荧光定量PCR技术及其检测乳腺肿瘤同源异型盒基因的应用

荧光定量PCR技术是以荧光传递为基础多色荧光检测的核酸定量技术。能准确敏感地测定模板浓度及检测基因变异等,该技术在PCR反应体系中引入荧光标记探针,具有高灵敏性,高特异性等特点并极大地克服原有PCR技术存在的不足如交叉污染等问题。本文概述目前几种荧光定量PCR技术的原理和特点以及我们应用该技术检测乳腺肿瘤同源异型盒基因BP1的工作。     

实时荧光定量PCR技术在临床肿瘤检测中的应用

肿瘤一直以来就是人类难以攻克的顽疾,近年来肿瘤疾病的爆发数量呈现上升趋势,如今我国肿瘤病例数约占全世界病例数的55%。实时荧光定量PCR技术(Real-Time PCR)是一种通过检测PCR产物中荧光讯号的强度从而进行定量的技术,这实现了对核酸信息量的分析比较。相对于常规的定性PCR技术,其具有检测范围宽、检测灵敏度高、精密度高、特性强、定量准确、重现性好等优点,现今已被广泛应用于生物学领域及医学领域尤其是肿瘤的早期诊断、分型、分期、预后诊断等。本文概述了实时荧光定量PCR技术的基本原理及其在肿瘤检测中的应用,并探讨了该技术的发展现状和应用前景。     

实时荧光定量PCR技术在动物遗传育种中的应用

聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction简称PCR)是一项体外基因快速扩增技术.该技术的建立,使定性检测的技术得到改善,达到检测单个靶细胞的水平,以其简便易行、灵敏度高等优点被广泛应用于分子生物学及医学等领域.但其易污染、假阳性及定量不准确等问题也日益突出.而荧光定量PCR技术(FQ-PCR)的出现解决了以上难题,实现了从定性到定量的飞跃.此方法特异性强和可靠性更强,能实现多重反应,且采用完全闭管检测,不需要PCR后处理,有效解决PCR污染问题以及EB对试验人员的伤害;再配以相应的荧光PCR仪,使整个PCR过程实现自动化,具有耗时短,操作方便等特点,因而广泛运用于各个领域.     

光纤型定量PCR仪荧光检测光学系统性能研究

实践表明,光纤型定量PCR仪可以比共聚焦型定量PCR仪具有更高的荧光信号检测精度。然而,光纤型定量PCR荧光检测系统容易受到光源、透镜入瞳直径、光纤数值孔径NA和光纤损耗等诸多因素影响导致光源到光纤耦合效率下降从而影响系统的检测精度。针对光纤型定量PCR仪荧光检测光学系统,对其耦合效率进行Zemax仿真研究,根据仿真结果可以实现光纤型荧光检测光学系统的优化设计。     

基于微流控荧光定量PCR的MRSA快速检测技术研究

针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测的问题,发展一种基于微流控荧光定量PCR的致病菌快速检测新技术。采用光刻法制作了微流控PCR芯片,研制了集成高性能温度控制模块和高灵敏度荧光检测模块的微流控荧光定量PCR分析系统。通过检测特异性基因femA和mecA对MRSA进行快速鉴别。实验结果表明,使用微流控PCR芯片可以成功实现MRSA特异性基因的快速检测,相对传统的管式PCR,芯片使用6μL试剂在56 min完成了MRSA特异基因的检测,不仅节约了反应试剂,而且极大提高了检测速度。该技术可扩展到其他致病菌的检测,具有良好的应用前景。     

浅析食品快速检测技术在宾馆食品安全中的应用

对食品安全监测中实时荧光定量PCR技术与传统检测技术的区别和效用给以浅析,进而探讨PCR技术在宾馆食品安全关键控制点监测和公共卫生突发事件应急处理等方面的实际应用的可行性、必要性和发展前景。     

基于微流控芯片的数字PCR荧光图像分析方法

基于微流控芯片的数字PCR技术是当前痕量核酸分子绝对定量检测的先导技术,可通过荧光图像处理办法实现对目标分子高精度计量。本文基于本实验室大量数字PCR检测获取的荧光图像,开发了具备图像倾斜校正、图像二值化、芯片微反应腔室自动定位、图像快速拼接、图像分割、亮点计数等功能的荧光图像分析系统。该系统不仅实现了核酸分子的精确计数,且实现了较为友好的人机交互     

荧光PCR多通道实时定量检测仪通过鉴定

6月21日，国家质检总局组织有关专家，对北京检验检疫局和深圳市匹基生物工程股份有限公司研制的荧光PCR多通道实时定量检测仪进行了鉴定。专家一致认为该仪器的研制成功，为荧光PCR检测技术在国内的推广应用提供了一种经济适用的检测工具，将在食品安全、兽医诊断、临床医学、生命科学研究等领域发挥重要作用。     

