12个积雪草酸类似物.采用MTT比色法,选用人胃腺癌细胞株SGC-7901,人非小细胞肺癌细胞株A549和人成纤维肉瘤细胞株HT-1080为靶细胞,进行积雪草酸类似物体外细胞毒活性药理评价.结果表明化合物4b、6b对于SGC-7901、A549、HT-1080的抑制率明显高于对照品,值得进一步研究.     

GSK-3抑制剂增强携带TRAIL的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用

研究携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒联合化疗药物GSK-3抑制剂(氯化锂和SB-415286)对人肝癌细胞的体外杀伤作用.采用MTT法检测病毒ZD55-TRAIL联合化疗药物氯化锂和SB-415286对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404以及正常细胞株L02、QSG-7701增殖的抑制作用,并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药的杀伤作用和安全性;利用Hoechst33342染色对肝癌细胞株BEL-7404的细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测肝癌细胞HepG-2细胞凋亡信号通路的变化.结果表明:低剂量的氯化锂和SB-415286能显著提高ZD55-TRAIL对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404的杀伤作用,对人体肝正常细胞株L02、QSG-7701无明显的抑制作用.说明GSK-3抑制剂能够解除肝癌细胞对TRAIL的抗性,增强携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤.     

Effect of hydroxyapatite nanoparticles on K562 cells in vitro

Stable and single-dispersed hydroxyapatite （HAP） nanoparticles were synthesized with ultrasonic-assisted method. HAP nanoparticles were characterized by dynamic light scattering, XRD （X-ray diffraction） and TEM （Transmission Electron Microscopy）. The effect of HAP nanoparticles on the K562 human myelogenous leukemia cell line was investigated by MTT assay and cell count test, and the mechanism was studied through the changes of cell cycle and ultrastructure. The results showed that HAP nanoparticles inhibited the proliferation of K562 cells dramatically in vitro. HAP nanoparticles entered the cytoplasm of K562 cells and the cells were arrested at G/M phase, thus, the cells died directly.     

结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rrs基因突变与其耐药水平相关性研究

研究武汉地区耐链霉素（SM）结核分枝杆菌的耐药分子机制,进一步研究阐明rrs基因突变与结核分枝杆菌耐链霉素的关系;同时探究武汉地区结核分枝杆菌＂北京基因型＂菌株的流行趋势,为进一步研究武汉地区耐链霉素菌株rrs基因突变与＂北京基因型＂的相关性奠定基础。84株结核分枝杆菌中,44株对链霉素耐药,20株耐其它药物,20株对链霉素敏感,采用PCR直接测序法分析链霉素菌株rrs基因突变情况;采用RD105缺失法鉴定84株临床分离菌株中＂北京基因型＂菌株。结果显示44株SM耐药菌株中,16（36.4%）株检测到rrs基因突变,其中9株1401位点A→G,6株514位点A→C突变,1株1487位点G→A突变;20株耐其它药菌株中1401位点A→G和514位点A→C突变各1株,20株敏感菌株中发现1株1029位点C→T点突变;84株临床分离菌株中有77（91.8%）株＂北京基因型＂菌株,7株非＂北京基因型＂菌株。研究表明链霉素耐药菌株rrs基因主要突变位点在514和1401位点,武汉地区＂北京基因型＂菌株为当地流行的结核分枝杆菌,且SM耐药菌株中突变菌株93.8%（15/16）为＂北京基因型＂,＂北京基因型＂菌株研究及其鉴定是有其科学价值的,值得我们重视。     

T C-1-HPV16 L1细胞模型与动物模型的建立与评价

为了解决人乳头瘤病毒16型L1蛋白(HPV16L1)为主要靶点的疫苗缺乏肿瘤模型细胞来验证疫苗的免疫效果的问题,构建了一个细胞模型并可以利用此细胞在实验动物体内形成肿瘤,用于以HPV16L1为主要靶点疫苗的验证实验。利用这个模型细胞或肿瘤模型可以在体内外检测疫苗的免疫学性质和保护功效。首先,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法获得目标基因HPV16L1的基因序列并连接到载体质粒中,将质粒转染到细胞TC-1后在杀稻瘟菌素抗性压力筛选下获得稳定表达HPV16L1的细胞株。对TC-1和TC-1-HPV16L1两种细胞的生长增殖和成瘤特性进行比较发现,外源基因的加入对细胞特性没有影响。通过体外杀伤实验证实细胞TC-1-HPV16L1能够被HPV16L1靶点疫苗免疫过的小鼠脾淋巴细胞杀伤。实验动物被疫苗免疫后,进行攻瘤实验发现疫苗只对TC-1-HPV16L1组具有保护作用。综上,在本研究中成功地构建了可以检测HPV16L1疫苗的抑瘤效果的模型细胞TC-1-HPV16L1,为HPV疫苗的研究提供了一个模型细胞。     

新型含氟三唑类化合物的合成及生物活性研究

以三氟氯乙烯、对羟基苯乙酮、三氮唑为主要原料,设计合成了6种新型含三氟乙氧基团的三唑类化合物,通过IR1、H NMR和EA确证其结构。通过生物活性测试表明,此类化合物均具有一定的杀菌活性。