2.5sNGF酶联免疫检测试剂盒的研制

用成年雄性小鼠颌下腺提纯的 2 5sNGF免疫家兔得到兔抗NGF抗体 ,研制出 2 5sNGFELISA试剂盒。经检测本试剂盒灵敏度达到 1ng ml,在 0 84～ 6 7ng ml范围内线性良好 (r >0 99)。对人、小鼠、大鼠血浆无非特异反应 ,在大鼠血浆中NGF样品回收率在 91%～ 10 7%之间 ,变异系数小于 10 % (n =4)。对NGF参比品进行 6次标定 ,平均值为 13 4± 1 13ng 支 ,板间CV为 8 43% (n =6 ) ,板内CV值均小于 6 % (n =4,3次 )。表明本试剂盒可用于小鼠 2 5sNGF制品的定量检测和药代动力学研究。     

多价鼠肝炎病毒抗体ELISA试剂盒的研制及应用

从6株鼠肝炎(MHV)病毒中筛选出A_(59),MHV_1及沪-79(Sh-79)3个毒株制成多价抗原的ELISA试剂盒。检测SPF和清洁级小鼠血清104份,又为0.037,SD为0.024,阳性临界值为0.207。经电镜检查,阻断抑制试验和IFA验证,证明本试剂盒特异性好。应用本试剂盒检测实验鼠群MHV抗体的敏感性单价抗原强。开放鼠MHV抗体阳性率为72％(161/223),Ⅱ级和Ⅲ级鼠为1.7％(2/117)。     

DTP—ELISA试剂盒的试制及应用

本文用 ELISA 法测定了普通人群和免疫前后人血清中白喉、破伤风及百日咳(DTP)抗体水平,并与经典的破伤风抗毒素小鼠中和试验(TNT)、白喉抗毒素家兔皮内中和试验(DNT)及百日咳细菌凝集试验(PA)进行了比较。同时试制出 DTP 血清抗体定性和定量检测药盒。结果表明,在人血清抗体测定中 ELISA 与 TNT、DNT 及 PA 的符合率分别为91.5%、97.9%和91.5%,三者间有良好一致性。20份免疫马血清破伤风抗毒素测定表明 ELISA 与 TNT 相关良好(r=0.84,P<0.01)。以国际上公认的免疫保护水平(TAT≥0.01IU/ml、DAT≥0.01IU/ml 和 PA≥1∶320)为标准,换算成 ELISAP/N 比值(≥2.1)作为试剂盒判断标准,测定了100份普通人群和81例 DTP 接种前后小儿血清,结果100份普通人群血清中含的抗白喉、破伤风及百日咳抗体者分别为28%、38%和45%;接种后小儿血清阳性率分别为88.9%、(白喉)、90.1%(破伤风)和81.5%(百日咳)。ELISA 法具有良好重复性和敏感性,简便经济,可作为临床和流行病学调查及菌苗效果监测的有效工具。     

检测疫苗中小牛血清残存量ELISA试剂盒的研制

目的　建立一种简便、灵敏、特异、准确的疫苗中小牛血清残存量检测方法。方法　采用ELISA双抗体“夹心法” ,即固相载体上包被特异性抗小牛血清抗体 ,加入待测样品 ,反应后再加入酶标记抗小牛血清抗体 ,经显色后测定。结果　固相载体最适包被抗体的量为 1μg/孔 ,反应体系的pH为6 .8～ 7.2 ,两步反应的最佳时间各为 1h ,最适温度为 37℃。检测的最适抗原 (小牛血清 )范围为 2 0～ 10 0ng/ml,该试剂盒的灵敏度为 3ng/ml ,变异系数CV(n =2 8孔 /次 )平均为 5 .7%。经检测 6批疫苗的结果与放免结果相符合。结论　该法特异性强 ,灵敏度高 ,为疫苗中小牛血清残存量的检测提供了一种新方法     

Vero细胞HCP试剂盒的稳定性观察

目的观察Vero细胞HCP试剂盒的稳定性。方法将Vero细胞HCP试剂盒分别于2～8℃和37℃放置不同时间,检测试剂盒的灵敏度、特异性、准确性及精密性。结果试剂盒在2～8℃放置10个月的特异性及灵敏度均较好;检测参考品的回收率在91.7%～114.8%之间;对不同制品检测结果的变异系数均小于10%。37℃放置7d,试剂盒的灵敏度仍可达12.5ng/ml;放置10d,检测参考品的回收率在85%～115%之间;对不同制品检测结果的变异系数均小于10%。结论Vero细胞HCP试剂盒于2～8℃放置10个月及37℃放置7d的稳定性较好,仍可正常使用。     

酶催化活性测定试剂盒研制的理论和实验探讨

重点讨论了酶催化活性测定试剂盒研制中需考虑的两方面的问题:单底物和双底物酶促反应最适底物浓度的理论计算.K_(?)的测定方法及底物选择中的其它注意事项,并以实验加以论证;酶偶联法试剂盒中工具酶最适用量的理论计算。讨论了影响工具酶用量的因素等。     

