以子房为材料制备烟草染色体标本的方法

为使烟草染色体标本制备过程中取材更方便,本研究以异源五倍体烟草（2n=5x=58）为材料,观察了不同大小子房、不同预处理方法对烟草染色体制片效果的影响。首先,子房大小按花冠与花萼长度比例分为6类;其次,预处理方法分为2类,即：（1）室温下于0.002 mol/L的8-羟基喹啉中预处理2、4和6 h;（2）7℃下于0.002 mol/L的8-羟基喹啉中预处理12、24和36 h。结果显示,当花冠长度小于或等于花萼长度的1/2时,子房中分裂期细胞的比例最大,为97.00±17.82个/1000个。该时期子房于7℃经24 h预处理后,染色体数目与形态清晰可辨。利用上述方法制作云烟87（2n=4x=48）和N.plumbaginifolia（2n=2x=20）的染色体标本,均获得较好的结果。此外,将上述方法制作的五倍体烟草染色体经5S rDNA-FISH,获得了清晰可辨的5个不同信号,与预期一致。可见,幼嫩子房可用于烟草染色体标本的制作,且用改良的预处理方法制备的染色体标本可用于染色体计数和核型分析,也可用于原位杂交分析。     

烟草染色体显带技术试验研究

染色体显带技术在烟草遗传育种方面有着重要的应用价值。本试验在比较常规制片和Ｆ一ＢＳＧ酶解火焰干燥制片方法的基础上，提出用６％ＮａＨＣＯ＿３代替Ｆ一ＢＳＧ中的５％Ｂａ（ＯＨ）＿２对染色体进行变性处理，处理时间－２０～２５分钟显带效果较好。用对二氯苯饱和水溶液对烟草根尖预处理３～５小时可以积累较多的细胞有丝分裂相。     

烟草与药用植物罗勒远缘杂交后代的细胞学研究

利用普通烟草Hicks与药用植物罗勒杂交后代Hicks×罗勒的F1代花粉母细胞进行减数分裂观察和F2代根尖细胞进行核型分析。研究结果表明:科间杂种后代的染色体数目为不固定的数值,具有非整倍性,且整倍体与非整倍体共处于同一植株体内。从花粉母细胞的形态结构来看,出现一些异常,有“8”字形、“O”形多价体及一些单价体。对2n=38的一组根尖细胞的核型分析发现,第6对染色体为一个三价体,还发现一个单价体,且带有随体,其核型为2B,核型公式2n=38=26m+8sm+1Ш+1Ι。     

具翼烟草(Nicotiana alata)核型、C带与rDNA染色体定位研究

采用去壁低渗法、BSG法和双色荧光原位杂交技术,分别开展了具翼烟草（Nicotiana alata）的核型分析、C显带与45S和5S rDNA染色体定位研究。4个具翼烟草收集系根尖细胞有丝分裂中期染色体平均核型为2n=2x=12m+6st,染色体臂比的变异幅度为1.14~4.22,平均臂比值为2.17,最长与最短染色体之比为2.16,属2B型。C带研究结果显示,具翼烟草中期染色体C带丰富,多态性良好,共显带25条,包括7条着丝粒带、15条端带和3条中间带。45S和5S rDNA染色体定位研究结果显示,具翼烟草根尖细胞有丝分裂中期染色体细胞相分别显示了3对45S rDNA和2对5S rDNA基因位点信号,45S rDNA基因位点分别位于I S、III S、V L上,2对5S rDNA基因位点分别位于I L、IV S上（字母L和S分别代表染色体长臂和短臂,罗马数字代表同源染色体序号）。在I号同源染色体上同时存在45S和5S rDNA基因位点。研究结果对烟草属系统起源、遗传进化以及遗传育种等领域的进一步研究具有重要的参考价值。      

浅谈人体外周血淋巴细胞染色体的制备

染色体制备技术是医学遗传学中最常见而重要的一种技术,由于各个实验室实验条件和个人操作手法的差异,细胞培养和染色体标本的制作方法也不尽相同。笔者就人体外周血淋巴细胞染色体的制片过程中容易出现的问题及近几年制作染色体标本总结的经验和实验方法改进进行探讨,并提出了有效的避免方法。     

烟草转基因检测方法的研究

通过试验研究,提出了烟草转基因检测方法和标准,首先提取样品DNA采用260－280nm波长扫描测定提取物DNA浓度和纯度,并利用叶绿体不编码蛋白基因序列PCR扩增确定模板质量,同时进行35s启动于,NOS终止子的PCR扩增,对于未出现特异性扩增的样品进行35s和NOS的巢式PCR反应,对于出现目标长度片段扩增的样品再次提取DNA重复检测,并利用限制性内切酶酶切、巢式PCR、探针杂交和目的基因序列扩增进行验证,确定所转目的基因种类。并应用竞争性PCR测定样品中转基因阳性成分含量。     

