MALDI-TOF MS与16SrDNA方法对肠杆菌科微生物鉴定比较分析

为了研究基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法鉴定肠杆菌科微生物及其对微生物系统分类学相关分析的准确性,采用MALDI-TOF MS对金桔表面分离的10种肠杆菌科微生物进行蛋白质图谱收集,通过比对图谱特征峰实现微生物的鉴定与系统进化学分析;同时对10种微生物进行16SrDNA提取与测序,得到分子生物化学水平鉴定,并采用邻近连接法对16SrDNA序列做系统进化树分析。结果表明:MALDI-TOF MS与16SrDNA测序对10种肠杆菌科微生物鉴定结果中,克雷伯菌属2株菌鉴定种级有偏差,其他8种一致;MALDI-TOF MS与16SrDNA测得的数据都可计算微生物相关性,从而得到微生物系统发育树,两株系统发育树中同属级微生物归类的亲缘位置与方向一致,但不同属肠杆菌科微生物的亲缘距离与位置差异较大。MALDI-TOF MS法鉴定农产品表面微生物具有快速、准确的特点,但准确建立系统发育相关性还需要扩大数据库和优化算法。     

以低浓度异甘草素为基质的MALDI-TOF MS用于小分子的检测研究

以低浓度异甘草素(ISL,0.05 mmol/L)为基质,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对精氨酸、甘露醇和苏氨酸-亮氨酸二肽等小分子物质进行分析检测。实验结果表明,以低浓度异甘草素作为MALDI-TOF MS分析小分子物质的有机基质,所获得的斑点均匀性和重复性、耐盐能力、分辨率等均显著优于常用基质2,5-二羟基苯甲酸(DHB)、2,4,6-三羟基苯乙酮(THAP)。本实验可为有机基质在小分子分析中的应用开辟新的窗口。     

含二硫键的蛋白质/多肽的MALDI-TOF MS源内裂解研究

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法研究含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解(ISD)。比较了不同基质种类及不同结晶状态对含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解的影响。结果表明,含二硫键的蛋白质的ISD发生受激光点照射位置的影响,在不同基质与结晶形态的条件下,含二硫键的蛋白质的ISD碎片信息不同。通过分析比较,含二硫键的蛋白质的ISD较容易控制,并且其基质的种类及结晶状态作用很关键。需要获得大量碎片时,使激光照射在样品和阿魏酸(FA)基质形成的大结晶处;不希望出现碎片时,可使用2,4,6-三羟基苯乙酮(THAP)为基质,或使激光照射在样品和其他基质形成的细小均匀结晶处。     

稀土金属元素标记行为考察

稀土金属元素因其与双功能试剂的螯合效率高、对肽段的反相色谱行为和质谱的离子化效率影响小、检测背景低,以及过量的金属离子在检测时不会产生干扰等优点,近年来在生物标记结合质谱定量分析研究领域引起了关注。选取稀土金属中单同位素铽（Tb）、钇（Y）、铥（Tm）、钬（Ho）和镥（Lu）5种元素,通过双功能试剂二乙三胺五乙酸双酸酐（DTPA双酸酐）对合成肽段及蛋白质酶切产物标记的过程进行研究,包括对标记条件进行优化,对该质量标签的色谱行为和共洗脱、标记稳定性、离子交换、动态范围、质谱检测限等现象进行考察。结果表明：铥和钬两元素结合效率最高,分别达到了92.5%和89.9%;稳定性考察结果表明,质量标签在4 ℃下放置一周仍可检测到95%,若将标记好的标签用于定量研究,则放置时间不能超过两周;多金属标记质量标签可以共洗脱;两种金属浓度差不超过6倍时,由离子抑制带来的影响较小;离子交换结果表明,只有很少部分发生了离子交换,对标记实验没有影响。     

