干酪乳杆菌胞外多糖LCP1的流变性研究

通过对干酪乳杆菌LC2W胞外多糖LCP1溶液流变性质研究发现,高浓度LCP1溶液呈剪切变稀,低浓度时,剪切速率对黏度没有影响,溶液黏度随温度升高下降明显,pH对LCP1溶液黏度影响很小,盐可以降低LCP1溶液黏度,但黏度降低与盐浓度有关,通过黏弹性研究发现LCP1水溶液不能形成胶体,乌氏黏度计测得LCP1水溶液固有黏度[η]为1.930 dL/g。     

干酪乳杆菌KW3产胞外多糖的研究

从西藏农家开菲尔粒中筛选出1株高产胞外多糖(EPS)的乳酸菌KW3,生理生化试验和16S rDNA测序结果经鉴定其为干酪乳杆菌,在乳清培养基中的胞外多糖产量达到178mg/L。体外抗氧化试验表明:KW3胞外多糖总还原力达到(138.28±5.35)mgVC/g;当其质量浓度达到200μg/mL时,对DPPH自由基的清除率37.53%,FRAP值为(600.16±15.23)FeSO4.7H2Oμmol/L。体内抗氧化试验显示KW3胞外多糖可显著降低衰老小鼠血清、肝和脑组织中的MDA含量,提高其SOD活性和GSH-Px活性。     

副干酪乳杆菌及其胞外多糖的抗氧化性研究

以具有抗氧化性的嗜酸乳杆菌ATCC4356为对照,研究了1株副干酪乳杆菌H9的抗氧化性。分析了2株菌不同浓度下菌悬液和无细胞提取液的DPPH自由基清除能力、金属离子螯合能力和抑制脂质过氧化能力。并对H9菌株菌悬液煮沸灭活前后的抗氧化能力进行了比较。同时,对H9菌株自产的胞外多糖的抗氧化性进行了研究,测定了其在不同浓度下DPPH自由基清除能力、超氧自由基清除能力、羟自由基清除能力。结果表明:H9菌株的菌悬液和无细胞提取液抗氧化能力均随着浓度的升高呈上升趋势,浓度达到109cfu/mL时抗氧化能力最强,此时DPPH的清除能力分别达到(55.0±1.7)%和(47.5±1.8)%,螯合金属离子的能力分别为(15.2±1.2)%和(15.1±1.3)%,抑制脂质过氧化的能力分别为(76.2±1.1)%和(70.0±0.4)%。煮沸后菌悬液抗氧化能力趋势与未煮沸前一致,但同等浓度下煮沸处理会降低其抗氧化能力。H9菌株自产胞外多糖也具有较强的抗氧化能力,并随着多糖浓度的升高抗氧化能力增强。结果表明H9菌株的抗氧化性可能与活细胞和菌体代谢产物密切相关。     

高产胞外多糖干酪乳杆菌的太空诱变选育

为了提高干酪乳杆菌G5的胞外多糖产生能力,采用太空诱变技术对其进行选育,从中筛选出高产胞外多糖菌株。通过富集培养、平板筛选、脱脂乳发酵和遗传稳定性实验,最终得到两株高产胞外多糖且遗传稳定性较好的突变株EPS-33和EPS-43。突变株EPS-33和EPS-43在25℃发酵脱脂乳,发酵结束时胞外多糖的产量分别220.42和198.49mg/L,为出发菌株的1.9倍和1.7倍。2个突变菌株与出发菌株产胞外多糖的变化趋势基本相同,但产量大幅增加。     

副干酪乳杆菌胞外多糖抗氧化活性分析

为评价干酪乳杆菌生物合成胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)抗氧化活性,本文分离纯化高产胞外多糖的三株副干酪乳杆菌(3号、5号和7号)的胞外多糖,并对其DPPH·、·OH和O₂^-清除率分别进行测定,评价其体外抗氧化活性。通过分析EPS对H₂O₂诱导氧化损伤293T细胞的保护作用,评价其胞内抗氧化活性。结果表明,当EPS浓度为400 μg/mL时,其DPPH·、·OH和O₂^-的清除率最高,分别为8.87%(5号)、88.94%(7号)和34.55%(7号),其中对·OH清除能力高于抗坏血酸(65.87%),且三株菌株之间没有明显差异。3号副干酪乳杆菌所产EPS显著提高超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)活性并抑制了丙二醛(MDA)的生成(P<0.05),且与多糖浓度呈正相关。因此,3株副干酪乳杆菌胞外多糖具有良好的抗氧化活性,作为天然抗氧化剂具有良好的应用潜力。     

