不同分子量聚乙二醇单修饰重组人干扰素a-2a

利用N-羟基琥珀酰亚胺活化制备不同分子量的聚乙二醇修饰剂(NHS-mPEG，分子量5000, 10000, 20000)，考察三者水解动力学性质的差异，结合正交实验确定了不同分子量修饰剂制备单条PEG链修饰重组人干扰素a-2a(rhIFN-a-2a)的最佳反应条件，用离子交换法对产物进行分离纯化. 研究了不同分子量聚乙二醇干扰素结合物的体外活性，比较其蛋白收率. 实验结果表明，修饰剂分子量增大，应选择蛋白与修饰剂的反应活性高的修饰反应条件，体外活性虽然降低，但同时单修饰聚乙二醇干扰素结合物收率更高，产品质量更易控制.     

中性蛋白酶的单甲氧基聚乙二醇修饰

目的利用单甲氧基聚乙二醇(mPEG)化学修饰中性蛋白酶,并考察修饰酶的酶学性质。方法采用氰脲酰氯对mPEG5000进行活化,再对中性蛋白酶进行化学修饰,制得mPEG-中性蛋白酶,并比较中性蛋白酶在修饰前后的红外光谱和酶学性质。结果中性蛋白酶的修饰率为41.7%;红外光谱分析表明,修饰酶红外光谱图的多处特征峰有较大的改变;其最适温度和最适pH值未发生变化,但修饰酶的热稳定性显著提高。结论确定了经mPEG化学修饰中性蛋白酶的最适温度和最适pH值,获得的修饰酶热稳定性高于天然酶。     

单甲氧基聚乙二醇修饰蚓激酶的制备及性质研究

采用以三聚氯氰活化的单甲氧基聚乙二醇(mPEG-5000),对从赤子爱胜蚓体内提取的抗血栓酶——蚓激酶进行了化学修饰,以期降低其抗原性及增加它的稳定性。实验表明,在37℃下,15.0mL,pH9.2,0.1mol?L?1的硼酸缓冲液中,按每1.0mg的蚓激酶加入25.5mg活化的mPEG,水浴保温1h,经透析、超滤浓缩、冻干得mPEG修饰酶,测得蚓激酶的修饰率为63.2%,酶活回收率为56.6%。在此基础上,对修饰蚓激酶的性质进行了研究。结果显示,修饰后的蚓激酶对底物的亲和力有所增加(天然酶表观米氏常数Km值为0.267mg.mL?1,修饰酶Km'值为0.115mg.mL?1);修饰蚓激酶的抗胰蛋白酶水解能力、热稳定性均优于天然酶;同时修饰酶的抗原性有了较大程度的降低,与抗血清的结合能力大约是天然酶的25.0%左右。     

干扰素聚乙二醇修饰的研究进展

干扰素(Interferon,IFN)是一类具有抗病毒、免疫调节、抑制细胞增殖等多种生物活性的细胞因子,而体内循环半衰期短限制了其在临床上的应用。聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)修饰可以有效地改善干扰素的理化性质和生物学特性,延长体内循环半衰期。本文综述了聚乙二醇修饰干扰素的研究进展,着重介绍了聚乙二醇修饰化学的发展,α、β、γ干扰素各自不同的聚乙二醇化学修饰方法,并对聚乙二醇化干扰素的发展趋势进行了展望。     

聚乙二醇修饰重组人干扰素-α1b条件的优化

目的对聚乙二醇(PEG)衍生物化学修饰重组人干扰素-α1b(rhIFN-α1b)的条件进行优化。方法以3种不同的第2代PEG衍生物对rhIFN-α1b进行修饰,SDS-PAGE分析PEG及修饰产物的表观相对分子质量。对反应pH值、温度、时间、修饰剂用量等修饰条件进行优化,并对修饰产物进行初步分离纯化和活性检测。结果PEG的电泳表观相对分子质量大于其理论值;PEG20000的修饰率(92.1%)高于PEG5000和PEG10000;修饰剂用量和pH值是主要影响因素,最佳pH为9.0,rhIFN-αlb与PEG20000的最佳摩尔比为1∶10,时间和温度影响甚微。单点修饰产物保留了14.4%的体外活性,多点修饰产物无活性。结论选择了合适的PEG衍生物并优化了修饰条件,为进一步深入研究奠定了基础。     

