白血病患者骨髓裂解气相色谱分析

<正> 白血病(Leukemia)是一种恶性程度极高的血液系统疾病,目前国内外对此病的诊断仍是以患者临床表现、血象、骨髓象及实验室检查为依据,尚缺乏一种快速、简便、准确、客观和自动化程度高的诊断方法。本文用裂解气相色谱(Pyrolysis Gas Chromatography,缩写PGC)对9名正常人及9名临床确诊的白血病患者的骨髓进行了分析,显示出了PGC在白血病诊断方面的一定价值。     

同一白血病人不同治疗阶段骨髓单个核细胞的裂解气相色谱分析

<正> 白血病诊断及疗效的观察,目前国内外仍是以患者临床表现、自觉症状、体征、血象、骨髓象及实验室检查为依据综合进行评定,这种方法受主观因素影响较大,尚缺乏一种快速、简便、客观和自动化程度较高的评定方法。我们曾用裂解气相色谱(PGC)对9名正常人及9名临床确诊的白血病患者骨髓的全细胞成分冻干样品进行过分析,发现正常人和白血病人骨髓的PGC图存在显著的差别,     

卡介苗诱导人外周血单个核细胞Th1活化

目的探讨卡介苗(BCG)对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)Th1活化的调节作用。方法经密度梯度离心法制备PBMCs悬液,用BCG进行体外刺激。WST1法测定BCG对PBMCs增殖能力的影响;ELISA法检测BCG对PBMCs分泌干扰素γ(interferonγ,IFNγ)及IL-4水平的影响;流式细胞术检测BCG对PBMCs Th1活化的影响。结果经BCG体外刺激后,PBMCs的增殖能力、IFNγ的分泌水平及CD4+IFNγ+细胞比例均显著增加(P0.05),IL-4的分泌水平显著下降(P0.05)。结论 BCG可显著诱导PBMCs发生Th1活化,为深入研究BCG的抗肿瘤作用机制奠定了基础。     

外周血单个核细胞在不同pH条件下HSP70形成的研究

目的探讨不同pH血清对热休克蛋白形成的影响。方法抽取16例健康志愿者外周血,应用密度梯度法分离单个核细胞,分别在不同pH血清中42℃热休克0.5、1h,用免疫组化测定热休克蛋白的形成。结果体外血单个核细胞在不同pH血清中热休克蛋白形成有明显差异。结论热休克蛋白的形成速度与应激源数量密切相关。     

慢性粒细胞白血病树突状细胞对T细胞增殖作用的研究

目的　体外诱导慢性粒细胞白血病 (CML)患者外周血单个核细胞 (PBMCs)为树突状细胞 (DCs) ,并对其形态、表型及对T细胞刺激增殖作用进行研究。方法　利用GM CSF、IL 4、TNF α体外定向诱导生成树突状细胞 ,对所诱生的细胞进行细胞表型及形态检测 ,用D FISH方法检测所诱生DCs的白血病源性 ,应用MTT法检测所诱生的DCs刺激T细胞增殖的能力。结果　CML患者PBMCs在体外可诱导生成bcr/abl融合基因阳性的DCs(CMLDCs)。CMLDCs对自体T细胞有明显刺激增殖作用 ,而CML细胞无此作用。CMLDCs刺激同一异体T细胞增殖能力弱于正常DCs,但当培养体系中加入 30 0U/ml干扰素 α(IFN α)时可使其刺激能力接近正常DCs。结论　CMLDCs具有刺激自体及异体T细胞增殖的能力 ,但对异体T细胞的刺激作用弱于正常DCs,IFN α可提高CMLDCs刺激T细胞增殖能力     

