英国红芸豆蛋白抗氧化肽酶解工艺的研究

以英国红芸豆为原料,研究芸豆蛋白质抗氧化活性肽的酶解工艺。首先以水解度和总抗氧化能力为评价指标进行酶的筛选,并采用单因素及正交实验设计优化酶解工艺。结果表明,碱性蛋白酶对芸豆蛋白水解能力最强,酶解产物的抗氧化能力最高;最佳酶解条件为底物浓度5.0%,温度55℃,加酶量4000 u/m L,p H10,时间2 h,该条件下总抗氧化能力高达186.97 U/mg pro,英国红芸豆活性肽显示出较强的抗氧化活性。     

松仁肽的制备及抗氧化活性研究

以松子分离蛋白为原料,水解度为评价指标,通过单因素和响应面法优化松仁肽的酶解工艺,并以羟自由基清除能力和DPPH清除率评价松仁肽的抗氧化活性。试验结果表明,松仁肽制备的最佳工艺条件为酶解温度52℃、底物浓度3.2%,pH 9.1,酶解时间3 h、加酶量9 000 U/g。在此酶解条件下,水解度可达0.329 7。制备的松仁肽在浓度24 mg/mL时能清除全部羟自由基;在10 mg/mL时对DPPH的清除率达到75%。此时的松仁肽表现出一定的抗氧化活性。     

Alcalase蛋白酶水解花椒籽蛋白制备抗氧化肽的条件优化

本研究以花椒籽蛋白质抗氧化肽水解度(DH)和DPPH自由基清除率为指标,对酶解花椒籽蛋白制备抗氧化肽的水解用酶及其酶用量、底物浓度、酶解温度、时间等酶解条件进行研究,以期优化得到酶解法制备花椒籽抗氧化肽的最优条件。结果表明Alcalase蛋白酶水解花椒籽蛋白制备抗氧化肽效果最好,通过响应面分析法优化出该酶最佳酶解花椒籽制备抗氧化肽的条件为:底物浓度5%,温度55℃,pH 8.5,加酶量4%;该方法可用于花椒籽蛋白制备抗氧化肽,在此条件下花椒籽水解液DPPH自由基清除率可达到61.00%,水解度为12.00%。     

响应曲面法优化鸭肫酶解制备抗氧化肽工艺

在单因素实验基础上应用响应面法对鸭肫抗氧化肽制备工艺进行优化。在前期筛选酶解鸭肫的最佳蛋白实验中得到木瓜蛋白酶为酶解鸭肫蛋白的最佳作用酶,优化的鸭肫抗氧化肽最佳工艺条件为:酶解时间4.0 h、加酶量0.5%、酶解温度55℃、料液比1∶3 g/m L。在此条件下,酶解鸭肫蛋白的水解度可达28.30%,DPPH·清除率为75.10%。结果表明该鸭肫抗氧化肽工艺制备可行,鸭肫蛋白水解度与DPPH自由基清除能力之间不存在相关性。     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

响应面法优化黄芪蛋白水解工艺及其抗氧化活性研究

目的 优化黄芪蛋白水解液工艺条件,并考察其体外抗氧化活性。方法 采用响应面分析法,在单因素试验的基础上,选择温度、pH值、酶用量、酶解时间为影响因素,以DPPH 自由基清除率为指标,采用中心组合Box-Benhnken法建立数学模型,进行响应面分析。结果 黄芪水解蛋白的最佳酶解条件为酶解温度50℃、pH 3、酶用量800U/g、酶解时间8h,该条件下水解度为52.96%,DPPH清除率为80.64%,O·－2清除率为98.93%,·OH清除率为74.83%,还原能力为2.3。结论 响应面法Box-Benhnken设计可应用于黄芪蛋白水解工艺的优化和分析,且工艺稳定可靠,得到的水解蛋白具有较强的抗氧化活性。     

鲍鱼内脏蛋白的提取及水解肽的抗氧化活性研究

以鲍鱼加工下脚料鲍鱼脏器为原料,探讨脏器蛋白的提取工艺及蛋白水解肽的抗氧化效果。以鲍鱼内脏蛋白提取率为指标,通过响应面法优化提取工艺;对蛋白进行酶解,以水解度和抗氧化能力为指标筛选抗氧化效果最好的工具酶,酶解得到具有较强抗氧化能力的肽段,进一步对抗氧化肽进行性质测定。结果表明,得到最优工艺:碱浓度为1.5%,超声波时间为14.5 min,提取时间35.5 min,提取温度81.5 ℃,该工艺条件下鲍鱼脏器蛋白提取率高达81.01%±0.43%;筛选得到木瓜蛋白酶为最适工具酶并对制备的蛋白进行酶解;水解肽分离纯化得到最强抗氧化能力肽段P1的羟基自由基清除率、DPPH自由基清除率及还原力分别为79.25%±1.12%、(90.45%±0.46%、0.598±0.05。综上,鲍鱼脏器水解肽具有较强抗氧化能力,可用于制备天然抗氧化剂。     

