高效液相色谱法分析发酵肉制品中生物胺

建立了高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测发酵肉制品中常见8种生物胺(色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、盐酸吡哆胺、组胺、酪胺和精精胺)的柱前衍生-HPLC分析方法,并对其在实际检测中的适用性进行验证。采用5%三氯乙酸作为提取溶剂,提取发酵肉制品中的生物胺,以丹磺酰氯作为衍生试剂,采用Waters Symmetry C_(18)色谱柱(250 mm×4. 6 mm,5μm),乙腈和水(含0. 1%甲酸的0. 01 mol/L乙酸铵溶液)作为流动相进行梯度进样洗脱,流速为0. 8 mL/min,紫外检测器波长为254 nm。结果表明,发酵肉制品中的8种生物胺在37 min内能够进行分离,在0. 05～50μg/mL,8种生物胺均呈现良好的线性相关性(R20. 998)。各生物胺3个水平(1. 0、5. 0、10μg/g)加标回收率为83. 34%～111. 4%,相对标准偏差(RSD)均小于4. 85%,8种生物胺检出限为0. 03～0. 21μg/g,定量限为0. 10～0. 69μg/g。     

高效液相色谱法检测中国传统发酵豆腐制品中的生物胺

目的:建立同时检测中国传统发酵豆制品中10种生物胺(BAs)的高效液相色谱法,并测定一些发酵豆腐制品中的生物胺含量.方法:以庚胺为内标试剂,苯甲酰氯为样品衍生试剂;Inertsil ODS-3色谱柱为固定相,乙腈和10mmol/L乙酸铵溶液为流动相,采用梯度洗脱,于波长254nm处紫外检测.以0.4mol/L高氯酸溶液为样品提取溶剂,测定发酵豆腐制品中10种生物胺含量.结果:在20min内各种生物胺得到很好的分离.经方法学验证,线性关系良好,回收率在94.7%～109.8%之间,精密度、重复性RSD均小于10%.4种发酵豆腐制品中,被检测到的生物胺有:腐胺(Put)、尸胺(Cad)、亚精胺(Spd)、精胺(Spm)、色胺(Try)、2-苯乙胺(Phe)、组胺(His)、酪胺(Tyr).不同样品的生物胺含量差异很大,在所有样品中均未检出5-羟基色胺(Ser)、胍基丁胺(Agm).结论:该方法灵敏度高,重现性好,是测定发酵豆腐制品中生物胺含量的有效方法.     

高效液相色谱法同时测定酱油中的8种生物胺

本文建立了高效液相色谱法同时检测酱油中色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺的方法。采用5%三氯乙酸溶液为样品提取溶剂,提取液经丹璜酰氯柱前衍生30 min,最终HPLC进行定性和定量分析。本方法中8种生物胺的线性范围为1.0~50μg/mL,相关系数R2大于0.99,检出限(S/N=3)为0.075~0.3μg/mL。在添加水平为1.00和5.00μg/mL时,样品的平均回收率在83%~111%之间,相对标准偏差为0.43%~19.0%。本方法具有线性范围广,灵敏度和准确度高等优点,适用于酱油中生物胺的检测。采用本方法对市售10种酱油进行检测,总生物胺含量的范围为50.82~1898.17μg/mL,其中酪胺、腐胺和苯乙胺是酱油样品中含量最多的生物胺。     

利用高效液相色谱法测定不同发酵时长郫县豆瓣酱中的8种生物胺

本研究基于高效液相色谱(HPLC)技术,测定了不同发酵时长(1~96个月)郫县豆瓣酱中色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺8种生物胺的含量。结果显示,HPLC分析中,8种生物胺的检出限在0.17~0.35 mg/L之间,定量限在0.55~0.92 mg/L之间,各生物胺标品在1~60 mg/L的质量浓度范围内线性关系良好,可被准确定量;各生物胺回收率在73.10%~104.13%之间,说明本方法具有较高的重复性和灵敏度。腐胺、尸胺、酪胺和组胺是郫县豆瓣酱中的主要生物胺;随着发酵时间的延长,腐胺含量快速上升,尸胺含量在发酵前54个月迅速上升,之后明显下降,酪胺和组胺在发酵54个月后含量有所增加;其他生物胺含量较低,且发酵期间变化不明显;郫县豆瓣酱中总生物胺含量随发酵时间的延长不断积累,从(37.86±6.69) mg/kg增加到(155.09±8.53) mg/kg,其含量在发酵前54个月快速上升,之后趋于稳定。目前食品中的多数生物胺尚没有限量标准,但参考现有的毒理学数据来看,本研究中郫县豆瓣酱的生物胺含量水平相对安全。     

