瑞士乳杆菌细胞壁蛋白酶提取研究

瑞士乳杆菌细胞壁蛋白酶是其蛋白水解系统中一个非常重要的蛋白酶。本实验采用螯合Ca2+的方法对瑞士乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取进行了研究,并确定了细胞壁蛋白酶提取的最佳实验条件。菌体用含有30mmol/LCaCl2的50mmol/LTris-HCl(pH7.10)缓冲液洗涤三次,然后用含有45mmol/LEDTA-Na2的50mmol/LTris-HCl(pH6.50)缓冲液悬浮,43℃保温,蛋白酶就会释放出来,90min后取出离心(4500r/min,20min,4℃),上清液即为粗酶液。粗酶液再经DEAE Sepharose CL-6B纯化,比酶活力提高了1.8倍。     

干酪乳杆菌蛋白酶的性质研究

干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei,Lc）6033经增菌培养、超声波破碎、高速冷冻离心后获得粗酶液,并经70%～80%饱和度范围的硫酸铵分级沉淀初步提纯,酶活力回收率（OD275）为9.71%,酶液最适pH为6.5左右、最适温度为40℃,Co2+、Mn2+能显著增强酶液活力;Cu2+、Fe3+、乙二胺四乙酸（EDTA）和苯甲基磺酰氟（PMSF）对酶液有较强的抑制作用;而Zn2+、碘乙酸和β-巯基乙醇的抑制作用较轻微。可见,酶液中可能含金属酶、丝氨酸酶及巯基酶等多种蛋白酶。      

干酪乳杆菌蛋白酶的性质研究

干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei,Lc)6033经增菌培养、超声波破碎、高速冷冻离心后获得粗酶液,并经70%～80%饱和度范围的硫酸铵分级沉淀初步提纯,酶活力回收率(OD275)为9.71%,酶液最适pH为6.5左右、最适温度为40℃,Co2 、Mn2 能显著增强酶液活力;Cu2 、Fe3 、乙二胺四乙酸(EDTA)和苯甲基磺酰氟(PMSF)对酶液有较强的抑制作用;而Zn2 、碘乙酸和β-巯基乙醇的抑制作用较轻微。可见,酶液中可能含金属酶、丝氨酸酶及巯基酶等多种蛋白酶。     

锡盟某旗乳及乳制品中乳杆菌生物学特性的研究

本实验从锡盟某旗牧民家庭中采集到３１个乳及乳制品样品，进行乳酸菌的分离和生物学特性的研究。从乳样中分离到８株同型发酵的乳杆菌属的细胞，这些细菌均能发酵核糖、葡萄糖、甘露糖，果糖半乳糖蔗糖、麦牙糖纤维素糖乳糖、海藻糖、甘露糖醇、山梨醇、水杨苷、苦杏仁苷等多种糖类。     

发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

研究分离纯化发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶(cell envelope proteinase,CEP)的方法及其酶学性质。用50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.8)悬浮菌体,进行超声波破碎,细胞质量浓度为0.06g/mL,破碎功率330W,工作220次(工作时间3s,间隔时间5s),离心取上清液即为粗酶液。60%硫酸铵沉淀,Sephacryl S-300 HR凝胶层析,Native-PAGE割胶回收纯化发酵乳杆菌的CEP。用纯化的CEP 酶解脱脂乳,酶解液ACE(angiotensin I-converting enzyme)抑制率为50%。SDS-PAGE检测CEP分子质量为32.5kD,最适酶反应温度为41℃,最适酶反应pH值为8.0。Mg2+、Co2+、Ca2+对CEP活性有激活作用;Zn2+、Ni2+、PMSF、EDTA对CEP活性有抑制作用,说明CEP为丝氨酸蛋白酶且酶的活性中心结构的维持与金属离子有关。     

发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取

确定提取发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的最佳方法和最佳提取条件。在单因素试验的基础上,采用多指标正交试验设计和综合平衡分析法研究溶菌酶结合非离子表面活性剂法提取发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的裂解液成分和提取条件。结果表明：裂解液的成分为50mmol/L Tris-HCl、150mmol/L NaCl、体积分数3% 吐温-20、2mg/mL 溶菌酶、pH8.9;提取条件为裂解液与菌体的比例10:1(V/m)、保温时间5h、保温温度37℃时酶比活力达38.957U/mg,此时可最大效率的获得发酵乳杆菌的细胞壁蛋白酶。     

牛乳中乳过氧化物酶体系及其利用

叙述了乳过氧化物酶体系（ＬＰ－体系）作为牛乳一种主要抗菌体系,并介绍了它的有效利用,延长牛乳的保存期。     

干酪乳杆菌6033蛋白酶降解肌肉蛋白质的作用研究

本试验将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei，Lc)6033蛋白酶液按5％的比例分别加入肌浆蛋白和肌原纤维蛋白提取液，然后设定不同的pH值，于15℃培养7d，定时取样，测定反应后的pH值、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白质的变化。结果发现：不同设定的肌浆蛋白和肌原纤维蛋白试验组在反应初期pH值均稍稍降低，随着反应进程，各试验组的pH值呈现出逐步升高的趋势；其中，肌浆蛋白以pH5．0、4．5组的变化较为明显，肌原纤维蛋白则以pH6．0、5．0、4．5组的变化较为明显。经7d振荡培养后，电泳检测发现，各试验组肌浆蛋白均表现出分解现象，尤其以pH5．0组和pH4．5组更为明显；而肌原纤维蛋白也都表现出了明显的分解现象，尤以pH5．0组肌原纤维蛋白分解最明显。     

