胶质芽孢杆菌胞外多糖的制备及流变学特性

以实验室保藏的胶质芽孢杆菌SM-01为研究对象,研究了其胞外多糖(EPS)在5 L发酵罐中的发酵过程及制备方法,并对EPS溶液的流变学特性进行了研究,主要分析了质量浓度、剪切速率、剪切时间、温度、pH、无机盐、外加多糖等对其黏度的影响。结果表明,发酵液中EPS的最大产量为23.46 g/L,经离心、醇沉、冷冻干燥后EPS的回收率为76.7%;EPS溶液是典型的非牛顿流体;溶液黏度随着质量浓度的增加而快速增大;25～100℃范围内EPS黏度变化不大;EPS溶液黏度受pH影响较大,其黏度值在pH 7时达到最大,pH>12时溶液成弱凝胶状;加入NaCl、KCl、MgCl2、CaCl2等无机盐后溶液黏度显著下降,Fe3+、Pb2+等高价阳离子使EPS沉淀;EPS与海藻酸钠、黄原胶、瓜尔胶、槐豆胶、阿拉伯胶均有协效性。     

胶质芽孢杆菌SM-01胞外多糖提取纯化工艺

针对胶质芽孢杆菌SM-01发酵液粘度高,菌液分离困难而导致胞外多糖提取效率低的问题,采用硅藻土吸附-抽滤法,对提取工艺及超滤条件进行了研究,确定了工艺参数。结果表明,发酵液中NaCl添加量为3 g/dL,发酵液稀释倍数为3倍,硅藻土添加量为10 g/L时,在室温下抽滤可除去菌体和蛋白质。滤液在0.1 MPa下经截留相对分子质量为200 000的超滤膜超滤纯化,多糖回收率可达73.2%。     

高效阴离子交换色谱检测双歧杆菌胞外多糖的单糖组成

利用离子交换色谱柱(DEAE-Sepharose Fast Flow,2.6×20cm)和凝胶过滤色谱柱(SepharoseCL-6B,1.6×80cm)对双歧杆菌RH所产EPS进行分离纯化,得到EPSa和EPSb两个组分。然后,采用高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法(high-performance anion-exchange chromatography withpulsed amperometric detection,HPAEC-PAD)分别对2个组分的单糖组成进行了定性和定量测定。结果表明,用20%H2SO4于100℃水解2.5h,可将多糖完全水解。HPAEC-PAD检测结果表明EPSa和EPSb均为杂多糖,EPSa含有Rha(1.00%),Ara(3.54%),Gal(18.13%),Glc(42.84%),Man(33.47%)和Fru(1.03%),而EPSb含有Rha(9.41%),Ara(7.88%),Gal(34.82%),Glc(17.82%),Man(27.83%)和Fru(2.24%)。     

三种色谱法分析鲍鱼生殖腺多糖的单糖组成

为了选择一种准确有效的方法测定鲍鱼生殖腺多糖(AGP-32)的单糖组成。采用薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法对AGP-32的单糖组成进行测定。结果表明:高效液相色谱法较其它色谱方法具有分离效果好,并可同时检测中性糖、糖醛酸和氨基糖等特点,并利用该法得到单糖组成的摩尔比为Man∶Rha∶GlcA∶GalA∶Glc∶Gal∶Xyl∶Fuc=0.79∶2.05∶1.6∶0.58∶0.09∶4.91∶0.11∶0.34。说明高效液相色谱法较其它色谱法更加适合于鲍鱼生殖腺多糖这类复杂样品的单糖组成分析。     

地衣芽孢杆菌TS-01 胞外多糖功能的研究

对地衣芽孢杆菌TS-01胞外多糖的清除自由基能力、增强免疫活性、抑制致病菌能力等进行了研究,发现50%醇提多糖和70%醇提多糖均对DPPH·自由基有清除作用,且随多糖浓度升高而增强。在适当的添加剂量下,两种胞外多糖对T、B淋巴细胞转化有增强作用。两种胞外多糖对致病菌都不产生抑菌圈,但能够降低致病菌的繁殖速度。     