高效液相色谱法测定黄酒发酵醪液中生物胺含量

建立黄酒发酵醪液(固液混合物)中生物胺的检测方法并测定绍兴某黄酒厂发酵醪液的生物胺含量。结果显示,8种生物胺的检出限为0.187μg/L^0.35μg/L,定量限为0.323μg/L^1.06μg/L,且在0.5μg/L^20μg/L范围内具有良好的线性关系。8种生物胺在黄酒发酵醪液样品中的平均回收率为95.31%~105.22%,相对标准偏差在3.21%~9.87%,均小于10%,符合国家标准中残留检测要求。在黄酒发酵醪液中,8种生物胺均能检出,总生物胺的范围是151.02 mg/L^181.48 mg/L,其中腐胺和酪胺是主要的生物胺。     

高效液相色谱法测定米面及制品中的过氧化苯甲酰

目的建立高效液相色谱法测定米面及制品中过氧化苯甲酰的含量。方法样品中的过氧化苯甲酰经纯水超声提取,静置后加入20g/LFeSO4溶液与5%乙酸溶液,振荡混匀后超声提取10min,上清液过0.22μm水相微孔滤膜。经Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱分离,以20 mmol/L乙酸铵溶液和甲醇为流动相,于紫外检测器波长230 nm处检测,外标法定量。结果过氧化苯甲酰在0～100 mg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.999,方法检出限为0.40 mg/kg。加标回收率为87.5%～94.5%,相对标准偏差为4.2%～6.4%。结论该方法检测结果准确、稳定,适用于米面及制品中过氧化苯甲酰的准确测定。     

高效液相色谱法测定市售泡凤爪中的生物胺

采用丹磺酰氯为柱前衍生,建立高效液相色谱法同时测定市售泡凤爪中色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺8种生物胺含量的方法。色谱条件:C18色谱柱分离,以水和乙腈为流动相梯度洗脱,流速0.8mL/min,紫外检测器,检测波长:254nm。在此条件下,8种生物胺在23min内实现了良好的分离,该方法标准曲线相关系数均在0.998以上,精密度在可接收范围内（RSD<5%）,8种生物胺的平均回收率在90.41%⁹9.66%之间。结果表明该方法灵敏度高,精密度和重复性好,可快捷、准确地对市售泡凤爪中的生物胺进行检测。检测出生物胺总量范围在72.42⁴09.67mg/kg,其中,色胺、组胺、腐胺、尸胺、亚精胺的检出率为100%,其平均含量分别为47.53、26.20、35.65、12.94、8.15mg/kg。      

高效液相色谱法同时测定香肠中6种生物胺

采用丹磺酰氯为衍生试剂,建立反相高效液相色谱法同时测定香肠中腐胺、尸胺、酪胺、组胺、亚精胺和精胺6种生物胺的方法.色谱条件:C18色谱柱分离,以甲醇和0.1%乙酸溶液为流动相梯度洗脱,流速0.8mL/min,二极管阵列检测器,检测波长254 nm.以1,7-二氨基庚烷为内标,在设定的试验条件下,6种生物胺实现了良好的分离,并呈良好的线性相关性(r>0.999).方法的检测限:腐胺、亚精胺、尸胺和酪胺均为0.8μg/mL,组胺和精胺均为4 μg/mL.本检测方法具有良好的重现性和回收率.对发酵香肠样品中的生物胺含量进行了分析,其中部分香肠中含有一定量的生物胺,最高可达1.09mg/g.     

