罗非鱼鱼皮抗氧化肽的制备及分离纯化

以罗非鱼鱼皮为原料制备鱼皮胶原蛋白,利用正交试验确定碱性蛋白酶和中性蛋白酶的最适水解条件,并进一步确定双酶复合水解最佳条件.结果表明,中性蛋白酶和碱性蛋白酶连续水解方式制备的胶原蛋白水解液具有最高的水解度和羟自由基清除能力.将该水解液依次通过Sephadex G-25凝胶色谱柱、SP Sephadex C-25阳离子交换色谱柱、Sephadex G-15凝胶色谱柱和反向高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离纯化,得到了一种氨基酸序列为Glu-Gly-Leu的抗氧化肽,其分子量为317.33 Da,该肽对羟自由基清除能力的IC50值为4.61μg/mL.本文为罗非鱼鱼皮胶原蛋白制备抗氧化肽提供了科学依据.     

碱性蛋白酶酶解鸡蛋清抗氧化肽的分离纯化

用碱性蛋白酶水解蛋清制备酶解液,通过超滤、离子交换、凝胶层析等手段对鸡蛋清酶解液抗氧化肽进行分离纯化并用薄层层析检验其纯度。研究表明,鸡蛋清酶解液经超滤除去杂蛋白,经DEAE-52离子层析分离出5个组分,其中组分2的抗氧化活性最强,超氧阴离子半抑制(IC50)质量浓度为13.32mg/mL,纯化倍数为2.51,蛋白回收率为25.04%。组分2经Sephadex G-25葡聚糖凝胶进一步分离得3个组分,其中组分3超氧阴离子的清除活性最强,其IC50为5.63mg/mL,纯化倍数达到5.93,蛋白回收率为13.42%,经薄层层析检测为单点,说明蛋清抗氧化肽得到纯化。     

牡蛎糖原的提取、纯化及补体活性研究

采用酶解结合醇沉法从新鲜牡蛎中提取制备牡蛎糖原(oyster glycogen,OG),经阴离子交换柱DEAE-52、葡聚糖凝胶柱Sephadex G-100分离纯化,得到纯度较高的牡蛎糖原组分OG11。其蛋白质量分数为0.33%,糖质量分数为97.77%。用气相色谱法对OG11进行单糖组成鉴定,结果表明其中只含有葡萄糖。补体实验表明,OG11对补体具有较强的抑制活性,在5.0mg/mL时补体抑制率可达到77.38%。     

Bacillus natto蛋白酶水解玉米醇溶蛋白抗氧化活性研究

Bacillus natto菌固体发酵产蛋白酶,利用该酶水解玉米蛋白粉,水解产物经Sephadex G-25分离纯化,并采用邻苯三酚自氧化法对其水解物和分离后各组分进行体外抗氧化活性研究。结果表明,水解产物对邻苯三酚的抑制率为79.96%,经分离后的组分3和组分4的抑制率为83.7%和92.2%。     

麦冬多糖的分离纯化及其组分的初步分析

采用高温水提取低温乙醇沉淀的方法得到麦冬粗多糖,使用葡聚糖凝胶柱Sephadex G-100对已提取的麦冬粗多糖进行分离纯化。将纯化所得的麦冬多糖完全水解,分别以木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖等单糖色谱纯为标准品,采用薄层层析法和高效液相色谱法对上述全水解产物进行比对分析。TLC和HPLC定性分析发现麦冬多糖中单糖组成主要是果糖和葡萄糖,以果糖和葡萄糖的质量浓度与HPLC峰面积的线性关系定量分析出其组分的含量。结果表明,浙江慈溪产麦冬中多糖的糖单元基本组成是果糖和葡萄糖,并确定了其摩尔比为12∶1。     

麦冬多糖的分离纯化及其组分的初步分析

采用高温水提取低温乙醇沉淀的方法得到麦冬粗多糖,使用葡聚糖凝胶柱Sephadex G-100对已提取的麦冬粗多糖进行分离纯化。将纯化所得的麦冬多糖完全水解,分别以木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖等单糖色谱纯为标准品,采用薄层层析法和高效液相色谱法对上述全水解产物进行比对分析。TLC和HPLC定性分析发现麦冬多糖中单糖组成主要是果糖和葡萄糖,以果糖和葡萄糖的质量浓度与HPLC峰面积的线性关系定量分析出其组分的含量。结果表明,浙江慈溪产麦冬中多糖的糖单元基本组成是果糖和葡萄糖,并确定了其摩尔比为12∶1。     

