自然发酵腐乳中芽孢杆菌的分离与鉴定

从自然发酵腐乳中筛选芽孢杆菌并研究其作用。根据菌株产蛋白酶能力大小,对自然发酵腐乳中细菌进行分离纯化获得四株芽孢杆菌,经纯化培养后观察其个体形态和菌落形态,利用Biolog微生物自动鉴定系统和16S r DNA序列分析对其精确鉴定。结果显示四株菌株分别为:一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis B),两株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus B),一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens B)。     

微波杀菌处理杏汁中残留微生物鉴定

杏汁经微波杀菌(控制微波温度67℃,杀菌3次),从杀菌后杏汁中分离鉴定出3株细菌和1株酵母菌。经形态学、生理生化试验初步鉴定,并分别采用16S r DNA和ITS序列鉴定分离的细菌和酵母菌株,结果表明:残存的细菌分别为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),残存的酵母菌为毕氏酵母(Pichia),且残留微生物均有耐热、耐微波特性。研究确定了微波处理的残留微生物,为完善杏汁微波杀菌工艺提供理论指导。     

低盐腌制大头菜腐败菌的分离与初步鉴定

以低盐腌制大头菜为原料,对贮藏、流通期间主要腐败微生物进行分离鉴定。利用微生物学传统分离培养方法从腐败的真空包装低盐腌制大头菜中分离得到菌落形态差异明显的7株细菌、2株酵母。对细菌菌株进行革兰氏染色,同时提取细菌和酵母菌纯培养物基因组DNA,分别进行16S rDNA、26S rDNA的D1/D2序列PCR扩增。测序结果与NCBI中已知序列进行比对和鉴定,发现5株为Bacillus属,1株为Lysinibacillus属,2株为Candida属,1株为非培养细菌的同源菌。经系统发育分析,菌株X5和Lysinibacillus sphaericus的相似性为97%,其余菌株分别与Bacillus sp.,Bacillus subtilis,Bacillus megaterium,Bacillus boroniphilus,Bacillus gibsonii,Uncultured bacterium,Candida pararugosa,Candida zemplinina的相似性为99%~100%。通过微生物生理特性研究及腐败现象分析,推断芽孢杆菌和酵母可能是引起腌制大头菜腐败变质的主要原因。     

年糕中微生物的分离纯化和鉴定

通过对发生腐败变质的真空包装年糕中微生物进行分离、纯化和反证得到2株细菌、3株酵母菌、1株霉菌。经过形态观察、生理生化、微生物鉴定系统等方法,初步鉴定2株细菌分属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、不动杆菌属(Acinetobacter sp.),3株酵母菌都属于假丝酵母属(Candida spp.),1株霉菌属于构巢曲霉(Aspergillus nidulans)。     

山茱萸中有益菌的分离和鉴定

将药用植物山茱萸作为有益菌的分离源,以获得常见有害菌的抗性菌,提高山茱萸的利用价值。以马铃薯葡萄糖琼脂和营养琼脂平板分离、纯化其体外真菌和细菌,对获得的菌株进行黑曲霉、黄曲霉和大肠杆菌等有害菌的对峙实验,并对抗性菌进行分子生物学和生理生化的种属鉴定。实验结果表明：从山茱萸中分离纯化28株菌（12株细菌、16株真菌）,其中2株菌对黑曲霉、黄曲霉有一定的抑菌效果,经分子生物学和生理生化实验鉴定,菌株S136是肠杆菌属（Enterobacter sp.）、菌株S138是芽孢杆菌属（Bacillus sp.）的细菌。     

发酵蔬菜浆水中优势好氧微生物的分离及鉴定

采用两种培养基,利用传统微生物学分离鉴定方法对浆水中的优势好氧微生物进行分离纯化,得到8株酵母菌和1株细菌,并对其从形态学和生理生化鉴定两方面进行属的鉴定,初步将酵母菌归入3个属,分别是酒香酵母属、瓶形酵母属和假丝酵母属;将细菌初步归为醋酸杆菌属。     

26S rDNA序列分析法鉴定开菲尔发酵液中的酵母菌

利用26S r DNA D1/D2区序列分析法鉴定了内蒙古牧区传统开菲尔发酵液中的酵母菌,为筛选可发酵特色乳酒的酵母菌奠定基础。对所分离纯化得的酵母菌进行菌落特征和细胞显微形态区分,在形态鉴定基础上,选择代表菌进行26S r DNA D1/D2区序列分子鉴定。结果表明,共分离到36株酵母菌,形态聚类为5类,经DNA提取、26S r DNA D1/D2区PCR扩增、酶切、基因序列分析和同源性比对,鉴定为5种分子类型的酵母菌,分别为胶红酵母菌(Rhodotorula mucilaginosa)、诞沫假丝酵母菌(Candida zeylanoides)、发酵毕赤酵母菌(Pichia fermentans)、酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、有孢圆酵母菌(Torulaspora delbrueckii)。传统开菲尔发酵液中分离到的酿酒酵母,具有可发酵特色乳酒的潜质。     