Smart CycIer——世界唯一可同时进行多种PCR反应程序的定量PCR仪

与美国安全局多年合作的Cepheid公司(详见本文后附的公司背景介绍)开发的Smart CyclerDNA扩增仪，是一个以快速，通用，高效闻名的实时荧光定量PCR系统。1998年基于LINL技术的Smart cycler就赢得了美国R&D Top100称号，LINL技术使得研究人员在30分钟之内即可完成定量DNA分析。     

便携式实时荧光定量PCR仪数据处理方法研究

实时荧光定量PCR越来越多被用来定量核酸的表达水平,随着经济与社会的发展进步,个人的自我保护意识和自身健康都重视了起来,使得人们对健康有了更高的要求,适应于现场核酸分析技术的需求日渐显著,不同的仪器有不同稳健的、合适的测量分析方法。本研究针对一种基于转盘式荧光检测的便携式实时荧光定量PCR仪的数据进行处理分析,通过对比优化不同峰值拟合算法及扩增曲线拟合算法优化提升了光学系统检测性能。结果表明,针对该系统峰值拟合算法采用正弦拟合对原始数据进行处理有较好的效果,扩增曲线拟合算法采用4参数logistic拟合,标准品浓度梯度样本扩增结果线性拟合优度R²>0.990,变异系数CV值小于5%,使得光学系统检测性能有所提升,为该类检测模型仪器的数据处理方法提供了一定参考。     

实时定量PCR分析PtDrl01基因hpRNA干扰下的表达

PtDrl01基因从三倍体毛白杨[（Populus tomentosa×P.bolleana）×P.tomentosa]中克隆获得，能够编码NBS-LRR型蛋白，受到水杨酸和甲基茉莉酸诱导表达，是一种广谱的抗病基因。本研究利用实时定量PCR技术分析转PtDrl01基因hpRNA干扰载体的表达模式，分析发现4个表达模式显著差异的转基因株系，为进一步功能鉴定提供材料。本研究表明实时定量PCR能够高灵敏度、精确地检测hpRNA干扰情况下的基因表达量。     

利用微量荧光计测定DNA含量和PCR产物

建立了一种利用微量荧光计定量测定双链DNA及PCR扩增产物的简便方法。在dsDNA含量为5～250ng的范围内,荧光强度与dsDNA含量呈线性关系。用此法测定PCR产物量时,荧光信号不受石蜡油或反应混合物中剩余产物及4×dNTP的干扰,因为这些成份均非双键DNA。本法试用于临床检验,定量测定乙型肝炎病毒DNA及PCR扩增产物,测定结果与用目测电泳胶中溴乙锭带亮度的半定量法符合良好。     

聚合酶链反应（PCR）技术与基因扩增分析仪器（PCR仪）

较为全面地论述了聚合酶链反应(PCR)技术与基因扩增分析仪器(PCR仪).较为详细地阐述了PCR基本原理、PCR结果的检测与分析、实时定量PCR技术、影响PCR效果的因素、PCR技术的应用、PCR仪器的现状及其发展方向.     

业界资讯

泰普生物制药产业化基地落户晋江由北京大学医学部、香港泰普国际生物科学有限公司以及美国迈新生物技术股份有限公司合作开发,总投资600万美元,主要研发生产和销售快速检测疾病的“荧光PCR”、“荧光多重PCR”,以及原位杂交体外检测试剂盒的泰普生物制药成果产业化基地项目,日前正式落户晋江科技工业园区。该项目主要研发生产和销售快速检测疾病的“荧光PCR”、“荧光多重PCR”和原位杂交体外检测试剂盒,产品技术具有国际领先水平。投产后,年产PCR荧光多重试剂盒和原位杂交试剂盒10万个。计划用3年时间实现年产值达1.2亿元,工业增加…     

实时荧光PCR芯片及其检测平台的设计

研制了一款实时荧光PCR芯片及其检测平台.其中PCR芯片实现样品的预处理及实时荧光反应等功能;检测平台实现实时荧光检测、分析及处理等功能.该检测平台由注射泵系统、实时荧光信号采集系统和PCR温度控制系统等组成.并成功地实现了从血液中提取白细胞及同一腔体中PCR反应、检测以及分析等.实验结果表明,该系统能满足实时荧光PCR芯片的控制与检测实验结果,达到了设计各项指标.     