Bacillus natto蛋白酶水解玉米醇溶蛋白抗氧化活性研究

Bacillus natto菌固体发酵产蛋白酶,利用该酶水解玉米蛋白粉,水解产物经Sephadex G-25分离纯化,并采用邻苯三酚自氧化法对其水解物和分离后各组分进行体外抗氧化活性研究。结果表明,水解产物对邻苯三酚的抑制率为79．96％,经分离后的组分3和组分4的抑制率为83．7％和92．2％。     

南瓜活性多糖的降糖作用及其组成分析

为研究南瓜多糖对正常及糖尿病模型小鼠血糖的影响，本实验采用新的分离工艺从南瓜粉中提取得到南瓜粗多糖（PP），用DEAE分级获得3个组分，收集的主导组分过Sephadex G-100柱，获得2个组分。收集有活性的组分（AP），经Sephadex G-200柱，证实为单一峰。以葡萄糖为标准，苯酚-硫酸法测得总糖质量分数为80.6%；气相色谱分析其单糖组成为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖及鼠李糖。     

高效液相色谱柱的稀匀浆填充方法

介绍一种改进的高效液相色谱柱的装填方法--稀匀浆装填方法.该方法使用无毒、低粘度的稀匀浆溶液和较长的合适结构的匀浆罐.在高于70 MPa的压力和50ml/min匀浆输送流量下,装填5μm ODS 填料的反相色谱柱和 SiO2硅胶的正相色谱柱都获得良好的结果.柱效可达到60 000/m以上;峰对称性好,SI=1～1.25;寿命长,经过500次进样柱效和峰对称性无明显变化.     

蛋清源ACE抑制肽结构鉴定及其稳定性

利用碱性蛋白酶酶解蛋清制备活性肽,采用交联葡聚糖凝胶色谱初步纯化具有血管紧张素转化酶抑制活性的组分,高活性组分通过液相色谱-四极杆线性离子阱串联质谱(LC-QTRAP)对纯化组分进行结构鉴定得到19个活性肽。分别对其中3个活性肽DHPFLF、HAEIN和QIGLF进行化学合成及活性测定,其中QIGLF的ACE抑制活性较高,IC50为75.00μM,对胃蛋白酶和胰蛋白酶具有较强的抗酶解能力。     

Production and characterization of alkaline extracellular lipase from newly isolated strain Aspergillus awamori HB-03

A strain HB-03 to produce alkaline extracellular lipase was isolated from oil-rich soil samples and identified as Aspergillus awamori.The growth conditions and nutritional factors for lipase production by strain HB-03 were optimized,and the maximum lipase production of (45.9±2.3) U/mL was obtained at 30 °C and pH 7.0 after 36 h using olive oil (1%) and sucrose (0.5%) as carbon sources and combination of peptone (2%),yeast extract (0.5%) and ammonium sulfate (0.1%) as nitrogen sources.The lipase was purified...     

新型抗真菌抗生素分离与纯化

对1株不吸水链霉菌(Streptomyces ahygroscopicus ZJUIB001)产生的新型抗真菌抗生素进行分离纯化研究.通过发酵液经离心去沉淀后,采用氯仿和石油醚萃取.萃取后的水相调节至pH=2并采用Dowex 50 × 16阳离子交换树脂和XAD7HP大孔吸附树脂分离其中的抗真菌代谢物,对分离样品进行反相高效液相色谱分析.Dowex 50×16层析条件优化如下：pH=2的萃取浓缩液以2倍床层体积/h的流速上柱,在去离子水冲洗后,用0.6 mol/L氨水以1倍床层体积/h流速洗脱;Amberlite XAD7HP大孔吸附树脂层析条件为：体积分数为10%和70%的乙醇水溶液阶跃洗脱.将纯化得到的样品用高效液相色谱(HPLC)系统检测,色谱柱为YMC-C₁₈ (5 μm, Φ4.6 mm × 250 mm)氰基柱,流动相为0.01 mol/L的乙酸铵缓冲液(pH=4.3),流速为1 mL/min,检测波长为220 nm. HPLC检测结果显示,分离的抗生素纯度和效价分别达到93.0%和21 632 U/mg．     

Separation and purification of proteinases from Gastric Mucosa of Northern Sheatfish,Silurus soldatovi

The separation and purification method for pepsin of Northern Sheatfish (Silurus soldatovi) was established by using the combination technology of salting-out,gel chromatography and gel electrophoresis,and the enzymic properties were also analyzed.The experimental results indicated that 28% and 56% (NH4)2SO4 saturation could separate the activated protease from the pepsin extract of gastric mucosa of Sheatfish (Silurus soldatovi) ;compared with the homogenate extraction,the pepsin specific activity of purified extraction by Sephadex G-75 gel chromatography system increased 598 fold,was 5 times higher than that of activated liquid,and the total production rate was 10.1%.The purified pepsin liquor at the conditions of pH3.3 0.01 M alanine-formic acid buffering solution,60 cm chromatography column,and the flowing rate of 0.8 ML/min was analyzed by SDS-PAGE,which indicated that there were two bands and the molecular weight was 34.0 kDa and 40.4 kDa,respectively.There were two peaks in the enzyme activity determination of the separated collecting liquor in gel chromatography,and the SDS-PAGE showed the concentrations of the two proteins was different,which indicated that it existed at least two pepsins in the gastric mucosa of Sheatfish (Silurus soldatovi).     