烟草细菌性青枯病防治方法研究

研究了烟草细菌性青枯病的生物防治和化学防治相结合的方法。通过盆栽试验结果表明：产细菌素的烟草青枯细菌无致病力菌株抗链霉素突变体ｒＡ３－５和农用链霉素联合作用，对烟草青枯病防效最佳。先加致病菌再加拮抗菌和先加拮抗菌再加致病菌的防病效果分别为９３．８％和１００％，推迟发病期８天和３０天，而ｒＡ３－５和农用链霉素单一作用的防病效果分别为５６．３％、６５．３％和４１．７％、５８．４％。     

烟草18S rDNA染色体原位杂交技术优化研究

荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization,FISH）在细胞遗传学中有较多应用,其中重复序列常被作为探针来研究物种进化、分类。但现常用的探针序列均较长（200 bp-500 bp）,杂交耗时较多。本研究以烟草（Nictiana tabacum）为材料,克隆并标记18S rDNA保守序列（254 bp）,以其为探针对烟草染色体进行FISH,经18 h杂交获得了清晰的信号。在此基础上,利用荧光素直接标记引物序列（寡聚核苷酸）,经较短时间（2 h）的杂交,也获得了清晰的信号。以寡聚核苷酸为探针对云烟87四倍体、N.tabacum-N.plumbaginifolia五倍体、烟草六倍体、云烟87八倍体以及N.plumbaginifolia的染色体进行杂交,均获得了良好效果。且杂交液可简化配制,洗脱过程也可简化。18S rDNA寡聚核苷酸探针与5S rDNA寡聚核苷酸探针结合,实现了N.plumbaginifolia的18S rDNA和5S rDNA双色FISH。所以,该寡聚核苷酸序列可以应用于烟草属植物18S rDNA（45S rDNA）位点的分析,且较大程度缩短了操作时间并简化了操作过程。      

烟草抑芽剂施用方法的研究

采用不同的施用方法对芽敌和芽克进行了烟草田间抑芽试验 ,结果表明 ,芽敌 5 0倍抑芽率90 .5 4 %,芽克 5 0倍抑芽率 76 .1 5 %。芽敌 5 0倍处理与手工抹芽相比 ,上部叶面积减少 1 38.94cm2 ,单叶重减少 0 .4g,总糖减少 2 .3个百分点 ,烟碱减少 0 .2 1个百分点。但改进施药技术 ,把芽敌施药浓度改为1 0 0倍 ,施药 2次 ,可明显增加烤烟的叶面积和单叶重     

红茶菌发酵制备特色酸香型烟草浸膏

为制备一种酸香型烟草浸膏,首先优化了烟草浸提液提取工艺,通过红茶菌发酵浸提液并浓缩获得烟草浸膏,经GC-MS分析了浸膏的香味成分,结合感官评价其在卷烟中应用效果。结果显示：提取工艺经优化后,烟草浸提液提取率和糖质量分数分别达到55.34%、13.14 g/L;与未发酵浸膏相比,发酵烟草浸膏香味成分含量和种类均有所增加,其中苯乙酸、乳酸、3-甲基丁酸等酸性香味成分增加明显,且巨豆三烯酮、β-大马酮、β-紫罗兰酮、麦芽酚等烟草特征香味成分含量均有提高;发酵浸膏在卷烟中应用,可有效提高卷烟的吸食品质,香气质和香气量也明显提高,且效果优于未发酵制备的烟草浸膏。经浸提优化和生物发酵,获得了一种具有酸香特征的烟草浸膏,为制备有特征香味的烟草浸膏提供了借鉴。     

烟草病毒病检测方法的研究现状

目前针对烟草花叶病毒病、烟草黄瓜花叶病毒病、马铃薯Y病毒病的检测方法主要有指示植物法、电镜诊断法、血清学检测法、核酸分子杂交技术、以PCR为基础的分子生物学技术等,通过阐述这些检测方法的原理,分析其优势及不足,为烟草病毒病检测技术的发展提供科学依据及理论参考。     

烟草根细胞原生质体的制备

根细胞是植物单细胞多组学研究的重要材料,烟草作为重要的模式生物之一,其根细胞原生质体的高效分离也越来越重要。为了获得产量和活性较高的烟草根细胞原生质体,以本氏烟草和栽培烟草K326为材料,采用酶解法制备了烟草根细胞原生质体,同时优化了影响原生质体分离纯化的酶解液组合、酶解时间和酶解渗透压等条件,并通过显微镜观察和台盼蓝染色鉴定其活性。结果表明：(1)以1.5%纤维素酶+1.5%果胶酶+0.4 mol/L甘露醇的酶解液组合,经过2h酶解、500 r/min离心10 min得到的根尖细胞原生质体产量和活性相对较高;(2)最终获得了活性大于70%、数量达到105数量级的较高质量烟草根原生质体。     