人肝再生增强因子对人外周血单个核细胞增殖的影响及其机制

目的探讨人肝再生增强因子(hALR)对人外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响及其机制。方法梯度离心分离PBMC,将细胞分为正常对照组、刀豆蛋白A(ConA)(5mg/L)组和ConA(5mg/L)+hALR(30mg/L)组,分别培养10min、30min、1h、2h、4h后,MTT法检测各组各时间点细胞增殖水平,钙荧光指示剂法检测细胞内游离Ca2+浓度的变化,Western blot法检测细胞内胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化程度。结果4h内,各组细胞的增殖水平差异无统计学意义,但ConA组细胞增殖水平已表现出逐渐升高的趋势。正常对照组细胞内Ca2+浓度在加入Fluo-3/AM后2h达高峰,ConA组1h达高峰,ConA+hALR组10min达高峰。正常对照组细胞内磷酸化的ERK随培养时间的延长而逐渐减少;ConA组细胞内磷酸化的ERK在30min达高峰,之后逐渐降低;ConA+hALR组细胞内磷酸化的ERK在2h前明显低于ConA组。结论hALR可能通过影响细胞内Ca2+浓度的变化峰值和磷酸化的ERK,来抑制人PBMC的免疫功能,从而影响其增殖。     

云芝糖肽对乳腺癌患者外周血单个核细胞Toll样受体4的作用

目的探讨云芝糖肽(polysaccharopeptide,PSP)对乳腺癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcell,PBMC)Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的作用。方法体外分离乳腺癌患者或健康人PBMC,并将其分别分为PSP组(分别加入终浓度为25μg/ml的PSP和终浓度为100μg/ml的PHA)和对照组(只加入终浓度为100μg/ml的PHA),采用TLR4单克隆抗体对各组细胞进行免疫荧光染色。将乳腺癌患者PBMC分为空白对照组、TLR4抗体组、PSP组和PSP+TLR4抗体组,采用Q-PCR检测各组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平。结果健康志愿者对照组PBMC荧光强度较强,而健康志愿者PSP组PBMC荧光强度较弱;乳腺癌患者PSP组与乳腺癌患者对照组相比,细胞荧光强度更弱。与空白对照组比较,TLR4抗体组PBMC IL-12和组TNF-α的表达水平均显著降低(P<0.05),PSP组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平均显著上调(P<0.05或<0.01);与PSP和TLR4抗体组比较,PSP+TLR4抗体组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平均显著上调(P<0.05或<0.01)。结论 TLR4可能是PSP的作用受体之一。     

海拔对2型糖尿病患者外周血单个核细胞迁移及黏附功能的影响

目的 比较不同海拔对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)迁移及黏附功能的影响.方法 选取咸阳市某医院T2DM患者25人及同期健康体检者20人,作为低海拔组,兰州市某医院T2DM患者...     

当归多糖预防给药对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞黏附分子表达及细胞周期的影响

目的探讨当归多糖(Angelica polysaccharide,APS)预防给药对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cells,BMNCs)黏附分子表达及细胞周期的影响。方法将BALB/c小鼠分为4组:正常对照组(不作任何处理)、NS组(经腹腔注射生理盐水)、2mg/kgAPS组(经腹腔注射2mg/kgAPS)和8mg/kgAPS组(经腹腔注射8mg/kgAPS),连续注射7d后,进行照射,并继续给药13d。分别于照射后第7、14天采集各组小鼠外周血,并取骨髓,进行WBC、RBC、PLT及BMNC计数;流式细胞术检测小鼠Sca-1+BMNC表面黏附分子CD44和CD49d的表达及BMNC细胞周期的变化;半定量RT-PCR和Western blot法分别检测小鼠BMNC细胞周期蛋白D(2CyclinD2)mRNA转录水平和蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,NS组外周血WBC、RBC、PLT及BMNC数量均明显减少,Sca-1+BMNC表面黏附分子CD44和CD49d的表达明显下降(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),CyclinD2 mRNA转录水平和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);2mg/kgAPS组和8mg/kgAPS组能增加外周血各指标及BMNC数量(P<0.05),明显降低第7和14天Sca-1+BMNC表面黏附分子CD44和CD49d的表达水平(P<0.05),降低G0/G1期细胞比例(P<0.05),提高CyclinD2 mRNA的转录水平和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 APS预防给药能通过降低放射损伤小鼠Sca-1+BMNC表面黏附分子的表达水平,上调BMNC的CyclinD2 mRNA和蛋白表达来加速BMNCG1期向S期的转换,促进造血恢复。     