柱前衍生化高效液相色谱法分析发菜胞外多糖的单糖组成

采用水溶醇沉法提取发菜多糖,通过三氟乙酸（TFA）将其水解成单糖,经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化后,利用RP-HPLC分析其单糖组成。结果表明,发菜胞外多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖组成,其摩尔比为0.71∶0.37∶0.44∶1.53∶1.03∶0.40。该方法具有操作简便、快捷,重现性良好等特点,可用于发菜胞外多糖中单糖组成的定性和定量分析。      

灰树花胞内多糖和胞外多糖的组成分析

为研究灰树花胞内多糖和胞外多糖在组成上的差别与共同点,文中采用薄层色谱法(TLC)和柱前衍生化高效液相色谱法(PMP-HPLC)对灰树花(Grifola frondosa)的胞内多糖和胞外多糖进行组成测定.首先采用TLC法分离,进一步采用PMP-HPLC法分离确定.实验结果显示,发酵液多糖(胞外多糖)仅由葡萄糖组成;来自胞内的菌丝体多糖和子实体多糖则均由葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比例分别为1∶8.02和8.42∶1.因此胞内多糖和胞外多糖在单糖组成上不一样,但都含有葡萄糖.     

TLC快速分析多糖的单糖组成

本文采用薄层色谱法分析多糖的单糖组成。从斑点分离度、清晰度、有无拖尾现象及展层时间等方面综合评价展层效果。通过实验确定了适合的展开剂为展开系统(乙酸乙脂:吡啶:无水乙醇:水=8:1:1:2)、合适的显色剂为苯胺-二苯胺磷酸显色剂。通过此体系确定了单糖的Rf值,可用于快速分析水解多糖的单糖组分。     

热带雨林博罗霍果多糖的单糖组成分析

研究了博罗霍果多糖的不同提取条件和对其含量及单糖的组成进行测定。方法1的提取条件为样品经乙醇溶液除去单糖和寡糖,脱脂、水提醇沉法提取多糖,用苯酚-硫酸法测定多糖含量,酸水解后用HPLC-ELSD法测定多糖组成。方法2的提取条件为样品经冷冻干燥,乙醇溶液除去单糖和寡糖后,用苯酚-硫酸法测定多糖含量,酸水解后用气相色谱衍生法测定多糖组成。方法1提取得多糖含量为6.2%,其单糖组成为半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖。方法2提取得多糖含量为11.2%,其单糖组成为半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖,糖醛酸含量为0.24%。博罗霍多糖是以中性糖为主且含少量糖醛酸的杂多糖。     

一株产胞外多糖枯草芽孢杆菌发酵条件的优化

多糖是广泛存在于动物、植物、微生物中的生物高分子聚合物,因其具有多种多样的生物活性及功能,并且安全无毒,近年来成为研究与开发的热点。本文对实验室保藏的一株产胞外多糖枯草芽孢杆菌进行了初步研究。通过单因素试验及正交试验得到枯草芽孢杆菌产胞外多糖(Exopolysaccharide)的最优发酵条件。结果表明:发酵温度为37℃,摇瓶培养转速为160r/min,接种量为3%,发酵时间为36h,在优化后的条件下胞外多糖的产量最大可达到4.135g/L,产量提高了2.87%。     

鲍鱼内脏多糖的双水相盐析萃取-酶解法提取工艺研究及组成分析

目的建立一种鲍鱼内脏多糖的双水相盐析萃取—酶解法的提取工艺,并对多糖组成进行分析。方法样品经双水相盐析萃取,木瓜蛋白酶酶解醇沉后获得粗多糖。考察鲍鱼内脏干粉的加入量和酶对多糖得率的影响。结果鲍鱼内脏多糖双水相盐析萃取的最适条件为:乙醇30%(V:V)、碳酸钠12%(m:V)和鲍鱼内脏冻干粉加入量7 g/100 mL,酶解最适用酶为木瓜蛋白酶。在此条件下,鲍鱼内脏多糖得率为3.76%。结论经液相色谱分析,该多糖由甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖组成,其质量比为3.54:2.41:14.75:1.00:1.25:6.79:84.04:7.79:3.38:10.83。     