LPS刺激对人结肠癌SW480细胞基因表达的影响

目的研究结直肠癌细胞炎症模型中基因表达的变化以及所涉及的信号通路。方法利用脂多糖(LPS)刺激SW480细胞1、3、6小时后提取RNA构建测序文库进行转录组测序,对表达有变化的基因归类,并进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析,对分析结果进行实时荧光定量PCR验证。结果发现LPS刺激SW480细胞1、3、6小时后,3个时间点表达均有显著变化的基因有250个。对这些差异表达的基因进行了KEGG信号通路富集分析发现利用脂多糖刺激构建的炎症模型里,TNF-α激活和NF-κB信号通路活化最显著。利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库进一步对表达持续上调或下调的基因进行分析发现,部分基因在结肠癌标本中的表达趋势与LPS刺激结肠癌细胞引起的表达变化趋势一致。结论在利用脂多糖刺激构建的结肠癌细胞炎症模型中,炎症过程中的基因表达变化可能与结肠癌的发生发展密切相关。     

应用新型荧光定量PCR技术检测FGFR2基因SNP

目的:探讨一种目前较为新颖的通过Rotor Gene-3000荧光定量PCR仪进行Tm-shifting荧光定量PCR扩增测定单核苷酸多态性(SNP)的可行性。方法:以913份乳腺肿物患者成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)基因rs2981582位点(T→C)作为研究对象,用荧光染料SYBR GreenI标记DNA,并在设计引物时在所研究基因的特异性引物5’末端连接上不同长度的尾,使不同基因型标本的PCR融解曲线的高峰出现在不同位置,最终可通过对PCR融解曲线的分析进行SNP分型测定。结果:纯合子C/C基因型融解曲线峰出现在≤84.60C处,特殊情况下稍向右偏移,但不超过85.10C,峰型较尖。纯合子T/T基因型融解曲线峰出现在≥87.50C处,特殊情况下稍向左偏移,但不小于870C,峰型较尖。杂合子T/C基因型融解曲线峰出现在前两者之间,峰型较平。结论:实验结果表明,用本方法检测大批量人群标本的SNP结果符合遗传平衡定律,且操作简便,检测耗时短,结果特异且费用较为低廉,适合于进行大规模样品的SNP快速测定。     

光学技术在细胞成像中的应用

本文对光学技术在细胞成像方面的应用进行了综述。着重介绍了激光扫描共聚焦显微镜、多光子荧光成像技术、全内反射荧光显微镜、近场扫描光学显微成像技术、光学相干层析成像技术的基本原理及其主要特点。体现了光学检测技术无侵入、无电离辐射,具有多种操作模式,可获得实时与定量等多种信息的特点,在生命科学研究中具有举足轻重的地位。     

实时数字PCR扩增曲线的分类

传统的数字PCR检测仅针对扩增终点的核酸样本执行终点式的荧光分析,依据反应后的荧光图像进行阴阳性统计及样本浓度计算,分析结果极易受假阳性及非特异性扩增影响。本文提出了一种基于过程的实时微孔式数字PCR芯片阴阳性分析方法,从时间维度对数字PCR结果进行定量分析,提高数字PCR检测的准确性。设计支持实时数字PCR分析的硬件系统并与终点式数字PCR仪进行对比,验证系统性能。在此系统上检测不同浓度的人类Ⅳ型疱疹病毒样本,获取实时扩增曲线,采用支持向量机算法对扩增曲线的特征进行学习并应用于检测曲线分类。实验结果表明,所设计的实时数字PCR系统与终点式数字PCR仪扩增结果具有高度一致性。本文所述的基于支持向量机的分类算法对扩增曲线的分类准确率达到98%以上,能准确识别假阳性及非特异性扩增微孔。相比于传统阈值分割法,本方法对阳性点识别的平均准确率提高了17.60%,并且目标模板拷贝数越低,效果越明显。与传统的终点式数字PCR相比,本文提出的基于实时数字PCR系统的数据分析方法具有准确性更高的优势,尤其在低拷贝数检测下可以获取更为精确的定量结果。     

便携式上转换荧光试纸条检测仪的研制

为了实现对上转换荧光试纸条的定量检测,研制了便携式上转换荧光试纸条检测仪,并通过实际测试验证了仪器的主要性能。首先,介绍了上转换荧光技术以及上转换荧光试纸条的测试原理,描述了以光学扫描检测系统和电路系统为核心的便携式荧光试纸条检测仪的设计方案,能够将试纸条的荧光信号转变为电信号并进行处理;然后,基于设计方案研制了检测仪样机,并对实际检测试纸条采集到的信号进行优化;最后,对检测仪的性能进行了测试。测试结果表明:仪器稳定、重复性好,样本检测标准差小于0.004;线性响应特性良好,拟合出的浓度标准曲线决定系数为0.996 3。该检测仪结构精巧、功耗低、性能良好,很好地满足了上转换荧光试纸条定量检测的需求。