干酪乳杆菌LC2W合成胞外多糖培养基成分的优化

研究了不同培养基对干酪乳杆菌LC2W胞外多糖产量的影响，并研究了以脱脂乳为基础培养基，添加不同碳源、氮源和其他盐类对LC2W胞外多糖产量的影响。结果表明，不同培养基对LC2W胞外多糖产量影响较大，其中PTYG和脱脂乳培养基胞外多糖产量较高；以脱脂乳培养基为基础培养基，添加质量分数1．0％大豆蛋白胨、1．5％葡萄糖、0．1％的K2HPO4可以提高胞外多糖产量28.75％。     

干酪乳杆菌LC2W胞外多糖的体外免疫活性研究

分别以葡萄糖、乳糖为碳源制得干酪乳杆菌LC2W胞外多糖,并对分别分离纯化得到的中性多糖组分体外细胞培养试验结果表明,G1、G2（以葡萄糖为碳源经LC2W发酵分离纯化制备两种均一多糖）和L1、L2（以乳糖为碳源经LC2W发酵分离纯化制备两种均一多糖）均无细胞毒性,在5~80 μg/mL的浓度范围内,L1对B淋巴细胞增殖的抑制作用比G1强,具有明显的剂量效应,其抑制作用与浓度呈负相关;与此相反,在5~80 μg/mL的浓度范围内,G2对B淋巴细胞增殖抑制作用比L2强,表现为明显的剂量效应,其抑制作用与浓度呈正相关。碳源的改变会影响干酪乳杆菌LC2W胞外多糖的组成,并引起其生理活性产生差异。     

干酪乳杆菌LC2W胞外多糖的分离纯化及性质研究

干酪乳杆菌LC2W发酵脱脂乳上清液通过添加三氯乙酸除蛋白，酒精沉淀得粗胞外多搪LCP；粗多糖LCP经DE-AE-Sepharose FF离子交换柱分离得到三个组分（LCP1、LCP2和LCP3）．主要组分LCP1经高效体积排阻色谱和毛细管电泳鉴定为均一组分，分子量为3.27×10^6 Da。紫外光谱测定表明：LCP1不含蛋白质和核酸；红外光谱测定表明：LCP1具有多糖的特征吸收峰；气相色谱测其单糖组成（质量比）为鼠李糖：半乳糖：葡萄糖=0.4353：0.2514：1。     

藏灵菇源副干酪乳杆菌KL1对蛋鸡脂质过氧化的研究

利用筛选自藏灵菇中的产胆盐水解酶的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)KL1,制备冻干菌粉作为受试物进行蛋鸡动物实验,探讨其对蛋鸡脂质过氧化的影响。将120只农大3号矮小鸡随机分为低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组和对照组,对照组饲喂基础日粮,低、中、高实验组在此基础上,分别摄入活菌剂量为10~5、10~6、10~7 CFU/(只·d)KL1活菌制剂,连续11周,期间测定血清抗氧化指标,屠宰后测定肝脏脂肪含量并观察组织切片。结果表明,中、高剂量实验组与对照组相比,肝脏组织中粗脂肪含量极显著降低(P0.01),分别降低了32.4%、48.2%;低剂量实验组与对照组相比降低了9.4%;肝脏组织切片油红O染色结果显示,随菌株KL1剂量的增加肝脏脂滴堆积现象逐渐减轻,其中高剂量实验组抑制脂肪肝的作用最强;抗氧化指标结果显示,与对照组相比,低、中、高实验组血清总抗氧化能力均显著提高(P0.05),分别为16.3%、13.9%、14.8%,中剂量实验组超氧化物歧化酶活力显著提高19.4%(P0.05),低剂量和高剂量实验组分别提高11.3%、16.4%,丙二醛含量和谷胱甘肽过氧化物酶活力无显著差异(P0.05)。说明藏灵菇源副干酪乳杆菌KL1具有较强的抑制脂肪肝形成能力,并具有较好的脂质抗氧化能力。     