单-ADP-核糖基转移酶3过表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨单-ADP-核糖基转移酶3(mono-ADP-ribosyltransferase 3,ART3)过表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法在Lipofectamine 2000的介导下,将ART3基因重组真核表达质粒pCMV-ART3-myc-tag转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,用G418进行稳定转染细胞株的筛选,同时设未转染组对照。Western blot法检测稳定转染细胞中ART3-myc-tag蛋白的表达,MTT法、流式细胞术和Transwell试验分别检测ART3对MDA-MB-231细胞增殖活力、凋亡及侵袭能力的影响。结果 ART3可在MDA-MB-231细胞中稳定过表达;ART3转染组细胞的增殖活力和侵袭能力均明显高于未转染组(P0.05);ART3转染组细胞的凋亡率明显低于未转染组(P0.05)。结论过表达ART3能促进乳腺癌细胞增殖、侵袭,并抑制其凋亡,本实验为进一步研究ART3基因在乳腺癌发生发展中的作用及其机制奠定了基础。     

人参皂苷单体Rb1对人慢性粒白血病细胞K562增殖和分化的影响及其信号转导机制

目的探讨人参皂苷单体Rb1对人慢性粒白血病细胞K562增殖和分化的影响及其细胞内信号转导机制。方法取对数生长期的K562细胞,分别加入不同浓度(20、40、80、160、320μmol/L)的Rb1,MTT法检测其对K562细胞增殖的影响;加入浓度为160μmol/L Rb1,收集培养24、48和72 h的细胞,经Wright染色后,镜下观察Rb1诱导K562细胞成熟分化情况;Western blot法检测培养12、24、48和72 h的细胞中JAK2、STAT5、p-JAK2及p-STAT5的表达水平。结果浓度为20¹60μmol/L的Rb1对K562细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性,作用48 h时抑制率达最高;经Rb1诱导后,K562细胞体积缩小,核直径减小,核和浆的比例降低,细胞向成熟方向分化;JAK2的表达水平随Rb1作用时间的延长而提高,p-JAK2的表达随着作用时间的延长而降低;各组间STAT5蛋白的表达水平无明显变化(P>0.05),但p-STAT5表达于作用48 h时开始降低,并持续至72 h。结论人参皂苷单体Rb1可抑制人慢性粒白血病细胞K562增殖并诱导其向成熟方向分化,JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化在细胞增殖及诱导分化的信号转导过程中发挥重要作用。本实验为治疗白血病天然中药的研发提供了实验依据。     

白藜芦醇衍生物TMS对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞中一氧化氮、血管细胞间黏附分子-1及核转录因子-κB表达的影响

目的探讨白藜芦醇衍生物TMS(trans-3,5,4′-trimethoxystilbene)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中一氧化氮(nitric oxide,NO)、血管细胞间黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达的影响。方法取P3代HUVECs,采用CCK-8法检测不同TMS浓度(0、5、10、20、50、100μmol/L)对HUVECs细胞存活率的影响。将P6代HUVECs分为正常对照组、LPS组、TMS(高、中、低浓度)+LPS组及PDTC+LPS组,Griess法检测各组细胞产生NO浓度;Real-time PCR法检测各组细胞中VCAM-1、NF-κB p65基因m RNA的转录水平;Western blot法检测各组细胞中VCAM-1、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达水平;免疫细胞化学染色法检测各组细胞中VCAM-1和NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 5、10μmol/L浓度组TMS对细胞存活率影响较小,50、100μmol/L浓度组中细胞生存率明显下降(P0.05),且呈时间、剂量依赖性。低、中、高浓度TMS+LPS组与PDTC+LPS组细胞中NO浓度显著下降(P0.05);中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组细胞中VCAM-1、NF-κB p65基因m RNA转录和蛋白表达水平均明显低于LPS组(P0.05),IκBα蛋白表达水平明显高于LPS组(P0.05);正常对照组细胞胞质中有弱VCAM-1蛋白荧光表达,未见NF-κB p65蛋白荧光表达,LPS组可见VCAM-1和NF-κB p65蛋白的强荧光表达,中浓度TMS+LPS组和PDTC+LPS组中VCAM-1和NF-κB p65蛋白荧光表达均弱于LPS组。结论白藜芦醇衍生物TMS可抑制LPS诱导HUVECs表达NO、VCAM-1和NF-κB p65,且其抑制VCAM-1效应可能是通过NF-κB细胞信号通路而发挥作用的,本研究为临床治疗血管内皮功能紊乱相关疾病提供了实验依据。