柱前衍生化HPLC法分析真菌多糖的单糖组成

通过柱前衍生化HPLC法分析了6种真菌多糖的单糖组成。将6种真菌的胞外粗多糖及其菌体用1mol/L的硫酸水解成单糖,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化,利用高效液相色谱法检测各单糖。结果表明,灵芝、树舌类真菌胞外多糖的产率均较高,胞外多糖产率在0.0921～0.1528g/100mL之间。胞外多糖主要以甘露糖为主,其次含有葡萄糖和半乳糖,并且一般含有少量的阿拉伯糖。胞内多糖中葡萄糖含量最高,其次含有甘露糖和半乳糖,个别菌种还含有少量的阿拉伯糖和葡萄糖醛酸。而虫草胞外多糖的组成依次为半乳糖、葡萄糖、甘露糖和葡萄糖醛酸,胞内多糖同样是主要含有葡萄糖,其次含有甘露糖、半乳糖和葡萄糖醛酸。     

高效液相色谱法分析地瓜儿多糖的单糖组成

研究分析地瓜儿多糖的单糖组成。采用水提醇沉法提取地瓜儿多糖,用三氟乙酸水解多糖成单糖,单糖产物经衍生化试剂1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化后,利用高效液相色谱法分析单糖的PMP衍生物。结果表明,地瓜儿多糖由甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖醛酸(GalUA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)和阿拉伯糖(Ara)8种单糖组成,是一种酸性杂多糖,其中以半乳糖、葡萄糖和半乳糖醛酸为主,为进一步开发利用地瓜儿这一新的野菜资源提供了科学依据。     

超高效液相色谱法检测香菇菌多糖片单糖组分

目的建立一种柱前衍生-超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)检测香菇菌多糖片中单糖组成的分析方法。方法为排除香菇菌多糖片中辅料干扰,采用UPLC对香菇菌多糖原料中单糖组分进行定性分析,确定原料中的单糖组成。对超高效液相色谱法进行优化及方法学考察,以香菇菌多糖原料中主要单糖组成为依据对香菇菌多糖片单糖组成进行分析,确定香菇菌多糖片的单糖组成及摩尔比例。结果香菇菌多糖片的主要糖单元为甘露糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为:4.6:4.28:6.375,方法学验证结果表明该单糖组成测定方法的精密度良好,样品中所测单糖的加样回收率为96.6%~103.8%,相对标准偏差在2.0%~2.6%之间,各单糖标准曲线线性相关系数大于0.999,线性关系良好。结论此方法快速、高效、准确,并为香菇菌多糖片的质量控制提供了保障。     

双孢菇菇柄多糖柱层析纯化及单糖组成

以双孢菇菇柄为试材,首先对经超声提取得到的菇柄多糖进行柱层析分离纯化,然后对柱层析得到的多糖组分别采用紫外光谱和柱层析进行纯度分析,并进行红外光谱分析和单糖组成分析。结果表明,脱蛋白双孢菇菇柄多糖经DEAE Sephadex A-25柱层析纯化共得到4个组分,收集其中两个较多的组分(蒸馏水和0.1 mol/L NaCl洗脱组分),经紫外光谱扫描无核酸和蛋白质,经Sephadex G-200柱层析鉴定均为单一峰。所得两种多糖组分经FT-IR红外光谱分析,均含有多糖特征吸收峰,且均为吡喃糖环β-异构体的多糖。菇柄蒸馏水洗脱多糖组分由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖组成,0.1 mol/L NaCl洗脱组分是由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖组成。     