浓香型皇台大曲可培养细菌群落结构及其产淀粉酶的研究

采用稀释平板法,从浓香型皇台大曲中分离纯化出73株细菌菌株,经PCR扩增其16S rDNA并测序,比对分析发现这些纯化的细菌菌株中有23株16S rDNA序列各异的可培养细菌,这些菌株分别为Bacillus licheniformis16株、Bacillus subtilis2株、Bacillus amyloliquefaciens1株、Bacillus cereus1株、Bacillus atrophaeus1株、Bacillus sonorensis1株和Brevibacillus sp.1株;采用透明圈法和液态发酵法对大曲中可培养细菌产淀粉酶性能进行检测,结果表明Bacilluslicheniformis、Bacillus subtilis和Bacillus cereus的一些菌株产淀粉酶的活性较高,其中,Bacillus licheniformis的数量最多,是重要的白酒酿造功能菌。     

传统馒头发酵酵子中一株优势乳酸菌CGMCC 10624的分离与鉴定

目的对分离自传统馒头发酵酵子中的一株优势乳酸菌CGMCC 10624进行多相分类学鉴定与分析。方法从馒头发酵酵子中分离、纯化得到乳酸菌CGMCC 10624,综合利用细菌形态学观察、基于细菌16S rRNA基因序列的系统发育学分析以及基于碳源代谢利用情况的生理生化特征鉴定方法,对其分类地位进行研究。结果乳酸菌菌株CGMCC 10624被鉴定为食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)。结论本研究分离、鉴定得到传统馒头发酵酵子中的一株优势乳酸菌,为该菌的生物学功能研究及制作包含乳酸菌和酵母菌的复合发酵菌剂奠定了资源基础。     

云南杨梅发酵液中酵母菌筛选及耐受性研究

以云南杨梅为材料进行自然发酵,发酵液经酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)培养基和麦芽汁培养基分离纯化获得酵母菌。对菌株进行产酯、产乙醇及产H₂S能力测定,结合杜氏小管发酵实验筛选,然后对筛选酵母菌进行耐受性测试,最后基于26S r DNA基因片段序列对筛选酵母菌进行分子生物学鉴定。结果表明,从云南杨梅发酵液中分离纯化获得59株酵母菌,筛选到3株优良酵母菌,编号为JYR-5、JYR-14、JYR-17,3株菌在温度40℃、乙醇体积分数5%、pH 2.5、葡萄糖质量浓度300 mg/L、SO₂质量浓度400 mg/L的条件下仍能正常生长。经鉴定,菌株JYR-5、JYR-14为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),菌株JYR-17为库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)。因此,从云南杨梅发酵液中筛选的3株酵母菌为杨梅酒酿造微生物资源开发利用提供一定参考价值。     

基于NRPS基因筛选鉴定产生环脂肽葡萄附生细菌的研究

本研究采用平板稀释法和斜面分离纯化技术,从夏黑葡萄中筛选分离到5株附生细菌,提取菌株的基因组DNA,PCR扩增16S r DNA序列,产物纯化后进行克隆测序,利用MEGA 6.0软件对序列进行同源性比对分析,构建系统进化树后,将5株附生细菌分别鉴定为克雷伯肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、克考氏菌(Kocuria marina)、嗜气芽孢杆菌(Bacillus aerophilus)、类芽孢杆菌(Paenibacillus agaridevorans)。在此基础上,以非核糖体多肽合成酶基因(non-ribosomal peptide compounds synthetase,NRPS)为靶点,筛选到含有目的条带的菌株PTWA2,经系统发育树预测该菌株能够产生环脂肽类化合物。该菌株发酵产物经有机溶剂萃取、常压硅胶柱层析、Sephedex LH-20等分离手段纯化得到一个单体化合物,采用核磁共振和质谱方法鉴定该化合物为环脂肽Surfactin A。该研究结果为以功能基因定向筛选产生环脂肽化合物的菌株提供了新的研究方法与理论依据。     

浓香型大曲中蛋白酶产生细菌的分离鉴定

从浓香型大曲中分离纯化得到5株产蛋白酶细菌,对其进行了生化分析,结合《伯杰细菌鉴定手册》对这5株细菌的鉴定。鉴定结果为：A苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）;B枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）;C蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）;D多粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa）;E枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对产酶能力最强的C菌株用Biolog微生物自动分析系统进行鉴定,鉴定结果与生化鉴定结果相符合。     

市售生鲜湿面中腐败菌的分离与鉴定

采用涂布平板法从生鲜湿面中分离腐败菌,通过形态观察及分子生物学技术对分离腐败菌进行菌种鉴定。结果表明,从生鲜湿面中分离得到8株典型菌株,包括3株霉菌和5株细菌。经鉴定,3株霉菌（A1,B1,C1）分别为草酸靑霉（Penicillium oxalicum）、黄曲霉（Aspergillus flavus）、黑曲霉（Aspergillus niger）;5株细菌（S1～S5）分别为3株蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、1株肠炎沙门氏菌（Salmonella enterica）、1株副芽孢杆菌（Bacillus paramycoides）。     