响应面法优化坛紫菜抗氧化肽酶法制备工艺

以坛紫菜为原料,通过酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和纤维素酶酶解制备活性肽,以DPPH自由基清除率和多肽得率为评价指标,研究坛紫菜水解肽的抗氧化能力。结果表明:5种酶的酶解产物都具有抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物DPPH自由基清除率最高,选择它为最佳工具酶。通过单因素和响应面试验优化酶解工艺,得到最佳酶解工艺:酶解时间3.6 h、酶解温度47℃、酶用量16362 U/g、底物浓度3.0%、pH7.0。此条件下制备得到的水解肽具有较强抗氧化能力,DPPH自由基清除率可达(91.83±0.81)%。     

多指标优化珠蚌抗氧化肽制备工艺

采用取珠后珠蚌肉为原料,选用木瓜蛋白酶进行水解。以DPPH自由基清除率、.OH清除率及蛋白水解度作为评价指标,研究珠蚌抗氧化活性肽的制备工艺。在单因素基础上,通过三个指标的综合考虑,设计L18(37)多指标正交试验,对制备工艺进行优化,得出最佳工艺条件。结果表明,最佳条件为:酶解温度60℃、酶解时间5h、料液比3:10(w/v)、酶解pH6.5、加酶量6000U/g,制得的多肽DPPH自由基清除率85.5%,.OH清除率50.7%,水解度23.09%;此时,DPPH自由基清除率EC50为0.4mg/mL,.OH清除率EC50为0.7mg/mL。     

三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。     

蛋白酶水解鸡枞菌制备酶解液工艺优化及抗氧化活性

以鸡枞菌为原料,以DPPH·、ABTS^+·、O2^-·清除率及水解度为指标,采用蛋白酶对鸡枞菌进行水解,制备酶解液。以碱性蛋白酶为水解酶,以DPPH·清除率和水解度为参考值,采用单因素和正交试验分析法研究料液比、加酶量、pH、温度、时间对酶解效果的影响。结果表明:应用碱性蛋白酶制备的鸡枞菌酶解液抗氧化效果最佳,酶解条件为料液比1∶25(g/mL),加酶量3500 U/g,pH 7,酶解温度45℃,酶解时间2.5 h。此条件下所得酶解液的DPPH·清除率为73.23%,水解度为44.6%,酶解液对DPPH·、ABTS^+·和O2^-·3种自由基均有清除作用,其IC50分别为0.25,0.39,1.09 mg/mL,但清除能力明显低于同浓度Vc的清除能力。     

核桃多肽体外抗氧化活性研究

以提取油脂后的核桃渣为原料分离出核桃蛋白,利用酸性、碱性、中性3种蛋白酶复合酶解核桃蛋白,制备水解度高的核桃多肽。通过测定核桃多肽的总还原能力、超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力、羟自由基(·OH)清除能力、二苯代苦味酰基自由基(DPPH)清除能力,研究核桃多肽的抗氧化活性大小。结果表明,3种酶协同对核桃蛋白进行水解,水解度可达到45.58%,核桃多肽有一定的体外抗氧化活性,其总还原能力、对羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除率与质量浓度呈量效关系。     

米糟蛋白酶解制备生物肽及其抗氧化活性的研究

为了高值化利用米糟资源,以米糟蛋白为原料通过酶解法生产一种高效、低毒的天然米糟抗氧化肽。实验结果表明:7种蛋白酶中,中性酶为最佳酶选,其最佳酶解条件为:米糟蛋白质量浓度(S)为10g/100mL,中性酶浓度(E/S,质量分数)为8%,pH为6.0,温度为60℃,时间为30min。在该最佳酶解条件下,米糟生物肽的得率为18.50%,水解度为2.84%,DPPH.(1,2-二苯代苦味肼基自由基)清除率为90.10%。该米糟生物肽具有较强的DPPH和羟自由基清除能力,其IC50值(抗氧化活性为50%时所对应的米糟生物肽质量浓度)分别为1.136、0.169g/L,还具有较强的还原能力和Fe2+螯合能力(IC50值为2.127g/L)。由此得出,米糟蛋白是一种很好的米糟抗氧化肽生产原料,且该生物肽是一种较为理想的天然抗氧化剂产品。     

响应面法优化秋刀鱼酶解制备抗氧化活性肽的工艺

采用酶解法从秋刀鱼肌肉中提取抗氧化活性肽,以水解度(DH)、TCA-可溶性肽含量、DPPH自由基清除率、Fe3+还原力、·OH清除率以及O2?·清除率为指标,从六种商业用酶中(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶)筛选出最适蛋白酶.以料液比、酶添加量、酶解时间、温度、pH五个因素进行单因...     