NADH氧化酶表达对干酪乳杆菌LC2W胞外多糖产量的影响

为了考察NADH氧化酶基因(nox)对于干酪乳杆菌LC2W胞外多糖(EPS)产量的影响,本研究以变异链球菌(Streptococcus mutans)基因组为模板,PCR扩增得到1374 bp的nox序列,并构建乳杆菌重组表达质粒p IB184-nox。通过电转化,构建得到一株过表达NADH氧化酶基因的重组干酪乳杆菌LC-nox。该重组菌在无氧发酵时,NADH氧化酶活力为0.7 U/m L,在有氧发酵时,NADH氧化酶活力达到2.65 U/mL。通过HPLC检测发现,发酵液中的乳酸含量随NADH氧化酶活力升高而降低。节省的碳源用于EPS合成,使得重组菌LC-nox在有氧条件下EPS产量最高达263.7 mg/L,比出发菌株提高75.4%。为乳杆菌EPS合成调控提供了新的理论基础。     

藏灵菇源干酪乳杆菌微胶囊喷雾干燥工艺条件的优化

为了降低从藏灵菇中筛选的产胆盐水解酶的干酪乳杆菌微胶囊菌粉的水分活度及保持其高活菌数量,采用三因素三水平[L₉（3⁴）]正交实验,研究不同喷雾干燥工艺条件对微胶囊菌粉水分活度和活菌数量的影响。结果表明:在阿拉伯胶浓度为40%、进/出口风温度为170/75℃、蠕动泵流速为75 m L/min的条件下进行微胶囊化,其菌粉的水分活度为0.096,活菌数量为2.37×10⁹CFU/g。既降低了微胶囊菌粉的水分活度,又保持了其高活菌数量,为制备干酪乳杆菌微胶囊产品提供实践依据。      

干酪乳杆菌对HepG2细胞抗氧化功能的影响

目的：研究干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）对氧化应激状态下HepG2细胞抗氧化功能的影响。方法：将培养的HepG2细胞分为3 组：对照组（不加H2O2）、模型组（加入H2O2）、乳杆菌组（加入干酪乳杆菌和H2O2）。细胞培养至12 h和24 h时分别测定其上清液和细胞裂解液的抗氧化活性。利用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚对HepG2细胞进行染色,在荧光显微镜下观察不同处理对细胞形态的影响。结果：添加干酪乳杆菌12 h后,与模型组相比,细胞上清液中的总抗氧化力（total antioxidant capacity,T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSHPx）和过氧化氢酶（catalase,CAT）活力分别提高了80%、30%和124%（P＜0.05）,细胞裂解液中的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力显著增加了22%（P＜0.05）;24 h后,细胞上清液中的T-AOC、SOD活力、GSH-Px活力、CAT活力和过氧化物酶的活力都显著增加（P＜0.05）,还原型谷胱甘肽和丙二醛的含量分别显著降低了29%和63%（P＜0.05）。细胞裂解液中SOD活力比模型组显著降低了20%（P＜0.05）。加入干酪乳杆菌后,细胞受损数量明显减少,降低了56%,大部分细胞形态正常。结论：在体外条件下,干酪乳杆菌可以提高氧化应激状态下HepG2细胞的抗氧化能力。     

单一干酪乳杆菌KL1发酵益生菌酸奶工艺条件的研究

应用单因素实验及正交实验,确定单一干酪乳杆菌KL1发酵酸奶的最佳原料乳,并对其益生菌酸奶发酵工艺条件进行优化。筛选得到的最佳原料乳为M₂,同时通过添加M₆改善酸奶的色泽与组织状态;采用三因素三水平L₉（3⁴）正交实验优化酸奶的发酵工艺条件,接种量是影响KL1发酵酸奶品质的最主要因素,确定干酪乳杆菌KL1发酵酸奶的优化条件如下:接种量为6.0%,M₆添加量1.0%,葡萄糖添加量1.5%,37℃下发酵酸奶22 h,优化后的益生菌酸奶的活菌数量较对照组高10倍。      

藏红花水提取物抑制人卵巢癌细胞HO-8910的增殖作用

本文研究了藏红花水提取物抑制HO-8910人卵巢癌细胞的增殖作用。将实验分为细胞组、藏红花水提物低剂量组（0.4 mg/L）、中剂量组（0.8 mg/L）、高剂量组（1.0 mg/L）,HO-8910细胞培养成功后,分别用不同浓度的藏红花水提物进行处理,检测卵巢癌细胞的增殖能力及细胞外调节蛋白激酶（ERK）、Bcl-2、Bax蛋白的含量。结果表明,在实验浓度范围内,随着藏红花水提物浓度的提高,卵巢癌细胞的增长率明显受到抑制,其中,高剂量组作用时,24 h、48 h、72 h的增殖率分别为14.13%、12.15%、和11.16%,显著低于其他各实验组（p<0.05）;另外,高剂量组藏红花水提物作用后,其对卵巢癌细胞的凋亡率以及对癌细胞侵袭能力的抑制率分别为20.11%和64.24%,其ERK、Bcl-2、Bax蛋白表达量分别为0.61、0.48和0.95,与其他实验组均具有显著性差异（p<0.05）。说明藏红花水提取物能够明显抑制卵巢癌细胞活性,降低卵巢癌细胞增殖能力及侵袭能力,其作用机制可能与ERK信号通路有关。     

