不同加工玄参药材中多元功效成分的含量测定及灰色关联度分析

建立了超高效液相色谱-三重四极杆-线性离子阱质谱（UPLC-Qtrap-MS/MS）同时测定玄参药材中环烯醚萜苷类、苯丙素苷类和有机酸类等12种功效成分的方法,分析了不同加工方法对玄参药材中多元功效成分含量的影响,并采用UPLC-Qtrap-MS/MS技术同时测定其中的12种功效成分含量,用灰色关联度分析法对多元功效成分进行综合评价。结果表明,12种功效成分在一定浓度范围内的线性关系良好,相关系数均大于0.999 0,加标回收率为95.82%~99.35%,相对标准偏差（RSD）小于2.44%;不同加工方法对玄参中多元功效成分含量具有一定的影响,灰色关联度分析结果显示,阴干法和完整药材蒸后烘干的样品综合质量较好。该实验揭示了加工对玄参中多元功效成分的影响,可为优选玄参适宜产地加工方法提供基础资料,同时为玄参药材内在质量的综合评价提供方法参考。     

HPLC-ESI-Q-TOF MS/MS分析肉苁蓉拟雌激素活性部位入血成分

为深入研究肉苁蓉(Cistanche deserticola Ma.)活性部位体内作用的物质基础,应用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF MS)技术对肉苁蓉拟雌激素活性部位入血成分进行分析,并与空白血清、肉苁蓉拟雌激素活性部位和对照品之间的色谱图和质谱碎片信息进行对比,共鉴别出13个化学成分,其中包括6个药材原型:京尼平苷酸、红景天苷、肉苁蓉苷A、松果菊苷、毛蕊花糖苷,肉苁蓉苷D;7个代谢成分:3,4-二羟基苯乙醇苷、甲基化毛蕊花糖苷、乙酰化肉苁蓉苷G、3,4-二羟基苯乙醇、乙酰基管花苷B、肉苁蓉苷B葡萄糖醛酸代谢物、甲基化3,4-二羟基苯乙醇苷。该方法可为进一步研究肉苁蓉药理活性和作用机理提供理论支持。     

Semi-LC/MS技术快速定量分析黄芪样品中黄芪甲苷含量

为了测定黄芪中的黄芪甲苷含量,应用半高效液相色谱-质谱串联技术（Semi-LC/MS）,以薯蓣皂苷为内标化合物,仅用一段色谱保护柱分离掉大部分干扰性成分,同时使目标化合物富集,采用Waters公司的多反应监测（MRM）扫描模式检测。结果表明：黄芪甲苷在2.85~57.0 mg/L的范围内线性关系良好,稳定性和重复性实验RSD<3%,样品回收率达98.9%。Semi-LC/MS方法可以对黄芪样品中黄芪甲苷进行快速定量分析,是一种黄芪甲苷的简单、高效、灵敏的定量检测方法。     

热脱附-气相色谱/质谱联用法分析生、炙乳香挥发性成分

为了研究天然乳香的挥发性成分及生、炙乳香挥发性成分的异同,为乳香挥发油的工艺优化和品质评估提供科学的依据,同时为固体挥发性成分分析提供新思路,采用热脱附-气相色谱/质谱联用技术直接对自然状态下乳香颗粒的挥发性成分进行分析。结合NIST 08标准谱库检索和Mass Works^TM质谱解析软件的分析结果,在分离出的40余种挥发性成分中,最终确定出20种化学成分。结果表明：生、炙乳香中的挥发性成分主要由单萜、醇及酯类物质构成,其中以醋酸辛酯含量最高,约占挥发性成分的50%;其次为 1-辛醇、芳樟醇、乙酸龙脑酯,在生乳香中的含量分别为19.44%、2.27%、2.64%,在炙乳香中的含量分别为9.12%、2.61%、1.33%。     

藏药印度獐牙菜化学成分的UPLC-ESI-Q-TOF MS分析

采用超高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-Q-TOF MS)技术对印度獐牙菜的化学成分进行定性分析。选取Acquity HSS T3色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm),用含0.1%甲酸的乙腈-水(含0.1%甲酸)溶液作为流动相进行梯度洗脱。采用ESI离子源,在正、负离子模式下扫描,通过对精确质谱信息及元素组成的分析,结合Scifinder数据库、相关文献和对照品信息,共鉴定出24个化学成分,包括6个环烯醚萜、11个口山酮、2个黄酮、2个异香豆素、2个酚类及1个三萜。其中,马钱苷酸、异芒果苷、红白金花酸、苦当药酯苷、3-氧去甲双口山酮苷和鸢尾酚酮等6种化合物为首次从该药材中发现。结果表明,UPLC-ESI-Q-TOF MS技术可快速、灵敏地鉴定印度獐牙菜中的化学成分,可为有效控制该药材质量,阐明该药的药效物质基础提供实验依据。     