MALDI-TOF质谱法检测人血清中沙林-丁酰胆碱酯酶加合物

对生物医学样品进行化学毒剂分析检测是禁止化学武器组织（OPCW）核查小组在毒剂指称使用调查中收集事实的方法之一。丁酰胆碱酯酶（BChE）作为有机磷毒剂在体内的作用靶点,是有机磷毒剂染毒检测的最佳生物指示物之一。利用亲和固相萃取（SPE）技术进一步发展了样品预处理方法,建立了血液样品中染毒BChE的分析方法;利用胰蛋白酶酶解方法,采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）比较了血液中BChE在沙林染毒前后的肽指纹谱变化。该方法灵敏度高、快速简便,可用于OPCW生物医学样品中毒剂暴露染毒的追溯性检测。     

三苯胺偶氮化合物的MALDI-TOF质

利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法分析三苯胺偶氮化合物。在正、负离子检测模式下,考察了基质、离子化试剂、样品浓度对分析结果的影响。结果表明:基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱表征三苯胺偶氮化合物时,用咔啉作基质,负离子检测,可以得到较好的质谱图。     

利用MALDI-TOF质谱技术研究胰岛素水解和酶切过程

利用海牛卵制备的模拟微量混合内切酶体系，用基质辅助激光解吸电离-飞行时间(MALDI-TOF)质谱技术研究了胰岛素在不同酸碱度和还原条件下的水解和酶解过程。实验结果为研制具有高生物利用度的胰岛素纳米粒口服制剂及选择具有适当耐酸碱及还原特性的包装材料提供了科学依据。     

MALDI-TOF分析多肽指纹图谱的进展与应用

蛋白组学研究是目前生命科学研究领域中的一大热点，蛋白组学研究中的关键技术之一是如何得到准确的多酞指纹谱图，以保证蛋白质的准确定性。基于方便、快速、简捷的要求，基体辅助激光解吸电离一飞行时间质谱(MAlLDI-TOF)技术是目前分析多肽指纹谱图中最常用的方法。     

基于基质辅助激光解吸-电离质谱的磷脂分析和成像的基质体系与制样方法

由于磷脂在神经传递和生物膜功能方面的重要作用,磷脂分析已成为目前脂质组学研究的热点,而基质辅助激光解吸-电离成像质谱(MALDI-IMS)是磷脂分析和成像的先进技术。针对磷脂特点,优化基质溶液组成并建立合适的基质制样与覆盖方法是最关键的环节。为了建立具有高真空稳定性(稳定存在2h以上)、耐高频率激光辐射、无基质峰干扰、分布均匀且不引起分析物位移、能全面解吸-电离不同结构与浓度的磷脂,并准确表征其空间分布情况的基质体系,不少研究者进行了大量的研究。本工作从基质类型变化出发,综述了近10年来MALDI-IMS用于生物组织磷脂分析和成像的基质体系及制样方法,并对其发展前景进行了展望。     

基于UPLC-Q-TOFMS的血清磷脂组学前处理方法

磷脂在细胞调控以及辅助因子方面起着重要作用,对生物样本中的磷脂进行分析有助于深入了解磷脂在有机生物体内的生理功能及其与疾病发生之间的关系。本研究基于超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)的磷脂组学分析方法,对磷脂分析所采用的流动相组成、提取溶剂和超声辅助提取时间等条件进行优化。结果表明:采用流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为含0.1%甲酸的乙腈-异丙醇溶液(50∶50,V/V)时,可有效地分离磷脂化合物,且重现性较好(保留时间RSD值均小于0.1%,峰面积RSD值均小于10%);热图结果表明,以甲醇-乙腈溶液(1∶9,V/V)作为提取溶剂,超声辅助提取时间为2min时,磷脂种类提取能力与去除非磷脂种类脂质干扰最优;主成分分析得分图和载荷图分别表明该方法具有良好的重复性和磷脂种类提取能力。该方法不仅能够满足不同种类血样的磷脂组学分析,还可应用于临床磷脂组学研究。     

