孕妇IgG类红细胞血型不规则抗体对早期诊断Non-ABO-HDN的意义

目的探讨孕妇IgG类红细胞血型不规则抗体对早期诊断Non-ABO-HDN的意义。方法筛查4200份孕妇血清中红细胞血型不规则抗体,阳性者检测抗体特异性、免疫球蛋白类型及效价;对检测出IgG类不规则抗体者,分娩时取脐血(或新生儿血)检测血清(浆)游离抗体,并进行红细胞直接抗球蛋白试验和红细胞放散试验,以诊断其是否发生HDN。结果4200份孕妇血清中检出红细胞血型不规则抗体44份(阳性率为1.05%),其中20份孕妇血清的抗体为IgG类或IgG及IgM混合抗体,脐血(或新生儿血)检测结果,10名婴儿发生了Non-ABO-HDN,1名发生了宫内死胎。致病的抗体特异性分布为:抗-D2例、抗-c1例、抗-E2例、抗-cE1例、抗-M4例(其中1例并有抗-A)。结论孕妇体内IgG类的Rh血型系统的抗体及抗-M易引起non-ABO-HDN,检测孕妇IgG类红细胞血型不规则抗体对早期诊断Non-ABO-HDN、鉴别引发HDN的抗体型别、评估HDN的严重程度及制定治疗方案均具有重要意义。     

三种常用交叉配血方法检出IgG型抗体能力的比较

目的比较微柱凝胶法、抗人球蛋白法和凝聚胺法检出IgG型抗体的能力。方法选用IgG抗-D血清致敏O型RhD阳性红细胞悬液,以未致敏的O型RhD阳性红细胞悬液倍比稀释,用微柱凝胶法、抗人球蛋白法和凝聚胺法分别进行检测;用生理盐水分别将IgG抗-D血清和IgG抗-AB血清倍比稀释后分别加入O型RhD阳性红细胞和AB型红细胞,用上述3种方法分别进行检测。结果3种方法对致敏红细胞的最低检出效价为微柱凝胶法1∶8,抗人球蛋白法1∶32,凝聚胺法1∶32;对IgG抗-AB血清的最低检出效价为微柱凝胶法1∶16,凝聚胺法1∶32,抗人球蛋白法1∶64;对IgG抗-D血清的最低检出效价为微柱凝胶法1∶128,凝聚胺法1∶64,抗人球蛋白法1∶16。结论微柱凝胶法对致敏红细胞和IgG抗-AB血清的检出能力均低于抗人球蛋白法和凝聚胺法,对IgG抗-D血清的检出能力高于抗人球蛋白法和凝聚胺法。3种方法用于交叉配血均存在阳性漏检现象,选择合适的检测方法是保证输血安全的基础。     

微板红细胞层技术在筛查不规则抗体中的应用

目的分析用固相微板红细胞层技术筛查不规则抗体的可行性。方法采用固相微板技术,检测献血员标本、临床免疫标本、抗血清试剂及其稀释标本的红细胞抗体,同时以试管法间接抗人球蛋白试验(IAT)作平行对照。结果固相微板技术对抗血清稀释标本的检出效价明显高于IAT法。其对献血员标本和临床标本的检出率也优于IAT法。结论固相微板红细胞层技术灵敏度高,稳定性好,简单易行,适于血站和医院对不规则抗体筛查的普及。     

微柱凝胶法与试管抗人球蛋白法检测静注人免疫球蛋白中抗A、抗B血凝素滴度效果的比较

目的比较微柱凝胶法与试管抗人球蛋白法检测静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)中抗A、抗B血凝素滴度的效果。方法分别采用微柱凝胶法与试管抗人球蛋白法检测34批IVIG样品以及1批IVIG抗A、抗B血凝素最大效价国际标准品(07/310)中的抗A、抗B血凝素滴度,并分析两种方法检测结果的相关性、灵敏度和重复性。结果两种方法检测抗A、抗B血凝素滴度的结果均呈高度正相关性(r值分别为0.809 4和0.834 9,P均0.05);微柱凝胶法的灵敏度比试管抗人球蛋白法高约2个滴度;微柱凝胶法较试管抗人球蛋白法具有更好的重复性。结论微柱凝胶法与传统的试管抗人球蛋白法相比,具有高度相关性、更高的灵敏度和更好的重复性,可用于IVIG中抗A、抗B血凝素滴度的测定。     