HPLC-MS/MS法快速测定淀粉生物粘附材料特异性结合糖类物质的含量

研究了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定淀粉生物粘附材料与糖残基特异性结合实验中,岩藻糖、半乳糖、α-甲基甘露糖苷和N-乙酰葡萄糖胺4种糖类物质含量的分析方法。将反应后的样品直接离心过滤后即可利用HPLC-MS/MS进行定性定量分析。以V(乙腈)∶V(水)=80∶20的溶液作为液相色谱流动相,质谱采用电喷雾负离子电离方式扫描,以多反应监测(MRM)模式进行定量分析。在添加水平为1.0~40.0 mg.L-1范围内,岩藻糖的回收率为111.0%,相对标准偏差(RSD)为6.55%;在添加水平为1.0~80.0 mg.L-1范围内,半乳糖、α-甲基甘露糖苷和N-乙酰葡萄糖胺的回收率分别为106.5%、99.0%和91.0%,相对标准偏差分别为7.78%、6.64%和5.68%。4种糖类物质的方法检出限(S/N≥3)分别为0.1mg.L-1(岩藻糖),1.0 mg.L-1(半乳糖),0.1 mg.L-1(α-甲基甘露糖苷)和0.5 mg.L-1(N-乙酰葡萄糖胺)。该方法可用于评价淀粉粘附材料和糖类物质的特异性结合,为其他领域中糖类物质含量的测定提供可借鉴的方法。     

基于UPLC-Q-TOF MS技术的血栓心脉宁片成分分析

为全面了解中药大品种血栓心脉宁片(XXT)化学成分,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-Q-TOF MS)测定该复方制剂的小分子成分(100～1 500 u),通过UNIFI天然产物分析平台,比对各成分的精确分子质量、保留时间及质谱碎片离子信息,分析鉴定各化合物结构。结果表明,在XXT中共鉴定出187种化学成分,包括三萜皂苷类、菲醌类、蟾蜍甾二烯类和甾体类及其他结构类型的化合物。血栓心脉宁片富含小分子化学成分且结构类型多样,是其发挥抗血瘀活性及多靶点作用机制的物质基础。该研究可为阐明XXT的药效物质基础和提升质量控制标准提供数据参考。     

基于UHPLC-LTQ-Orbitrap的发酵玫瑰茄化学成分筛查和研究

本研究采用高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道质谱（UHPLC-LTQ-Orbitrap MS）技术,在电喷雾负离子模式下,对玫瑰茄水提液及其发酵液中有机酸类、黄酮类、花青素类和木质素类化学成分进行分析鉴定。选取Agilent Zorbax SB C18色谱柱（250 mm×4.6 mm×5 μm）,以0.1%甲酸水溶液（A）-甲醇（B）为流动相,流速1 mL/min,梯度洗脱分析。根据高分辨质谱提供的精确相对分子质量数据和多级质谱碎片离子,获取目标化合物的相对分子质量和结构信息。结合保留时间、对照品及相关参考文献等信息,共筛选鉴定出41种化合物,包括34种有机酸类、4种黄酮类、2种花青素类以及1种木脂素类。结果表明,玫瑰茄发酵前后,其活性成分的种类及含量均呈现不同程度的变化,该方法阐明了玫瑰茄发酵前后化学成分的变化,可为玫瑰茄的进一步研究提供参考。     

UPLC-Q TOF MS~E与镜像对比分析四种麻黄炮制过程的成分变化

利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q TOF MS~E)技术采集麻黄和其不同炮制品的复杂化学成分数据,通过对比分析,探究蜜炙、醋制、酒制、炒炭4种炮制过程中麻黄非挥发性化学成分的变化。根据时间依赖型质谱扫描模式(MS~E)采集的超高精度样品数据快速识别麻黄及其炮制品中的主要化学成分,并结合镜像对比分析,总结不同炮制工艺对化学成分与变化趋势的影响。结果显示,与生品麻黄相比,炮制品中共有4类主要成分:生物碱、黄酮、烯烃和有机酸,21种非挥发性化学成分发生变化。其中,生物碱类成分均有所下降,以酒制和炒炭炮制品下降最多;黄酮、烯烃和有机酸类成分经蜜炙后含量上升,而在其他炮制品中含量下降。麻黄及其炮制品物质基础复杂,药效是多类成分共同作用的结果,不同炮制过程会使麻黄的化学成分发生明显变化,炮制品功效可能会随之改变,该方法可为麻黄炮制的现代化研究提供物质基础,也可为临床区别用药提供借鉴。     