反相高效液相色谱法测定食品中生物胺

氨基酸是食品中的正常成分,食品发酵或腐败过程中氨基酸脱去羧基便生成相应的生物胺。消费者通过食品摄入过量的生物胺会引起过敏反应,严重的还会危及生命。本文主要综述了RP-HPLC法测定食品中生物胺的研究进展;对样品生物胺的提取、净化、衍生方法、流动相的选择以及不同食品中的生物胺种类及含量做了深入的探讨。      

反相高效液相色谱法测定食品中生物胺

氨基酸是食品中的正常成分,食品发酵或腐败过程中氨基酸脱去羧基便生成相应的生物胺。消费者通过食品摄入过量的生物胺会引起过敏反应,严重的还会危及生命。本文主要综述了RP-HPLC法测定食品中生物胺的研究进展;对样品生物胺的提取、净化、衍生方法、流动相的选择以及不同食品中的生物胺种类及含量做了深入的探讨。     

高效液相法测定市售腌制蔬菜商品中8种生物胺的含量

采用丹磺酰氯为衍生试剂,建立反相高效液相色谱法同时测定腌制蔬菜中色胺,β-苯乙胺,腐胺,尸胺,组胺,酪胺,亚精胺和精胺含量的方法。色谱条件:C18色谱柱分离,以水和乙腈为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL/min,紫外检测器,检测波长:254 nm。在设定的试验条件下,8种生物胺在30 min内实现了良好的分离,待测生物胺峰面积同其相应浓度呈良好的线性相关性(R2>0.998)。仪器重复性良好(RSD<0.63%),方法重复性在可接收范围内(RSD<10%),8种生物胺的平均回收率在89.19%～103.02%之间。结果表明生物胺的HPLC检测方法,灵敏度高,精密度和重复性好,可快捷、准确地对腌制蔬菜中的生物胺进行检测。对市售腌制蔬菜样品中的生物胺含量进行了分析,检测出生物胺总量范围在39.38～628.82 mg/kg,属于目前我国安全标准范围之内。     

反相高效液相色谱法同时检测海产品中8种生物胺

目的建立一种可同时快速测定海产品中8种生物胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱法。方法样品经5%三氯乙酸提取,丹磺酰氯柱前衍生后,采用Agilent zorbax SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇和水作为流动相,进行梯度洗脱。柱温30℃,流速为1.5 m L/min,采用UV紫外检测器,检测波长254 nm,对8种生物胺进行分离分析。结果结果显示,色胺、2-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺在15 min内得到有效分离,在1~100 mg/L范围内线性系数r~2﹥0.999,8种生物胺测定方法的检出限范围为0.02~0.17 mg/L,定量限范围为0.067~0.57 mg/L,且重复性良好,向秋刀鱼中分别添加生物胺标准品20.0、50.0、100.0 mg/L 3个含量水平,8种生物胺平均回收率介于79%~117%之间,相对标准偏差为0.84%~12.57%。采用该方法测定了秋刀鱼等5类海产品中8种生物胺的含量,结果显示生物胺总含量在23~208 mg/kg之间。结论该方法简单、快速,灵敏度和准确度符合要求,适用于海产品中多种生物胺的同时检测。     

高效液相色谱法测定金枪鱼产品中的生物胺含量

目的 建立高效液相色谱法检测金枪鱼产品中8种常见生物胺的含量。方法 样品经酸介质提取, 丹磺酰氯衍生, 0.22 μm有机膜过滤后, 采用CAPCELL Pak C18 MGⅡ色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm), 以甲醇-超纯水为流动相进行梯度洗脱, 流速0.8 mL/min, 柱温为室温。生物胺各组分以外标法进行定量。结果 采用0.4 mol/L高氯酸提取样品3次, 可以获得最优的生物胺提取效果。生物胺各组分浓度为0.17~2.25 mg/kg范围呈良好的线性关系(r>0.999), 平均加标回收率为86.6%~115.9%, 相对标准偏差为1.5%~13.7%。?80 ℃金枪鱼刺身的总生物胺含量低于10 mg/kg, 冰鲜金枪鱼刺身的总生物胺含量要高于?80 ℃金枪鱼刺身, 但低于 100 mg/kg; 金枪鱼罐头主要含有组胺、尸胺、腐胺和酪胺, 总生物胺含量范围为106.63~357.09 mg/kg; 金枪鱼松的总生物胺含量范围为111.20~751.54 mg/kg; 部分金枪鱼罐头和金枪鱼松的组胺含量超过50 mg/kg。 结论 建立的高效液相色谱法可以准确测定金枪鱼产品中的8种常见生物胺含量, 本文测定的金枪鱼刺身产品中生物胺含量较低, 不存在安全隐患, 部分金枪鱼罐头和金枪鱼松的生物胺(尤其是组胺)含量较高, 有出口退回风险, 应引起足够重视。     