聚乙二醇修饰重组人干扰素α1b的制备及其性质

目的制备聚乙二醇(PEG)修饰的重组人干扰素α1b(rhIFNα1b),并分析其部分性质。方法采用PEG修饰rhIFNα1b,通过离子交换层析分离纯化修饰混合物,单点修饰产物经超滤浓缩后,经Lowry法检测蛋白的浓度,SDS-PAGE和RP-HPLC检测蛋白的纯度,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点,质谱法检测蛋白的相对分子质量,细胞病变抑制法检测蛋白的体外活性,ELISA法检测蛋白的抗原性。结果单点修饰产物的蛋白得率为33%;SDS-PAGE分析纯度为96.1%,RP-HPLC分析纯度为98.1%;等电点为6.22;相对分子质量为39946;比活为1.28×106IU/mg,活性保留率为14.4%;抗原性至少降至原来的1/625。结论制备的单点修饰rhIFNα1b药学性质获得改善,有望开发为安全、长效的新型干扰素。     

聚乙二醇活性酯对于干扰素α2b化学修饰的初步研究

目的 探讨聚乙二醇活性酯（mPEG－ssMW5000和MW2000）修饰重组人干扰素α2b(rhIFNα2b）的最佳反应条件。方法 在不同反应条件下,用聚乙二醇活性酯修饰rhIFNα2b,采用VSV－Wish细胞病变抑制法测定修饰后rhIFNα2b的生物学活性。结果 随着PEG对rhINFα2b摩尔比的增加或修饰反应时间的延长,rhIFNα2b的修饰产物相对分子质量和不均一性增加,且随着rhIFNα2b修饰度的提高,其生物学活性逐渐降低。结论 初步确立了PEG修饰rhIFNα2b的反应条件,反应摩尔比与聚乙二醇活性酯的相对分子质量是影响反应的关键因素。     

单甲氧基聚乙二醇修饰白藜芦醇的初步研究

采用以琥珀酸酐和氯化亚砜活化的单甲氧基聚乙二醇,对白藜芦醇进行了化学修饰,以期改善其水溶性并增加其稳定性。通过官能团反应,白藜芦醇分子接上单甲氧基聚乙二醇分子,合成出一种枝化白藜芦醇单甲氧基聚乙二醇衍生物;对单甲氧基聚乙二醇端羟基依次进行羧基化、酰氯华等活化处理,通过酰氯与羟基的官能团反应合成出目标分子。应用透析方法分离纯化得到修饰产物．通过红外光谱分析、紫外光谱分析、HPLC分析,证实了产物与目标分子的结构相吻合。     

单甲氧基聚乙二醇化学修饰人血清白蛋白及产物性能表征

用三光气活化的单甲氧基聚乙二醇5000 （mPEG）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）反应制备单甲氧基聚乙二醇琥珀酸亚胺酯（SC-mPEG）,SC-mPEG修饰人血清白蛋白（HSA）制备mPEG-HSA.傅里叶变换红外光谱仪（FT-IR）、紫外分光光度计（UV）和高效液相色谱仪（HPLC）对产物结构予以分析表征.结果表明,已经成功得到目标产物,mPEG的平均活化度为75％,SC-mPEG与HSA的平均偶联度为45％.     

单甲氧基聚乙二醇氨基的制备

通过两步反应制备了相对分子质量(简称分子量)为5 000的单甲氧基聚乙二醇氨基(m PEG5k-EDA)。首先以单甲氧基聚乙二醇5 000(m PEG5k)和对甲苯磺酰氯(p-Ts Cl)为原料,反应得到活性中间体m PEG5k-OTs,然后通过与乙二胺的亲核取代反应获得目标产物,并通过正交实验确定了最佳反应条件:m PEG5k-OTs与乙二胺的摩尔比为1∶25、反应温度为80℃和反应时间为24 h。产物和中间体的结构通过IR和1HNMR进行表征,并通过SDS-PAGE碘染色法检测产物分子量的变化情况。结果表明,通过该方法能简便快捷地制备m PEG5k-EDA,在最优实验条件下,目标产物的总收率高达76.8%,且SDS-PAGE检测表明,产物纯度较高,不含交联副产物。     

聚乙二醇修饰重组人干扰素ω的过程优化

采用分子量20000直链单甲氧基PEG-琥珀酰亚胺琥珀酸酯(mPEG-SS)对毕赤酵母表达的重组人干扰素ω(rhIFNω)进行氨基化学修饰,以期获得抗原性降低及稳定性增加的单链PEG修饰产物(PEG-rhIFNω).建立了PEG修饰rhIFNω的反应体系,考察了修饰反应各因素对单修饰产物得率的影响,优化修饰工艺条件为:...     