基于UPLC-TOF-MS分析人参麦冬配伍后皂苷类成分的变化

利用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术（UPLC-TOF-MS）分析人参麦冬药对配伍后人参皂苷的变化,从化学成分层次阐释其配伍机制。采用Acquity BEH C_18色谱柱,流动相为0.1%甲酸水溶液和乙腈溶液梯度洗脱,电喷雾电离离子源V模式检测,建立基于UPLC-TOF-MS的人参麦冬药对配伍的化学指纹图谱,数据分析采用MassLynx 4.1软件通过主成分分析法和正交偏最小二乘判别法分析药对配伍在合煎过程中人参皂苷的成分变化,找出差异变化显著的化学成分。结果表明：人参麦冬药对合煎液与合并液相比,8种皂苷成分发生显著变化,其中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、丙二酸甲酰基人参皂苷Rb1的含量减少,而人参皂苷Rb3、丙二酸甲酰基人参皂苷Rb2、丙二酸甲酰基人参皂苷Rc、人参皂苷Rf的含量增加,说明麦冬与人参配伍改变了人参皂苷成分的含量,这可能是麦冬配伍人参作用的物质基础。     

基于UPLC-Q-TOF MS研究煨制对雷公藤化学成分的影响

雷公藤具有清热解毒、祛风通络、消肿止痛等功效,但其严重的毒副作用限制了临床应用。研究发现,雷公藤经200℃煨制后有显著的减毒增效作用。为阐明雷公藤煨制减毒增效的物质基础,提高雷公藤临床应用的安全性与有效性,本研究采用UPLC-Q-TOF MS结合主成分分析(PCA)法和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法对雷公藤煨制后的化学成分变化进行统计,根据一级和二级质谱信息,结合数据库、文献以及对照品对照进行差异成分鉴定。结果表明,煨制后雷公藤中共有81种成分的含量变化显著,主要为生物碱,占69%。鉴定了其中35种成分,有26种成分含量降低,7种成分含量升高,新产生2种成分。煨制后,生物碱和雷公藤红素的含量变化显著,这两类成分均为雷公藤抗炎有效成分,且毒性较大。因此,生物碱和雷公藤红素的含量变化可能是雷公藤煨制减毒增效的物质基础。该研究可为研发新的抗类风湿性关节炎的先导化合物提供参考。     

UPLC/Q-TOF MS/MS负离子模式下环氧烷型环烯醚萜苷的结构表征

利用四极杆飞行时间串联质谱(Q-TOF MS/MS)研究4个环氧烷型环烯醚萜苷同系组分(胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ、胡麻属苷、梓醇)的质谱裂解行为。在大气压化学电离源负离子(APCI~-)模式下,该类同系组分主要的裂解途径除了常见的母环上取代基的断裂,如中性丢失H_2O、CO_2和葡萄糖基等,生成~(1,6)F~-、~(1,4)F~-等特征碎片离子;另外还存在葡萄糖基环的断裂,生成~(0,4)A_1~-、~(1,4)A_1~-及~(2,4)A_1~-等碎片离子。通过对上述环氧烷型同系组分的质谱裂解行为进行归纳总结,依据其裂解规律,利用UPLC/Q-TOF MS/MS对胡黄连提取物中的环烯醚萜苷类化合物进行表征,共初步鉴定出10个环烯醚萜苷,其中包括8个环氧烷型环烯醚萜苷(胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ、胡黄连苷Ⅲ、胡黄连苷Ⅳ、黄金树苷、梓苷、婆婆纳苷和Piscroside B)和2个环戊烷型环烯醚萜(Boschnaloside和Mussaenosidic acid)。该方法有助于推动胡黄连在物质基础表征、质量控制和临床应用上的开发和利用。     

黄泥煨制人参中皂苷成分的RRLC-Q-TOF MS分析

人参作为新资源食品,有多种炮制方法的应用。本研究对于黄泥煨制的人参化学成分是否安全、可靠提供了借鉴。利用高分离度快速液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(RRLC-Q-TOF MS)法研究黄泥煨炮制方法的人参化学成分。鲜人参黄泥煨制的样品溶解离心过滤后,采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,以0.1%甲酸水-乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱,高分辨质谱进行检测,Masshunter Qualitative Analysis软件与人工相结合进行数据分析。结果表明,本研究鉴定了31种人参皂苷,比较了黄泥煨制人参与其他炮制方法人参中人参皂苷的相对百分含量差异,同时检测到F_2、Rg_3等稀有人参皂苷。该研究可为人参的使用提供更多的途径,能够为开发人参的多种保健功能提供依据。     

板蓝根化学成分及抗氧化活性的研究

采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）和直接进样的电喷雾串联质谱法（ESI-MS/MS）分析板蓝根乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和95%乙醇提取物的化学成分。同时,采用铁离子还原能力法（FRAP）评价板蓝根的抗氧化活性,并通过自由基清除能力法（DPPH）对FRAP法的测试结果进行验证。结果表明：在板蓝根乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和95%乙醇提取物中共鉴别出吲哚类、喹唑酮类、有机酸类、核苷类、嘌呤类、氨基酸类、黄酮类以及糖类等28个化合物。研究发现,板蓝根抗氧化活性部位主要集中在极性较低的化学组分中,吲哚类、喹唑酮类和有机酸类化合物是其主要的有效成分。该方法简便、快捷、灵敏,可为中药化学成分分析和抗氧化活性评价提供方法参考。     