米曲霉HDF-7蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

对米曲霉 HDF-7 所产蛋白酶进行分离纯化,经硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析得到电泳纯的蛋白酶,经SDS-PAGE 电泳测定其相对分子质量约为30 KDa.该酶的最适反应温度为50℃,最适作用pH值为7.0,该酶在20℃时具有良好的热稳定性,在pH6.0～8.0的条件下酶是相对稳定的,Mn2+对该蛋白酶有明显的激活作用,Cu2+对该蛋白酶有强烈的抑制作用,Km值为78μg/mL,最大反应速度V max为6.29μg/min.     

Alcalase酶解蛋清粉制备抗凝血肽的工艺优化

采用Alcalase碱性蛋白酶酶解蛋清粉制备食源性抗凝血肽。结果表明:底物浓度过大会抑制水解度的增长,底物质量分数为1%时蛋白质完全水解后的产物抗凝血活性最佳;高温和低温均对水解度有影响,低温酶解产物的抗凝血活性较好;pH值对水解度的影响与Al-calase的最适pH值有关;pH值为7时,抗凝血活性最好;酶/底物浓度增大,但底物不变的情况下,对水解度的提高不明显,酶/底物浓度过大,导致抗凝血活性降低。考虑交互作用经试验优化设计确定的酶解最佳工艺参数为:底物质量分数为1%,酶解温度为50℃,酶/底物质量分数为5%,酶解pH为8。在该条件下水解2h,凝血抑制率达到68.92%。     

产纤维素酶黑曲霉LN0401液体发酵条件的分析

利用黑曲霉LN0401菌株液体发酵生产纤维素酶。分别考察培养基碳源、培养基氮源、培养时间、培养温度、培养起始pH及孢子悬液接种的体积分数等因素对菌株产纤维素酶性能的影响。确定了黑曲霉LN0401产纤维素酶的最优条件。即以质量分数为5%的稻草粉作为培养基碳源;质量分数为1%的蛋白胨作为培养基氮源;培养时间为3 d;培养温度为30℃;培养起始pH为6.0;孢子悬液接种的体积分数为6%~8%接入装有100 mL液体发酵培养基的250 mL三角瓶内,150 r/min振荡培养。此条件下黑曲霉LN0401的CMC酶活为195.6~198.5 U/mL,FPA酶活为27.7~30.4 U/mL。     

大肠杆菌表达的重组新蛭素的生产工艺

为建立可产业化的大肠杆菌表达的重组新蛭素(neorudin,EH)生产工艺,主要采取从低密度到高密度发酵的优化思路,优化了发酵罐培养基和诱导时间;比较了超声破碎和反复冻融的目的蛋白提取方法;纯化工艺采用离子交换层析2步法进行:SP Sepharose Fast Flow阳离子交换层析和Source 15Q阴离子交换层析;所得产品用免疫印迹法鉴定,经HPLC检测纯度,凝块法检测抗凝比活性;最后对纯化产品进行结构确证,包括高分辨率质谱、C-末端测序、N-末端测序、二硫键分析.结果显示:优化后的发酵工艺确定基于TB培养基的高密度发酵工艺,菌体OD₆₀₀可达40左右,每升菌体湿质量可达70 g左右,目的蛋白表达量约400 mg/L;菌体反复冻融离心上清经过纯化获得的目的蛋白HPLC纯度均大于97%,纯化收率为26.12%,抗凝比活性为1 024 ATU/mg,用高分辨率质谱检测其分子质量约为7 415.188 0 ku,N-末端、C-末端和二硫键均与理论相符.建立了EH在大肠杆菌中的高密度发酵和纯化工艺.     

尿激酶精制新工艺

报道了一种尿激酶精制新工艺。尿激酶粗品经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０凝胶过滤、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０离子交换层析柱精制,再用硫酸铵沉淀,沉淀物溶解后经 Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－３０凝胶柱分离出高分子尿激酶和低分子尿激酶。酶活力总收率为６０％,纯化倍数为５０倍以上。