抗-Ce引起的输血反应及其配血分析

目的 分析Rh血型系统中不规则抗体的临床意义。方法对1例带有抗-Ce联合抗体的患者,采用盐水法鉴定血型,并进行直接抗球蛋白试验,抗球蛋白法进行抗体鉴定和效价测定,吸收放散试验鉴定联合抗体,盐水法、抗球蛋白法和聚凝胺法进行配血。结果根据该例有抗-Ce联合抗体患者血清学抗体检测结果,为其找到了配合的血液,输注后无不良反应,治疗效果良好。结论对于经常需要输血的患者或还未生育的女性,在输血前除了做必要的抗体筛查和鉴定其相配合的血液外,建议作RhD以外的各因子的检测,做到Rh系统的配合性输注,避免此系统不规则抗体的产生,保证临床输血的安全。     

夫妻血型不合的孕妇和未孕妇血清中抗A(B)抗体检测

近几年来 ,我们对 182例夫妻血型不合的孕妇和未孕妇 ,根据不同情况分别用盐水试管法、菠萝酶法和间接Ｃｏｏｍｂｓ法测定血清中的抗Ａ(Ｂ)抗体 ,结果报道如下。1 夫妻血型不合系指夫→妻血型为Ａ→Ｏ、Ｂ→Ｏ、ＡＢ→Ｏ、Ｂ→Ａ、Ａ→Ｂ、ＡＢ→Ａ、ＡＢ→Ｂ者 ;孕妇和未孕妇均系有流产史者。2 检测结果孕妇血清中抗Ａ(Ｂ)效价平均为 1∶2 9,≥ 1∶6 4者占 44 .3 % ;未孕妇血清中抗Ａ(Ｂ)效价平均为 1∶32 ,≥ 1∶6 4者占 32 .1% ,经统计学处理差异无显著意义 (ｔ=1.314,Ｐ>0 .0 5 )。3 上述结果说明 ,抗Ａ(Ｂ)抗体不是因受孕而引起 ,而是…     

ABO血型反定型试剂质控方法和质量标准的建立

目的建立ABO血型反定型试剂的质控方法和质量标准。方法用抗P、抗M、抗N、抗C、抗c、抗E、抗e试剂检测O型血浆样本,选择分别与抗P、抗M、抗C、抗e试剂反应呈■强阳性样本,和与抗P、抗N、抗c、抗E试剂反应呈■强阳性样本各2份,配制ABO血型反定型用O型细胞。分别对两个厂家提供的和自制的ABO血型反定型用O型细胞进行抗原性检测,同时进行外观、特异性、ABH抗原性、亲和力、溶血率、稳定性检测,并检测35份含IgM类不规则抗体的阳性血浆样本,对比检出率。结果自制的ABO血型反定型用O型细胞与抗P、抗M、抗N、抗C、抗c、抗E、抗e试剂反应均呈■以上,而其他两个厂家提供的ABO血型反定型试剂均有部分抗体漏检;外观、特异性、ABH抗原性、亲和力、溶血率、稳定性检测均无明显差异,符合相关要求;自制的ABO血型反定型用O型细胞可检出所有IgM类不规则抗体,无漏检,而其他两个厂家提供的ABO血型反定型试剂均有部分血浆样本漏检。结论本研究建立的质控方法和质量标准适用于IgM类不规则抗体的检出。     

应用微柱凝胶法鉴定ABO及RH(D)血型

目的 应用微柱凝胶法全自动血型鉴定系统（以下简称微柱凝胶法）鉴定ABO及RH（D）血型。方法 选取100份正常献血者标本和100例住院患者标本，采用试管法和微柱凝胶法进行ABO和RH（D）血型鉴定，并选取14份已知ABO血型的亚型标本和10份弱D抗原的标本，采用两种方法进行比较。结果 在正常献血者和患者的ABO及RH（D）定型中，两种方法获得的结果均一致。采用单抗试剂，微柱凝胶法可检出14份亚型标中的9份；试管法可检出14份亚型中的10份。采用人血清抗体，微柱凝胶法可检出14份亚型中的6份；试管法可检出其中的7份。结论 在鉴定正常的ABO及RH（D）血型时，两种方法的结果差异无显著意义，微柱凝胶法可取代传统的试管法用于常规的ABO和RH（D）血型鉴定。     

ABO血型不合新生儿溶血样本抗体效价的检测分析

目的探讨新生儿溶血病与ABO血型抗体效价的关系。方法检测768例孕妇抗体效价。结果抗体效价异常比率为11.20%,随着抗体效价的升高,有异常生育史的比率从15.25%高达50.00%。结论抗体效价值越高,异常生育史所占的百分率亦增高,临床上应予于及时治疗。     