代谢物浓度酶法分析试剂盒的研制

代谢物浓度测定酶法试剂盒设计中必需考虑的五个问题:工具酶的特异性,酶对底物的亲合力,酶的用量,反应平衡和反应时间。并列表比较了动力学方法与终点法的优缺点。     

微孔板式亚硝酸盐试剂盒的研制

本文通过实验确定了微孔板式亚硝酸盐试剂盒中显色剂的混合比例(对氨基苯磺酸:盐酸萘乙二胺=1:1)及用量(0.06mL,相对于微孔板的体积).研制出一种利用微孔板快速检测多个样品中亚硝酸盐含量的新仪器,具有使用试剂量少,污染小,检出限低,灵敏度较高,操作简单,方便携带等优点,可用于火腿中亚硝酸盐的测定.     

破伤风抗体胶体金检测试剂盒的研制

目的 研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒。方法 应用胶体金免疫斑点法研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒,并对破伤风类毒素免疫的豚鼠及人血清的破伤风抗体水平进行测定。结果 该试剂盒所测定的结果与小鼠体内法的相关性好(r>0.95,P=0.25),远优于目前使用的间接血凝法(r<0.10);且该试剂盒的灵敏度较小鼠法高1倍,特异性强,无交叉反应,精密准确。结论 可用于临床检测患者创伤后的血清破伤风抗体水平。     

抗脊髓灰质炎病毒单克隆抗体试剂盒的研制及应用

本文从34株脊髓灰质炎病毒单克隆抗体中,挑选23株单克隆抗体(McAb)组成两套试剂盒:一套是具有各型毒株共同特异的单克隆抗体,偶联上异硫氰酸荧光素,用直接免疫荧光试验,对脊髓灰质炎病毒进行病原学诊断;一套是具有不同毒株特异的单克隆抗体,用中和试验或间接免疫荧光试验,根据抗体在抗原上识别表位的不同及其表位分布关系,可用于脊髓灰质炎病毒毒株问的差异和抗原变异的研究,以及疫苗株与野毒株的鉴别。近年来我们收集了286株脊髓灰质炎病毒标本,用上述试剂进行了病原学的诊断及抗原性质方面的分析研究。证明了这些试剂具有高度的特异性,可快速、简便、敏感地进行病原学诊断。应用单克隆抗体试剂从抗原表位水平来分析研究毒株的性质,鉴别疫苗相关株,这是一种较为理想的选择。     

酶联法检测流感疫苗中卵清蛋白含量试剂盒的质量验证

目的验证酶联法检测流感疫苗中卵清蛋白含量的试剂盒的质量。方法选取卵清蛋白标准品及20批全病毒流感灭活疫苗,对北京天坛生物制品股份有限公司生产的卵清蛋白ELISA试剂盒(简称天坛试剂盒)进行验证,确定该试剂盒的最佳检测区间、精密度、准确度及稳定性,并与德国Seruzym试剂盒进行比较,确定二者之间是否有相关性。结果天坛试剂盒的最佳检测区间为2.5~20ng/ml,试验间精密度分别为0.37%~9.79%、1.25%~5.57%和0.70%~5.51%,均小于10%;试验内精密度为1.28%;配制5、10和20ng/ml3个浓度的标准品,由同一实验人员分别进行9次准确度验证,回收率分别为105.67%、108.61%和98.67%;37℃放置3d与4℃保存的试剂盒检测结果之间差异无显著意义(t=2.075,P=0.0518);与进口试剂盒检测结果之间存在正相关关系(r=0.989,t=24.56,P<0.0001)和直线回归关系(b=0.629,F=602.97,P<0.0001),直线回归方程为y=0.629x-13.77。结论天坛试剂盒具有较好的精密度、准确度及稳定性;检测结果与进口试剂盒存在正相关和直线回归关系,可以用于卵清蛋白的常规检测。     

国产与进口HBsAg ELISA试剂盒的质量比较

目的比较国产与进口HBsAg ELISA试剂盒的质量。方法将卫生部临床检验中心HBsAg临床科研血清盘样本60份及随机抽取的某市无偿献血者血清样本200份,用国产及进口ELISA试剂进行双盲法筛检;以卫生部临床检验中心血清盘及献血者HBsAg阳性并经中和试验证实者为金标准,用四格表法计算比较真实性及可靠性指标,并对截断点的合理性进行评价。结果国产与进口ELISA试剂的灵敏度分别为86%和100%;特异度分别为100%和96%;尤登指数分别为0·86和0·96;两种试剂的重复符合率均为100%;国产英科新创规定的截断点较合理,进口试剂盒截断点规定值偏小。结论试剂的灵敏度以进口试剂盒较好,但特异度比国产试剂差,两种试剂的重复性均好。两种试剂联合筛检可保证输血的安全性。     