聚乙二醇化重组人干扰素α2b的质量检测

目的　建立聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEG rhIFNα2b)的质量检测方法。方法　采用Wish细胞 VSV病毒系统 ,以CPE法测定干扰素的生物学活性 ,基质辅助激光解吸附飞行时间质谱法测定相对分子质量 ,反向高效液相法 (RP HPLC)测定纯度 ,溴化氰裂解 SDS PAGE法测定肽图 ,等电聚焦电泳法测定等电点 ,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱。结果　聚乙二醇化重组人干扰素α2b的比活为 6 . 0× 10 6～ 10 . 0× 10 6IU/mg蛋白 ,相对分子质量约为 6 2 6 0 0 ,等电点在 5 . 2 0～ 6. 5 5之间 ,紫外最大吸收峰约在 2 78nm波长处。结论　所建立的检测方法可控制聚乙二醇化重组人干扰素α2b质量。     

氨基化单甲氧基聚乙二醇的合成研究

首先合成了单甲氧基聚乙二醇对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs),然后根据盖布瑞尔合成法原理,以邻苯二甲酰亚胺钾盐(PPI)为亲核试剂与mPEG-OTs反应,生成单甲氧基聚乙二醇的邻苯二甲酰亚胺衍生物(mPEG-PI),mPEG-PI与水合肼反应肼解生成伯胺,合成了一端为氨基的单甲氧基聚乙二醇(mPEG-NH2)。讨论了缚酸剂、溶剂、反应条件对反应的影响。通过红外、液质联用、核磁共振谱图证实了产物与目标分子的结构相吻合。     

甲基丙烯酸聚乙二醇单酯的制备

以硅胶作吸水剂,对甲苯磺酸作催化剂,进行甲基丙烯酸/聚乙二醇缩合反应制备聚羧酸类高效减水剂的合成单体甲基丙烯酸聚乙二醇单酯,考察了吸水剂用量、催化剂用量、反应温度和反应时间对甲基丙烯酸聚乙二醇单酯制备反应的影响,确定了较理想的反应条件.     

聚乙二醇修饰纳米银的制备研究

研究了巯基乙酸聚乙二醇酯的制备技术,获取足量巯基乙酸聚乙二醇酯,以其作为分散剂,研究纳米银和纳米银聚合物核壳材料的合成方法并获得相应产物。通过FTIR红外光谱仪、紫外-可分光光度计、透射电子显微镜、扫描电子显微镜等仪器对产物的微观结构进行测试与表征,证实了上述结果。     

聚乙二醇修饰环氧树脂的制备工艺研究

通过甲苯二异氰酸酯(TDI)将亲水性分子聚乙二醇-600(PEG-600)接枝到双酚A型环氧树脂侧链上,从而获得一种不带电荷,应用范围广、贮存时间长的水性环氧树脂。     

重组人复合干扰素的定点诱变及PEG化修饰

目的将复合干扰素(consensus interferon,cIFN)76位点丙氨酸(Ala)突变为半胱氨酸(Cys),以期获得一种高效和可供聚乙二醇马来酰亚胺(PEG-MAL)定点修饰的IFN突变体分子。方法采用同源序列对比、空间结构模拟并结合IFNα与受体结合的特点设计突变位点。通过基因工程方法获得cIFN_(m76)工程菌,IPTG诱导表达,所得包涵体经变复性、DEAE阴离子及CM阳离子两步交换层析纯化后,采用SDS-PAGE和高效液相色谱法(HPLC)检测cIFN_(m76)的纯度;细胞病变抑制法检测其体外抗病毒活性;REFLEX~(TM)Ⅲ基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOFMS)测定其相对分子质量;SDS-PAGE分析cIFN_(m76)与PEG-MAL的交联反应;并进行N-末端、C-末端序列测定及紫外光谱扫描。结果 cIFN_(m76)以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯度大于95%,比活性约为1.08×10~8IU/mg,N-末端、C-末端氨基酸序列与理论一致,相对分子质量经MALDI-TOF-MS测定为19 500,紫外特征吸收波长为280 nm,与PEG-MAL成功交联。结论成功获得一种高效和可供PEG-MAL定点修饰的cIFN_(m76),解决了现有PEG定点修饰技术存在的问题。