鲟鱼硫酸软骨素对结直肠癌细胞抑制作用

探究鲟鱼硫酸软骨素对结直肠癌细胞的生长抑制能力,并初步确定影响结直肠癌细胞生长的主要原因。选取3株具有代表性的结直肠癌细胞Caco-2、HCT-116、SW480,采用CCK-8法测定细胞生长曲线、硫酸软骨素对癌细胞增殖的抑制能力;以其中一株结直肠癌细胞HCT-116为模型,用流式细胞仪测定其周期和凋亡情况,用细胞核染色法观察处理前后细胞形态,结合caspase-3凋亡酶活力的测定,考察鲟鱼硫酸软骨素对结直肠癌细胞的促凋亡能力,并初步确定作用途径。研究结果表明,鲟鱼硫酸软骨素对结直肠癌细胞Caco-2、HCT-116、SW480的增殖具有一定抑制作用,最高抑制率分别为70.94%、90.00%和75.00%,明显高于阳性对照处理组;处理后,细胞周期G1/G0期比例升高至88.56%,S期比例降低至4.47%,阻滞细胞G1/G0期;同时,使用鲟鱼硫酸软骨素处理细胞后,细胞形态发生变化,出现细胞核固缩以及细胞破碎等现象,细胞主要的凋亡酶活力显著升高,酶活力可达1 645 IU/μg,使细胞发生凋亡,凋亡率可达63.73%。研究结果证明,鲟鱼硫酸软骨素具有促进结直肠癌细胞凋亡、抑制细胞增殖的能力。     

地皮菜中一种新型水应激蛋白基因的克隆表达及其抗人结肠癌细胞SW480的作用

利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增出地皮菜（Nostoc commune Vauch.）一种新型水应激蛋白（water stress protein,WSP）的基因（GenBank 序列号：KF003026）,连接到原核表达载体pET28a上,测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21,获得一种新型水应激蛋白表达工程菌;经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导表达及镍离子亲和层析柱（Ni-NTA）纯化后,得到了带6×His标签、分子质量大小为40 kD的可溶性目的蛋白,称其为重组水应激蛋白1（recombinant water stress protein 1,Re-WSP1）。细胞增殖抑制实验结果表明,Re-WSP1蛋白可以抑制结肠癌细胞SW480的增殖,而对正常结肠上皮FHC细胞无明显作用;DAPI细胞核染色结果表明,该蛋白能够诱导SW480细胞凋亡小体的形成;Western blotting结果显示,Re-WSP1蛋白能够促进Procaspase-3和Procaspase-8的活化剪切。以上结果表明：Re-WSP1蛋白能够明显的抑制结肠癌SW480细胞的增殖,并可能通过Caspase依赖途径诱导SW480细胞凋亡。     

金莲花总黄酮诱导人HT-29结肠癌细胞凋亡机制的研究

本文研究了金莲花总黄酮乙醇提取物(TFETC)诱导人HT-29结肠癌细胞凋亡的作用机制。MTT法测定TFETC对HT-29细胞增殖的影响,200μg/mL浓度TFETC对癌细胞的抑制率达到81%。通过4,6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)法和流式细胞术检测到金莲花总黄酮乙醇提取物可以诱导癌细胞凋亡,200μg/mL浓度TFETC处理的癌细胞通过显微镜观察出现凋亡,亚G1期DNA含量达到28.9%。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定TFETC对HT-29细胞内Bcl-2,Bcl-xL,Bax,caspase-9,caspase-3和COX-2等基因表达的影响。TFETC在mRNA水准上下调抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xL,上调促凋亡基因Bax,caspase-9和caspase-3的表达。此外,TFETC还可抑制HT-29细胞内COX-2基因的表达,并呈剂量效应关系。本研究结果显示金莲花总黄酮乙醇提取物可以通过内源性线粒体途径诱导人HT-29结肠癌细胞的凋亡,同时金莲花总黄酮乙醇提取物还可通过下调COX-2基因的表达抑制HT-29细胞的增殖。