浓香型白酒窖泥细菌的分离鉴定

从浓香型白酒窖泥中分离纯化得到5株细菌,对其进行菌落观察、镜检和生理生化检测,参照《伯杰细菌鉴定手册》进行初步鉴定并确定其属名,利用Biolog微生物鉴定系统对其中1株进行鉴定。结果表明,5株细菌分别为Mierococcus(微球菌属)、Staphylococeus(葡萄球菌属)、Pseudomonas(假单胞菌属)、Bacillus(芽孢杆菌属)、Burkholderia glumae(水稻细菌性谷枯病菌)。     

酱香型白酒酒醅细菌的分离鉴定

利用传统的分离纯化手段,从酱香型白酒酒醅中分离纯化得到6株细菌。通过菌落形态观察、革兰氏染色、芽孢染色、荚膜染色和生理生化检测,结合《伯杰细菌鉴定手册》和Biolog微生物鉴定系统对其进行鉴定。结果表明,HY-01、HY-02、HY-03、HY-04号均为芽孢杆菌属(Bacillus);HY-05为无色杆菌属(Achromobactersp);HY-06为伴放线菌嗜血菌(Haemophilus actinomycetemcomitans)。     

传统发酵浆水中乳酸菌和酵母菌的分离与鉴定

以陕西传统发酵浆水为试验材料,采用平板划线法分离纯化其中的乳酸菌和酵母菌,共得到36株菌,其中乳酸菌18株,酵母菌18株。对纯化后的菌株进行形态学观察、API 50 CHL和API 20 C AUX生化试剂盒鉴定以及16S r DNA和26S r DNA序列的分子生物学鉴定。结果表明:乳酸菌主要有戊糖乳杆菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、副干酪乳杆菌、纤维二糖乳杆菌和唾液乳杆菌。酵母菌主要有地霉属、毕赤酵母属、阿氏丝孢酵母、解脂假丝酵母、伊萨酵母。本研究为浆水的纯种发酵及其工业化生产奠定了基础。     

云南重楼内生细菌的分离鉴定及系统发育树分析

利用云南文山采集的人工栽培和野生云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch)根茎,对其内生细菌进行了分离、纯化及鉴定。分离得到40和44株云南重楼内生细菌。经16S rDNA测序,在NCBI中比对,MEGA4建系统进化树,所得内生细菌分别鉴定为分属于6和8个属。其中,人工栽培云南重楼内生细菌中,芽孢杆菌属(Bacillus)和肠杆菌属(Enterobacter)分离频率分别为35%、27.5%,是其优势内生细菌群;野生云南重楼内生细菌中,芽孢杆菌属(Bacillus)和克雷伯氏菌属(Klebsiella)分离频率分别为36.4%、20.4%,是其优势内生细菌群。本研究结果体现了人工栽培和野生云南重楼内生细菌分布的差异及云南重楼根中内生细菌的多样性,也为后续重楼内生菌的多样性开发提供了理论和实验基础。     

腐败杨梅中两株细菌的分离与鉴定

以腐烂杨梅为研究对象,采用平板划线分离与斜面纯化技术,筛选出两株编号为YMS-7和YMN-5的细菌,分别提取两株菌的DNA后,扩增16S r DNA序列并克隆测序,获得的基因序列在Ez Bio Cloud数据库中进行同源性比对,构建16S r DNA系统发育树,结合生理生化分析,将YMS-7和YMN-5分别鉴定为类芽孢杆菌Paenibacillus agaridevorans与嗜气芽孢杆菌Bacillus aerophilus。     

浓香型白酒产酸细菌的分离筛选

采用稀释涂布法从浓香型白酒生产中分离得到204株细菌,经初筛、复筛、产酸实验得到产酸较强的4株细菌Pe-B36、SW-B158、T-B14和Q1XX-B254,经放大产酸实验得pH值及总酸分别为:4.63、0.73度,4.47、0.82度,4.63、0.86度,4.69、0.81度。通过16S rDNA序列分析,对这4株细菌进行了分子鉴定,研究结果表明,Pe-B36和Bacillus cereus、SW-B158和Bacillus amyloliquefaciens、T-B14和Bacillus sp.、Q1XX-B254和Bacillus cereus分别具有较高的相似性。产酸细菌的筛选和精确鉴定对浓香型白酒酿造环境的产酸分析及提高白酒品质具有重要的意义。     

26S rDNA序列分析法鉴定酵母菌

利用26S rDNA DI/D2区序列分析法,对从葡萄、苹果、梨、枣、黄豆酱、酸菜、荔枝、橙子、干酵母、自发粉中分离得到18株酵母菌进行形态观察,分别提取DNA、经PCR扩增后,测定其26S rDNA序列,并与基因库中基因序列进行同源性比较,经鉴定5株为酿酒酵母菌、4株为季氏毕赤氏酵母菌、4株为东方伊萨酵母菌、1株为陆生伊萨酵母菌、1株为葡萄有孢汉逊酵母菌、1株为鲁氏接合酵母菌、1株为美极梅奇酵母菌、1株为发酵假丝酵母菌.结果表明,本试验方法可以实现酵母菌种级水平鉴定,与传统方法相比具有简便、快速等优点,适合实验室及工业化生产中酵母菌的鉴定.