高效液相色谱—三重四极杆串联质谱法分析奶酪中5种生物胺

目的：为生物胺形成机制的研究和食品安全风险评估提供新的技术思路。方法：建立液相色谱—三重四极杆串联质谱同时检测奶酪中酪胺、2-苯乙胺、色胺、章鱼胺和尸胺的测定方法。采用超声辅助溶剂萃取生物胺,HILIC色谱柱分离,三重四极杆质谱正离子多反应监测模式进行测定,内标法定量;研究提取溶剂种类、超声时间选择和基质效应对峰面积的影响,进行方法学验证和评估。结果：以0.1%甲酸-乙腈-水溶液为提取溶剂,超声提取15 min,生物胺无需衍生化处理,以乙酸铵（甲酸调pH值为4）—乙腈为流动相,HPLC-MS/MS直接测定。5种生物胺的加标回收率为78.6%～113.8%,相对标准偏差为2.41%～7.12%（n=3）;色胺、苯乙胺、酪胺和章鱼胺的检出限为0.75 μg/kg,定量限为2.5 μg/kg;尸胺的检出限为1.5 μg/kg,定量限为5.0 μg/kg;在各自线性范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99。对市售奶酪样品进行测定,不同样品中不同的生物胺含量差异较大,含量范围为4.45～2 863.00 μg/kg,均在安全范围内。结论：试验所建方法适合奶酪中5种生物胺含量的快速检测。     

高效液相色谱法测定烧烤制品中5种杂环胺的含量

目的 建立高效液相色谱法检测烧烤制品中5种杂环胺(heterocyclic aromatic amines, HAAs)含量的方法。方法 样品经乙酸乙酯、三乙胺、氨水提取, 丙基磺酸(propanesulfonic acid, PRS)和C18固相萃取小柱净化, 采用TSK-gel ODS-80TM色谱柱分析, 以乙腈和0.05 mol/L醋酸-醋酸铵缓冲液(pH=3.4)为流动相进行梯度洗脱, 紫外-荧光检测器的串联方式检测杂环胺含量。结果 2-氨基-1-甲基-6-苯基-咪唑并[4,5-b]吡啶(2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo(4,5-b)pyridine, PhIP)、9H-吡啶并[4,3-b]吲哚(9H-pyrido[4,3-b]indole, Norharman)、1-甲基-9H-吡啶并[4,3-b]吲哚(1-methyl-9H-pyrido[4,3-b]indol, Harman)、2-氨基-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚(2-amine-9H-pyrido[2,3-b]indol, AaC)在0.1~500 μg/L范围呈良好的线性关系, 2-氨基-3-甲基咪唑并[4,5-f]喹啉(2-amino-3-methylimidazo(4,5-f)quinoline, IQ)在0.1~1000 μg/L范围呈良好的线性关系, 相关系数r2均大于99.3%, 加标回收率为74.06%~93.77% (n=6), 相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为3.41%~5.93% (n=6)。结论 该方法简便快速、结果准确、灵敏度高, 适合于肉制品中的杂环胺含量的检测。通过检测结果可知不同原料中5种杂环胺含量不同, 相同原料烧烤条件不同, 产生的杂环胺含量也不相同。     

Determination of biogenic amines in traditional Chinese fermented foods by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC)

A survey of biogenic amine content of traditional Chinese fermented foods (douchi, sufu, fermented sausage, yulu, and shrimp paste) was carried out. Eight major biogenic amines including putrescine, cadaverine, histamine, phenylethylamine, tyramine, spermine, spermidine and tryptamine were separated by reversed-phase HPLC-DAD on Inertsil ODS-SP column after pre-column derivatisation with dansyl chloride. The results showed that spermine (1.65–3.96 mg 100 g^?1), putrescine (0.20–10.89 mg 100 g^?1), cadaverine (3.60–12.14 mg 100 g^?1), and histamine (0.57–20.24 mg 100 g^?1) were the most represented amines. All amines were detected in yulu, while sufu showed a much higher content of most amines. Shrimp paste showed the lowest level of total biogenic amines. Moreover, the composition and content of eight biogenic amines in the selected samples varied among different food types, origins and batches. Although the average content for each amine is within the range that may elicit direct adverse reactions, consumers should be aware of the potential synergistic effect among different amines and limit their consumption at each meal.     