壳聚糖固定瑞士乳杆菌蛋白酶的条件研究

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,采用交联-吸附法对瑞士乳杆菌蛋白酶的固定化条件进行研究。在单因素试验基础上,以固定化酶活力为主要指标,研究凝结液、壳聚糖质量浓度、酶用量、交联时间、戊二醛质量浓度对瑞士乳杆菌蛋白酶固定化的影响。运用响应面对固定化条件进行优化,确定瑞士乳杆菌蛋白酶的最优固定条件：凝结液为4g/100mL NaOH-甲醇(体积比3:1)、壳聚糖质量浓度2.89g/100mL、酶用量2.95mg、交联时间1h、戊二醛质量浓度0.40g/100mL,此时固定化酶活力为28.67U。     

瑞士乳杆菌发酵牛乳产生抗ACE活性条件的优化

本实验探讨了发酵条件对瑞士乳杆菌发酵牛乳产生抗ACE活性的影响。在单因素试验的基础上,进行正交试验,得出能产生较高抗ACE活性的最佳工艺条件是:发酵温度为37℃,发酵时间为12h,无脂乳固形物浓度12%(W/V)。     

脂肪酶水解乳脂制备天然奶味香基的研究

选取了5种微生物来源的脂肪酶对乳脂进行酶解。结合香气评定,筛选出了对乳脂中短链脂肪酸特异性最强、水解物香气评分最高的lipase MER为实验用酶。研究了lipase MER水解乳脂的工艺条件,得出其水解乳脂适宜温度为40℃、pH值为6.5,底物浓度为50%。经焙烤评定lipase MER水解乳脂制得的水解物奶香柔和、自然。可作为调配天然奶味香精的香基。     

嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取优化

为了获得较高酶活力的嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶(CEP),对嗜酸乳杆菌CEP的提取方法进行优化。经过比较超声波破碎法、Ca2+-free法、溶菌酶裂解3种方法,确认溶菌酶裂解法结合使用非离子清洁剂破壁是提取嗜酸乳杆菌CEP的最佳方法。在单因素试验的基础上,采用正交试验对嗜酸乳杆菌CEP的提取工艺进行优化,得出嗜酸乳杆菌CEP的最佳提取方法：用裂解液(50mmol/L Tris-HCl、100mmol/L NaCl、TritonX-100添加量1%、1.5mg/mL溶菌酶,pH 7.8)悬浮菌体(20mL/g),37℃保温3h,4℃、4500r/min离心20min,取上清液。溶菌酶裂解法提取CEP过程中各因素对CEP提取效果的影响依次为：溶菌酶质量浓度＞裂解pH值＞TirtonX-100添加量＞保温时间。     

复合防腐剂对鲜奶品质变化的影响

研究在4℃冷藏条件下鲜奶品质的变化以及通过添加乳酸链球菌素、壳聚糖、抗坏血酸3 种复合天然防腐剂对鲜奶品质的影响,实验结果表明：与新鲜牛乳相比,空白组在4℃保存3d 后,菌落总数和新鲜度明显变化,添加复合防腐剂的实验组与空白组相比保鲜效果明显,在鲜乳中添加200mg/kg Nisin、0.15% 壳聚糖、0.2g/kg 抗坏血酸保藏效果最佳。可见乳酸链球菌素、壳聚糖、抗坏血酸的共同使用对抑制乳中细菌的生长繁殖和防腐保鲜具有重要的作用。     

山东省鲜乳卫生质量调查分析

目的 调查分析山东省5家鲜乳生产厂产品的卫生质量。方法按国家标准《乳与乳制品卫生标准的分析方法》检测鲜乳质量。结果5种鲜乳的感官、物理和化学性状正常，酒精检验阴性，无掺假、防腐剂和抗生素，无牛布鲁菌病，无乳房炎乳。结论乳品质量指标符合国家卫生标准，可放心饮用。     

鲜乳超声波除菌技术研究

研究了不同功率、时间的超声波处理鲜乳后的杀菌效果。结果表明,经600W,3min超声波处理的原料乳,杀菌率达93%。并研究了超声波结合巴氏杀菌技术对鲜乳处理后,4℃贮藏条件下牛乳品质变化情况。结果表明,经600W,3min超声波处理的原料乳结合63℃,30min的热处理后,乳品质保持最好,4℃贮藏条件下贮藏期达16d左右。     

山东省鲜乳卫生质量调查分析

目的调查分析山东省5家鲜乳生产厂产品的卫生质量。方法按国家标准《乳与乳制品卫生标准的分析方法》检测鲜乳质量。结果5种鲜乳的感官、物理和化学性状正常,酒精检验阴性,无掺假、防腐剂和抗生素,无牛布鲁菌病,无乳房炎乳。结论乳品质量指标符合国家卫生标准,可放心饮用。     

四川香肠中产蛋白酶和脂肪酶霉菌的分离与鉴定

从四川自然发酵香肠表面分离得到121株霉菌菌株,分属曲霉、青霉和毛霉,以蛋白酶、脂肪酶活性作为筛选指标,经初筛、复筛,得到一株产蛋白酶、脂肪酶活性强的菌株P2。经形态观察以及菌株的分子生物学鉴定,该菌株鉴定为产黄青霉。通过对该菌株进行毒理学实验,表明各实验组小白鼠行为体征、血液指标、生化指标以及脏器的颜色、形状、大小均与空白对照组之间无显著差异,可初步判定该菌株是安全无毒的。