灵硒康口服液中灵芝的鉴别及其灵芝多糖中单糖组成的测定

目的鉴别灵硒康口服液中的灵芝成分及测定灵芝多糖中单糖的组成。方法样品经沉淀、离心、固相萃取(solid-phase extraction, SPE)小柱分离、富集和纯化处理。使用福林酚试剂法、薄层色谱法(thin-layer chromatography, TLC)及高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)鉴别和测定灵硒康口服液中灵芝及灵芝多糖中单糖的组成。结果福林酚试剂法鉴别了灵芝中水溶性蛋白质。样品及对照药材显蓝色,阴性不显色。薄层色谱法鉴别了灵芝中水溶性糖。样品及对照药材在相同的位置上有2个斑点, 1个橘黄色,1个蓝紫色,阴性不显色。以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)试剂柱前衍生化、LichrospherC_(18)柱,紫外检测,等度或梯度洗脱的高效液相色谱法测定灵芝多糖中4种单糖。其中等度洗脱含量(mg/100 mL)分别为:甘露糖1.78,葡萄糖124.45,半乳糖3.86,木糖2.68。梯度洗脱分别为:甘露糖1.63,葡萄糖128.65,半乳糖3.52,木糖2.53。两者测定结果基本相同。结论上述鉴别和含量测定方法专属性强、重现性好、灵敏度高,可管控产品质量。     

杏鲍菇多糖的单糖组成分析及其抗氧化活性研究

采用水提醇沉法提取杏鲍菇多糖,通过苯酚-硫酸法测定多糖总含量,利用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生化高效液相色谱（HPLC）分析单糖组成。在体外抗氧化评价体系研究杏鲍菇多糖的总还原力及对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基清除活性。其多糖的总糖含量达62.9%,分别由D-甘露糖、D-核糖、D-鼠李糖、D-葡糖醛酸、D-葡萄糖、D-木糖、D-半乳糖、D-岩藻糖组成,其相对摩尔百分比分别为9.8%、1.6%、0.15%、0.8%、62.8%、0.05%、24.4%、0.4%。结果表明,杏鲍菇多糖是一种典型的杂多糖,具有较强的抗氧化活性。      

GC和HPLC分析金银花多糖的单糖组成方法比较

目的:GC法和HPLC法分析金银花多糖的单糖组成,并对两种方法进行比较。方法:金银花多糖经2.0 mol·L-1的三氟乙酸水解后,用糖腈乙酸酯衍生化-GC法和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化-HPLC法分别测定其单糖组成及其比例。结果:GC法检测出金银花多糖由鼠李糖(L-Rha)、阿拉伯糖(D-Ara)、甘露糖(D-Man)、木糖(D-Xyl)、葡萄糖(D-Glc)、半乳糖(D-Gal)组成;HPLC法检测到金银花多糖中含有甘露糖(D-Man)、鼠李糖(L-Rha)、葡萄糖醛酸(D-GlcA)、葡萄糖(D-Glc)、半乳糖(D-Gal)、阿拉伯糖(D-Ara)和木糖(D-Xyl),其中半乳糖(D-Gal)与阿拉伯糖(D-Ara)的色谱峰重叠。结论:两种方法均能检测出中性糖,HPLC法不仅能测中性糖,还能检测出葡萄糖醛酸,对金银花多糖的单糖组成分析GC与HPLC联合使用较为合适。     

杜香多糖的单糖组分分析及其理化性质研究

为分析杜香多糖的单糖组成、酶抑制作用及抗氧化性能,采用高效阴离子色谱法、PNPG法及ABTS法对杜香多糖样品进行了分析检测。检测得到杜香多糖含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖几种单糖组分;其对α-葡萄糖苷酶的抑制与浓度呈正相关,在3 mg/m L时,抑制率达30%;清除ABTS自由基的EC50为2.25 mg/m L。杜香多糖含有丰富的单糖组成,具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制和体外抗氧化活性。