红细胞血型检测的新技术──凝胶试验

凝胶试验（geltest）是1986年由Lapperre发明，后经不断改进和大量临床应用的考验，已更加完善，目前已成为一些先进国家的常规血型检测技术。凝胶试验也称为微管凝胶试验（microcolumngeltest）。即在微管凝胶介质中，红细胞与相应抗体结合，经低速离心，凝集的红细胞悬浮于凝胶中，未与相应抗体结合的红细胞沉于管底。凝胶试验比传统的玻片和试管血凝试验更准确，更敏感，更简便。凝胶试验分中性股、特异性胶和抗一人球蛋白胶，分别用于血型血清学不同的试验。在中性胶试验中，凝胶不合抗体，可用于细胞筛选、抗体检测和ABO血型反定型；…     

1例Rh缺失型D--导致新生儿溶血病临床及家系的调查分析

目的分析1例受检产妇交叉配血不合及患儿新生儿溶血病(HDN)发生的原因,初步探讨产妇Rh缺失型D--形成的遗传背景。方法对产妇、其夫及患儿标本进行ABO及Rh血型鉴定,对产妇及患儿标本进行血型抗体检测,并对产妇家系作血型调查。结果产妇为Rh缺失型D--,产生IgG的多凝集抗体。结论产妇为Rh缺失型D--,产生IgG的多凝集抗体,是造成其交叉配血不合及患儿HDN发生的原因;产妇Rh缺失型D--形成,有一定遗传因素的影响。     

CpG ODN2006对乙型肝炎疫苗免疫BALB/c小鼠抗体产生的影响

目的探讨合成含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpGODN2006)对乙型肝炎疫苗增强小鼠特异性抗体产生的效应。方法采用BALB/c小鼠,经后腿胫骨前肌注免疫2次,ELISA法检测血清中抗HBsIgG效价。结果疫苗+CpG组较疫苗组和空白对照组的抗HBsIgG效价明显增高,且维持时间长。结论CpGODN2006对小鼠抗HBsIgG的产生具有明显的增强作用。     

大鼠血清中抗轮状病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立及验证

目的建立大鼠血清中抗轮状病毒(rotavirus,RV)IgG抗体的间接ELISA检测方法,并进行验证。方法以兔抗RV多抗血清作为包被抗体,RV作为检测抗原,建立抗RV IgG抗体间接ELISA检测方法。棋盘滴定法优化包被抗体浓度(1∶1000~1∶1024000)和血清浓度(1∶20~1∶2560),直接ELISA法优化生物素标记的羊抗大鼠IgG工作浓度(1∶1000~1∶128000稀释)。采用优化的间接ELISA法检测39份RV抗体阴性大鼠血清样品,样品A450均值加上3倍标准差作为该检测条件的阴阳性判定界值。同时对该方法的专属性、检测限、耐用性进行验证。分别采用建立的方法及荧光灶形成单位(fluorescent focus-forming unit,FFU)方法检测96份临床前安全性评价试验样品,评价二者的符合率。结果建立的间接ELISA法的最适反应条件为:包被抗体稀释倍数为1∶8000,血清稀释倍数为1∶80,生物素标记的羊抗大鼠IgG工作浓度为1∶4000,阴阳性判定界值为0.105。方法检测限为0.031,且具有良好的专属性及耐用性。建立的方法与FFU方法检测结果的符合率达95.8%。结论成功建立了抗RV IgG抗体的间接ELISA检测方法,且方法准确可靠,为临床前安全性评价试验提供了一种简便的血清学诊断方法。     

静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白的研制

目的研制高效价静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白。方法用甲型H1N1流感疫苗(简称甲流)对固定供血浆者按疫苗说明书免疫后2周开始采集原料血浆,采用血凝抑制法检测原料血浆和制品的甲流抗体效价;采用柱层析法从高效价甲流免疫血浆中提取富含IgM免疫球蛋白的样品,模拟低温乙醇蛋白分离法工艺从小量混合血浆分离IgG样品,测定血浆和提取样品的甲流抗体效价,分析甲流中和抗体效价与IgG、IgM含量的对应关系,判断甲流中和抗体的免疫球蛋白类型;按本公司静脉注射人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)生产工艺制备静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,并与普通IVIG及相应合并血浆的甲流抗体效价进行比较。结果筛选到甲流抗体效价≥320 HU/ml的合格血浆9 866袋,合格率达33.5%,其中抗体效价≥640 HU/ml的血浆占合格血浆的49%,血浆质量符合《中国药典》三部(2010版)"血液制品生产用人血浆规程"要求;甲流抗体效价与IgG含量呈相应比例关系,而与IgM含量无关,甲流中和抗体的免疫球蛋白类型以IgG为主;制备的甲流人免疫球蛋白制品的甲流中和抗体效价达2 560 HU/ml,为普通IVIG的197倍,其他质量指标符合《中国药典》三部(2010版)"静注人免疫球蛋白制检规程"要求。结论成功研制了静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,在甲流疫情得到有效控制的情况下,仍具有战略储备意义。     