水痘—带状疱疹病毒IgG酶联检测试剂盒的研制和应用

目的 研制水痘IgG(VZV-IgG)酶联检测试剂盒。方法 将VZV接种二倍体细胞,收获病毒,经纯化后用作包被抗原;辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG制备酶联检测试剂盒并进行质量检定。结果 VZV-IgG酶联检测试剂盒敏感度与膜抗原荧光抗体法(FAMA)近似。结论 成功地制备了VZV-IgG酶联检测试剂盒。     

残余牛血清蛋白含量检测试剂盒的制备和应用

所制备的残余牛血清蛋白含量检测试剂盒，经试验表明具有较好的敏感性、特异性、稳定性和重复性。可检出疫苗中ng／ml含量的牛血清蛋白。该试剂盒使用简便、快速，现已广泛应用于有关生物制品中牛血清蛋白残余量的检测。     

检测HIV-1抗体的合成肽ELISA试剂盒的制备及应用

应用 HIV-18 P41抗原决定簇的合成肽作为抗原,建立了合成肽 ELISA 试剂盒,并用于血清HIV—1抗体的初筛试验。其 P/N 值为7.58,阴性平均 OD 值仅0.139,无假阳性和假阴性。用该试剂检测云南边境居民血清807份,其结果与应用进口 ELISA 试剂盒和免疫印迹法所测的结果相同,该试剂可用于HIV—1抗体检测。     

季铵盐残留快速测定试剂盒的研制及应用

本文采用虎红钠盐-柠檬酸体系研制出了一种季铵盐残留浓度现场快速检测试剂。探讨了反应体系p H、指示剂浓度、显色温度、干扰离子等影响因素并提出了测试时的注意事项。快速检测试剂结合分光光度计在最佳测试波长565 nm处的线性范围为：0.1～6.0 mg/L,标准曲线方程为：y=0.0653x+0.010,相关系数为：R2=0.9997;在此浓度范围内也可结合目视比色卡进行快速测试。该方法应用于模拟水样的测试,回收率在97%～104%之间。该试剂盒检测速度快、操作简便、灵敏度高,结果可靠,具有较高的实际应用价值。     

人α1微球蛋白ELISA检测试剂盒的制备及初步应用

目的制备人α1微球蛋白(alpha 1-microglobulin,α1-MG)ELISA定量检测试剂盒,并初步应用于临床标本的检测。方法用重组人α1-MG蛋白免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备特异性单克隆抗体,对单抗的特性进行鉴定后,采用双抗体夹心ELISA方法制备α1-MG试剂盒,并进行线性范围、灵敏度、准确性、精密性验证。应用制备的试剂盒检测100份健康人血清中的α1-MG含量,计算正常参考值;分别应用试剂盒及放射性免疫分析法(radioactive immunoassay,RIA)检测87份人血清标本,分析试剂盒与RIA法检测结果的相关性。结果经间接ELISA法筛选及克隆化培养,共获得4株稳定分泌抗α1-MG单抗的杂交瘤细胞株;制备的试剂盒最佳线性范围为0.5~60 mg/L,灵敏度为0.03 mg/L,检测不同浓度α1-MG的回收率在92.7%~97.1%之间,批内、批间变异系数(CV)分别为4.78%~8.57%和4.30%~6.84%;该试剂盒检测健康人血清样本中α1-MG含量正常参考值为15~32 mg/L,与RIA法的检测结果具有良好的相关性(r=0.958 6)。结论制备的人α1-MG ELISA检测试剂盒具有较高的准确性和灵敏度,且与RIA法具有良好的相关性,符合临床免疫分析的要求,适用于临床检测和科研应用。     

破伤风抗体IgG酶联检测试剂盒的研制

目的 研制检测破伤风IgG的酶联检测试剂盒。方法 以精制破伤风类毒素进一步纯化后作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG作为抗体制备ELISA试剂盒,并进行敏感性、特异性及重复性检测。结果 试剂盒敏感性可达0.003 9 IU/ml,特异性达95％以上,重复性好,CV<7％,试剂盒置于37℃、7 d敏感性无明显改变。结论 成功地制备了破伤风抗体IgG酶联检测试剂盒。     

流行性乙型脑炎特异性IgM、IgG诊断试剂盒的研制和应用

应用乙脑病毒感染BHK21细胞制备抗原，建立检测乙脑特异性IgM、IgG的诊断试剂盒，以ELISA捕捉法检测了107份临床疑似乙脑的患者血清，IgM阳性率为61．7％。该法比血抑法简便、敏感，不需要双份血清，可用于临床早期诊断。应用抗体夹心法检测了21份患者血清，IgG阳性率为61．9％，与ELISA捕捉法检测的符合率达100％。抗体夹心法与ELISA捕捉法可联合用于回顾性临床诊断和大规模流行病学调查。