酶法水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽工艺的优化

以牦牛皮为原料,用碱性蛋白酶水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽。以水解度和牦牛皮蛋白水解物对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为评价指标,在单因素实验的基础上,结合响应面（Box-Behnken）试验设计筛选出牦牛皮抗氧化肽的最佳制备工艺。结果表明,最佳制备工艺为:水解温度51 ℃,酶用量10890 U/g,水解时间10.6 h,pH8.5,底物浓度5%,此时水解度为41.39%±0.69%,牦牛皮抗氧化肽清除DPPH·、ABTS+·、·OH的IC₅₀值分别为2.884、2.110、2.523 mg/mL。综上,该制备工艺下的牦牛皮抗氧化肽对自由基有良好的清除能力,且有较强的还原能力,说明牦牛皮抗氧化肽有望作为天然抗氧化剂得到开发利用。     

洋葱蛋白及多肽的制备及其体外抗氧化活性评价

对洋葱蛋白、4种不同水解度的粗洋葱多肽、4种分子量范围的纯化多肽组分的水解度、分子量、氨基酸组成、DPPH·清除能力进行了研究。结果表明,洋葱蛋白酶解后分子量大幅降低,必需氨基酸组分和支链氨基酸组分均有所提高,DPPH·清除能力大幅提高,且与水解度成正比;在4种水解度的粗洋葱多肽的纯化组分中,P-III(分子量为1~5kDa)的DPPH·清除能力均为最强,这归功于其合适的分子量分布。该研究为洋葱的高值化利用提供了理论依据。     

2种蛋白酶酶解曲拉干酪素条件优化及抗氧化性比较

以曲拉干酪素为原料、水解度为指标,在酶解时间、酶解温度、pH值、曲拉干酪素质量浓度、酶添加量单因素试验基础上,采用响应面试验对碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解工艺条件进行优化,并对2 种酶解液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除率,Fe2＋、Cu2＋螯合能力和还原力等抗氧化性指标进行比较。结果表明,碱性蛋白酶和胰蛋白酶分别在酶解时间3.8、2.5 h,酶解温度49.8、47.8 ℃,曲拉干酪素质量浓度60、35 g/L,pH 8.5、7.5,酶添加量140、2 900 U/g时水解度最大,为24.25%和13.57%。碱性蛋白酶解液超氧阴离子自由基清除率、Fe2＋螯合能力显著低于胰蛋白酶解液（P＜0.01）;羟自由基清除能力高于胰蛋白酶解液（P＞0.05）;2 种蛋白酶酶解液在酶解液质量浓度1～5 mg/mL时,Cu2＋螯合能力、DPPH自由基清除率和还原力随质量浓度均呈上升趋势,Cu2＋螯合能力低于Fe2＋螯合能力（P＞0.05）,DPPH自由基清除率和还原力二者差异显著（P＜0.01）。2 种蛋白酶对酶解物抗氧化性指标影响不同,碱性蛋白酶酶解物抗氧化性相对较优。     

复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化多肽

研究复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化活性多肽的最佳条件,并探究其体外抗氧化活性。以水解度为指标,在单因素实验的基础上,以pH、温度、底物浓度、酶用量为实验因素,通过L₉(34)正交实验设计筛选出制备绿豆多肽的最佳水解条件,使用DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基的清除能力评价其抗氧化活性。结果表明:复合酶协同水解绿豆蛋白的最适反应条件为pH8.5,温度56 ℃,底物浓度8%,酶用量4%,水解度可达到33.95%。所得绿豆抗氧化多肽对DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟自由基清除率分别为82.8%、76.82%和56.85%,具有较强的抗氧化活性,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

不同蛋白酶突变子对鲢鱼蛋白酶解及产物抗氧化性的影响

本实验采用芽孢杆菌丝氨酸蛋白酶及其突变产物对淡水鱼类白鲢鱼肉蛋白进行酶解,对比分析了酶的不同突变产物对水解过程水解度的影响及其酶解产物的抗氧化活性变化。大部分蛋白酶在水解反应前40 min内反应速率较高,水解度迅速增加,40min~120 min之间水解曲线变得平缓甚至下降。其中细菌丝氨酸蛋白酶突变子239对白鲢鱼肉蛋白的水解能力最强,其2 h水解产物水解度最大,为11.51%;突变蛋白酶33的水解能力最差,最终水解产物的水解度只有3.08%。细菌丝氨酸蛋白酶及其突变酶的酶解产物均具有较高的抗氧化性,其中蛋白酶突变子166的酶解产物抗氧化活性最强,经测定其DPPH清除能力为91.02%,蛋白酶突变子169的酶解产物抗氧化活性最弱,DPPH清除能力为61.41%。结果表明,与三联体催化活性中心相关的突变对丝氨酸蛋白酶的水解能力和水产品蛋白的水解度影响较大,而酶底物特异性方面的改变则影响酶解产物的抗氧化活性。     

酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。