转基因烟草检测方法研究进展

随着烟草国际贸易的发展,转基因烟草产品的检测成为烟草贸易关注的热点。目前对于转基因烟草产品的检测方法主要有两种,一种是以DNA为基础的PCR法,另一种是以蛋白质为基础的ELISA法。笔者主要论述了转基因烟草PCR检测法的研究进展,这对开展转基因烟草检测的研究工作有一定的参考价值。     

转基因烟草定性检测方法的研究

本文总结多年的试验研究结果,提出了一套较为完善的转基因烟草定性检测技术,应用该技术,能使转基因烟草的检测精确度由常规PCR的0.1%提高到0.005%。该技术在两次CORESTA转基因烟草盲检合作试验及多年的进出口烟叶、卷烟制品的转基因检测工作中得到广泛的验证。      

烟草内生细菌分离方法的优化研究

用研磨组织稀释分离法与表面消毒有效性评价相结合的方法确定了适宜烟草组织的表面消毒方法以及内生细菌分离培养基。采用1%次氯酸钠浸泡5分钟,再用75%酒精浸泡2分钟能够100%去除表面附生菌,并且分离得到更多的内生细菌。研究比较了TSA、NA、PDA、LB 四种常用的细菌分离培养基在分离烟草内生细菌中的差异,其中TSA和NA培养基分离得到的内生细菌数量较高,TSA培养基从烟草根、茎、叶中分离出的内生细菌数量分别为5.18 log cfu/g.fw、2.17 log cfu/g.fw、4.69 log cfu/g.fw;NA培养基分别为5.01 log cfu/g.fw、1.81 log cfu/g.fw、4.93 log cfu/g.fw。对分离得到的127株内生细菌进行16S rDNA序列测定表明,TSA和NA培养基分离得到的内生细菌种类最多,其中TSA培养基分别从根、茎、叶中分离到9、7、13种内生细菌;其次是NA培养基,分别从根、茎、叶中分离到8、6、10种内生细菌。结果表明,采用TSA和NA培养基分离烟草内生细菌,可以达到较为理想的分离效果。      

烟草薄片型卷烟纸的制备及性能研究

以烟梗为原料制取的化学机械浆(CMP)与少最木浆纤维配抄烟草薄片原纸,经烟草萃取液涂布后制备烟草薄片型卷烟纸,并检测其相关物理性能和感官品质.根据烟草薄片型卷烟纸对抗张强度、透气度等物理指标的要求,通过优化打浆工艺,确定其最佳打浆度为:烟梗化机浆35°SR;未漂针叶本浆80°SR;漂白阔叶木浆40°SR;漂白麻浆70°SR;烟梗化机浆、未漂针叶木浆、漂白阔叶木浆、漂白麻浆的最佳配比为:75∶20∶2.5∶2.5,在此条件下,其抗张指数、透气度和伸长率分别为39.7 N·m/g,10.21μm/(Pa·s)和1.41％;经评吸实验感官评价,与普通雪茄烟纸相比,烟草薄片型卷烟纸的木质杂气减少,刺激性降低,品质得到提升.     

烟草甲和烟草粉螟的防治研究

简述了烟草甲（Ｌ．ｓｅｒｒｉｃｏｒｎｅ）和烟草粉螟（Ｅ．ｅｌｕｔｅｌｌａ）在烟叶仓储中的危害情况,综述了国内外储烟害虫防治技术研究进展。在此基础上,针对我国在烟叶储存养护和卷烟生产线上如何防虫杀虫的问题,提出了初步的建议。     

烟草薄片制备工艺的现状

目前烟草薄片的生产方法主要有稠浆法、辊压法和造纸法.文章综述了近年来国内外不同制备工艺对烟草薄片理化性质的影响,同时分析了各种生产工艺的优缺点,并指出了今后国内烟草薄片的研究方向和发展趋势.     

烟草赤星病抗性鉴定方法的研究

建立了一种在温室内通过人工接种离体叶片快速鉴定烟草赤星病抗性的技术。在２５℃～２８℃，湿度８０％～９０％条件下，将烟草赤星病菌直接接种于离体叶片上，培养６～９天后，离体叶片的发病率及病级与其植株水平上对赤星病菌的抗性表现极显著相关。该技术能反应烟草在田间病圃内的抗病或感病程度，从而可以做为鉴定指标。     

烟草薄片胶用CMS的制备及性能研究

通过正交设计 ,采用“酸前法”制备出高稳定性、高粘度、较高取代度的CMS作为烟草薄片粘合剂以代替CMC ,讨论了制备CMS的最佳工艺条件。实验表明 ,甲壳素用量在 1.5%、CMS用量为5%时 ,所制薄片的耐水性大于 7min ;为保证烟草薄片的耐水性、色泽、柔韧性和吸味等技术指标 ,制片时各添加剂的建议用量为CMS 5% ,梗末∶叶末为 6∶4 ,甘油 2 % ,磷酸 1%～ 2 %。