MALDI质谱成像技术在非小细胞肺

采用基质辅助激光解吸电离时间飞行质谱成像技术分析组织切片已在基础与临床医学研究中迅速发展。质谱成像技术通过对冰冻组织切片表面的质谱扫描可以快速直观地得到组织中的分子,如蛋白、多肽等分布信息。采用质谱成像技术对人的非小细胞肺癌组织切片及癌旁组织切片进行研究,对基质覆盖方式和质谱条件进行了优化,初步建立了以质谱成像法寻找非小细胞肺癌中生物标志物的方法。在-20℃制备10μm的冰冻组织切片,用15g.L-1的α-腈基-4-羟基肉桂酸(含0.1%三氟乙酸)的50%乙腈水溶液,以气流辅助喷洒的方式覆盖在组织切片表面,循环10次,置于干燥器中待干后,用正离子反射式和线性模式分别进行质谱扫描。通过对来自3位患者的10对肺癌/癌旁组织研究,结果表明,癌组织中有m/z3000~3500范围内的特征性簇峰出现。质谱成像技术用于非小细胞肺癌能够直观地在分子水平上反映出癌组织和正常组织间的差异,有望进一步提高肺癌临床诊断的准确度。     

新型环状聚酰亚胺齐聚物的基质辅

通过两步法以苯均四酸二酐和芳香二胺单体合成了芳香环状聚酰亚胺,并且用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对其结构进行表征。以1,8,9-蒽三酚为基质,二甲基甲酰胺为溶剂,正离子方式记录谱图,谱图中可以观测到环状齐聚物的氢、钠、钾三组加合分子离子峰。质谱数据表明:环状聚酰胺酸室温放置时,部分三聚体转化为二聚体,可提高环状二聚体的收率。     

The application of Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionisation Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) to the analysis of lubricants. Part 2. used polyol ester aviation turbine engine oils

In the present work, Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionisation Time-of- Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) is demonstrated to be a valuable technique in the characterisation of used polyol ester oils, and one which includes details of the base-oil and additive degradation chemistry. The results are confirmed by GC/MS and ¹³C-NMR data.     

The application of matrix-assisted laser desorption/lonisation time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) to the analysis of lubricants. part 1. polyol ester aviation turbine engine oils

In the present work, Matrix-Assisted Laser Desorption/lonisation Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOFMS) is demonstrated to be a valuable method for the analysis of synthetic polyol ester turbine engine oils. A softionisation technique, it generates, under adequate experimental conditions only, (quasi-)molecular ions and allows detection and identification of all components including di- and tripentaerythritol esters and oligomeric additives, without pre-separation.     

基于贝叶斯-神经网络筛选矽肺早期标志物及建立诊断模型

应用液体芯片-飞行时间质谱技术检测了79例早期矽肺组和25例非暴露正常对照组的血清蛋白质.以贝叶斯判别法的最小错误率为目标函数,借助遗传算法全局优化搜索能力,筛选出能代表早期矽肺病人分类特征的最小最优差异蛋白质谱峰子集.用选定的差异蛋白质谱峰子集建立早期矽肺的神经网络诊断模型,该模型的特异性为96%,敏感性为96.25...     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在聚合物表征中的应用

综述了基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）的基本原理，基质选择和样品制备方法、分析离子化试剂等因素对实验结果的影响，以及造成质量歧视的原因。并阐述了MALDI技术在确定聚合物相对分子质量分布，聚合物末端基团，共聚物组成和推断反应及降解机理上的应用。     

在线纯化技术应用于MALDI-TOFMS测定溶菌酶的分子量

在用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)测定蛋白质分子量的过程中,一些盐和蛋白质变性剂经常大大抑制样品信号,产生一些难以解析的离子峰,因此测试前应尽可能去除样品中的添加剂。为此,本研究建立了MALDI—TOFMS测试中在线纯化蛋白质样品的新方法。采用硝酸纤维素膜作为固相载体,将标准蛋白质溶菌酶制成含6 mol/L盐酸胍变性剂、2％SDS表面活性剂的100 mmol/L Tris—HCL溶液进行质谱测定。结果表明:新方法简单、快速,可明显增强离子峰的强度,提高测定蛋白质分子量的灵敏度。