1名Am亚型患者的血型血清学鉴定及输血策略

目的对Am亚型患者的血型进行血清学鉴定,并为其输血选择适合的血液成分。方法对1名ABO正反定型不相符患者,用抗-A、抗-A1、抗-B、抗-AB和抗-H单抗检测红细胞ABH抗原;A、B、O型红细胞与血浆反应检测ABO血型抗体及不规则抗体;吸收放散试验检测红细胞弱抗原;中和抑制试验检测唾液中ABH血型物质。根据患者血型血清学检测结果,选择相容血液成分进行输血。结果该患者符合Am亚型的血型血清学特征,输入O型少白细胞红细胞6U,A型单采血小板1治疗量后,均能达到预期疗效,无不良反应。输血后3个月的血型血清学检测结果与输血前完全一致。结论ABO血型鉴定时坚持正、反定型,可避免将Am亚型误定为O型,对Am亚型的准确鉴定有赖于多种血型血清学试验。Am亚型患者输血时可选择O型红细胞、A型血小板、A型或AB型血浆。     

微柱凝胶卡式法检测红细胞不规则抗体的效果

目的评价微柱凝胶卡式法(microtubes gel test,MGT)检测红细胞不规则抗体的效果。方法分别采用MGT和传统试管抗人球蛋白法(test tube Coombs test,TT-Coombs’T)对2011年9月～2012年12月在河北省大名县人民医院输血治疗的1 147例患者的血清样本进行不规则抗体筛查,并以TT-Coombs’T作为"金标准",对MGT进行敏感性、特异性评价;采用MGT对不规则抗体检测为阳性的样本进行进一步的抗体鉴定。结果 MGT及TT-Coombs’T测定1 147份样本不规则抗体的结果均为阳性的为10份,阴性为1 137份,阳性率为0.87%,MGT的敏感性和特异性均为100%;经MGT进一步鉴定,10份不规则抗体中Rh系统抗体9份(抗-E 5份,抗-c 2份,抗-D 1份,抗-C 1份),MNS系统抗体1份(抗-M)。结论微柱凝胶卡式法检测红细胞不规则抗体敏感性和特异性好,其操作较传统试管法简便、快捷,且操作和结果的判读易于标准化,影响因素少,更适用于临床输血前不规则抗体筛查试验。     

SV40灭活疫苗免疫恒河猴后的抗体反应

目的评价SV40灭活疫苗免疫恒河猴后的抗体反应。方法用SV40灭活疫苗经肌肉注射免疫0.5~1周岁的恒河猴,分别于第1次和第2次免疫后2周,检测血清中和抗体效价,免疫18个月后检测SV40基因组成分。结果免疫的12只恒河猴在第1次免疫后2周,血清抗体全部阳转,平均抗体滴度为1∶16,第2次免疫2周后血清抗体滴度明显增长,平均达到1∶64~1∶128。用PCR方法未检测到SV40基因组成分。结论SV40灭活疫苗可以有效诱导恒河猴产生特异性抗体反应。     

抗人A血型杂交瘤细胞高密度培养条件的研究

抗人 A 血型杂交瘤15B_4细胞在 CelliGen 细胞培养罐中进行连续灌注培养,细胞密度达1.6×10~7/ml。每天灌注新培养液量由1000ml 增到2300ml,第14天后又逐日减少至1000ml,死细胞数随着转速的增加和灌注量的减少而增多。血凝效价呈梯度上升,滴度达到2~(14),相当于腹水效价。培养6天 IgM 产量为0.2克/升/天,10～18天波动在1.45～1.8克/升/天。15B_4细胞代谢与葡萄糖、乳酸有关,与氨无关。CelliGen 自控效果较好,适用于杂交瘤细胞的高密度培养。搅拌速度在120～150r/min 对细胞产生的剪切力有明显地破坏作用。溶氧控制系统有待改进。     

磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒螺旋体

目的应用磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒特异性抗体和反应素。方法应用磁凝集法梅毒检测试剂(Tre-ponema pallidum magnetic particle agglutination,TPMPA)检测梅毒阳性血清,分析梅毒阳性血清符合率、梅毒血清抗体滴度、假阳性检出率及交叉反应。结果用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测26份梅毒阳性血清样品,结果均为阳性,与省血液中心和省疾控中心的检测结果的符合率为100%;应用TPMPA-B试剂检测梅毒抗体滴度结果均较用梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂(TRUST)检测结果高2个滴度;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测正常血清,结果均为阴性,与省血液中心检测结果相符;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测5份风湿病患者血清和13份慢性肝病患者血清,均未出现交叉反应。结论磁凝集法梅毒检测试剂具有良好的特异性和敏感性,操作简便、省时,可初步用于检测梅毒特异性抗体和反应素。