超高效液相色谱法测定不同品种桃果酒中8种生物胺含量

摘要：目的 建立一种检测桃果酒中生物胺的超高效液相色谱分析方法, 并对不同品种桃果酒的生物胺组成与含量进行测定。方法 样品采用丹磺酰氯衍生, 乙酸乙酯液-液萃取, Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7 μm)分离, 柱温35℃, 乙腈-0.1%乙酸水溶液作流动相, 流速0.2 mL/min, 梯度洗脱, 紫外检测波长254 nm,外标法定量。 结果 柱前丹磺酰氯衍生超高效液相色谱-紫外法可在16 min内完成色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺等8种生物胺的测定, 检出限在15.76~21.43μg/L之间, 定量限在53.58~71.07μg/L之间; 日内精密度在0.170.85%~1.883.31%之间, 日间精密度在0.601.02%~2.824.36%之间; 加标回收率在87.8389.71%~108.22104.85%之间, 相对标准偏差RSD≤3.36%。10个品种桃果酒中均可检测到8种生物胺, 其中以色胺、腐胺含量较高, 而酪胺、精胺含量较低。白凤、武汉2号桃果酒中生物胺总胺含量较高, 而春蜜、中桃绯玉桃果酒中总胺含量较低。结论 该方法快速简便、灵敏高效、准确度高、重现性好, 可用于桃果酒中生物胺的分析检测。不同品种桃果酒的生物胺组成与含量差异较大, 选择适宜的原料品种有助于控制桃果酒中生物胺含量。     

发酵食品中生物胺的研究现状

发酵食品因具有多种多样的促进健康功能、特殊风味和便于储藏等优点而受到人们的喜爱。然而,在发酵食品制作过程中,会产生和蓄积大量的有害物质生物胺(biogenicamines,BA),过量食用后会严重危害消费者的身体健康。BA是一类非挥发性低分子量的含氮有机物,由氨基酸脱羧形成。在食品发酵过程中,由于微生物、化学和物理条件的影响,BA的产生很难被控制,因而使得发酵食品面临着严峻的安全问题。目前对于BA以及产BA微生物的检测已经有较成熟的方法,但是对于如何清除发酵食品中的BA仍然缺乏有效的措施。较为可行的一种措施是BA酶降解法,通过向发酵食品中添加能够降解BA的微生物来降低BA的含量,但是此方法规模化的应用仍然有诸多问题需要探索。本文在现有文献的基础上,对当前发酵食品中BA引发的问题、检测、预防以及微生物降解BA的研究进行论述,旨在让人们了解发酵食品中BA的危害,同时让发酵食品行业对于微生物降解BA这一新方向有较全面的认识。     

高效液相法测定草鱼糜发酵过程中生物胺变化

本文采用纳豆芽孢杆菌和戊糖片球菌组成的混合发酵剂对草鱼鱼糜进行发酵,建立了发酵鱼制品中六种生物胺(色胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺)的高效液相色谱分析方法,研究了鱼糜发酵过程中生物胺含量的变化以及微生物数量的变化。结果发现,在30 min内各种生物胺得到很好的分离,且线性关系良好(R2>0.999),回收率在97.35%~103.00%,精密度、重现性RSD均小于10%。添加混合发酵剂可以明显抑制金黄色葡萄球菌、假单胞菌和大肠杆菌等杂菌的生长,降低发酵过程中腐胺、尸胺、组胺和酪胺含量的积累;利用纳豆芽孢杆菌,戊糖片球菌组成的混合发酵剂以及一系列负控脱羧酶活动能有效抑制鱼糜发酵过程中生物胺的形成,抑制腐败菌和致病菌的生长,提高鱼糜发酵食品的品质。      

干发酵香肠中的生物胺

综述干发酵香肠中生物胺产生的条件,国外干发酵香肠中常见生物胺的种类及含量,与生物胺积累有关的微生物以及影响生物胺产生的理化因素,并提出了控制干发酵香肠中生物胺积累的措施。