大青叶化学成分及抗氧化活性研究

采用高效液相色谱-大气压化学电离质谱法（HPLC-APCI/MS）和直接进样的电喷雾串联质谱法（ESI-MS²）分析大青叶乙酸乙酯、正丁醇和95%乙醇提取物的化学成分。采用Kromasil C18分析柱（4.6 mm×250 mm×5 μm），以0.15%乙酸/水-甲醇为流动相进行线性梯度洗脱，流速0.8 mL/min，柱温25 ℃；采用全波长扫描紫外检测器,检测波长分别为254 nm和265 nm；采用大气压化学电离源和电喷雾电离源，在正、负两种离子模式下进行检测。结果表明，在大青叶乙酸乙酯、正丁醇和95%乙醇提取物中共鉴别出39种化合物，包括生物碱类、有机酸类、核苷嘌呤类、氨基酸类、黄酮类、糖类、卟啉类以及含硫类成分化合物。采用铁离子还原能力法（FRAP）对大青叶的抗氧化活性进行评价，并用自由基清除能力法验证FRAP法的测试结果。抗氧化活性评价结果表明，大青叶抗氧化活性部位主要集中在极性较低的化学组分中，吲哚类、奎唑酮类和有机酸类化合物是其主要有效成分。该方法快捷、灵敏，适用于中药化学成分分析和抗氧化活性评价。     

UPLC-QTOF MS法比较赤芍、白芍煎液化学成分差异

为了解中药赤芍和白芍煎液的化学成分差异,采用UPLC-QTOF MS技术对市场上正规销售的赤芍和白芍饮片样品进行分析比较,并用主成分分析和正交偏最小二乘辨别分析进行数据统计,同时采用与标准品比较、基于自制自动化预鉴别软件的一级质谱精确质荷比分析和二级质谱碎片分析进行成分鉴别。结果表明,氧化芍药苷和芍药内酯苷分别是赤芍和白芍煎液最重要的差异性化合物。此外,赤芍药苷、1’-O-benzoylsucrose、牡丹皮苷F、牡丹皮苷C/苯甲酰羟基芍药苷、牡丹皮苷E、(1S,2S,4R)-trans-2-hydroxy-1,8-cineole- B-D-glucopyranoside、蔗糖、没食子酰芍药苷/没食子酰芍药内酯苷等在赤芍、白芍煎液中的含量差异明显。     

基于UPLC-Triple TOF MS/MS技术分析不同产地何首乌的差异化学成分

为了探讨不同产地对何首乌代谢物合成积累的影响,采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间高分辨质谱法(UPLC-Triple TOF MS/MS)结合多元统计分析技术对不同产地何首乌中差异性化学成分进行研究。通过二级串联质谱分析,对其质谱数据进行峰匹配、峰对齐、滤噪处理等,以提取特征峰;用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)进行数据处理;根据一级质谱精确质荷比和二级质谱碎片信息,结合软件数据库搜索及相关文献进行成分鉴定。结果显示,4个不同产地的何首乌样品间的化学组成可得到有效区分;初步筛选出36种差异显著的化学成分并鉴定出33种成分,其中有12种共有差异化学成分呈现不同的变化规律。该结果可为揭示产地对何首乌代谢物合成积累的影响规律提供基础资料。     

碰撞诱导解离和高能碰撞解离方式在褐藻胶寡糖结构分析中的比较和应用

利用组合式高分辨质谱仪（LTQ Orbitrap XL）对均一褐藻胶寡糖,包括甘露糖醛酸寡糖和古洛糖醛酸寡糖进行二级质谱分析,比较了常规的碰撞诱导解离（CID）和高能碰撞解离（HCD）在寡糖结构分析中的差异,并应用HCD技术分析甘露糖醛酸寡糖和古洛糖醛酸寡糖的结构差异。研究发现,HCD可避免CID中的1/3效应,而且可以提供更多的糖环断裂碎片信息,如^2,5A₂（m/z291）、^2,4A（m/z 235、411）、^2,5A脱水（m/z 101、277、453）以及Z₂脱羧碎片（m/z 307、483、659）等,进一步验证了Z₂脱羧碎片是区别甘露糖醛酸与古洛糖醛酸的特征碎片。同时,HCD能够提供丰富的裂解碎片信息,这为褐藻胶寡糖的结构解析提供了依据。     

High-ThroughputScreeningofIllegalDrugsinComplexMatrixbyLiquidChromatographyTandemQuadrupole-TimeofFlightMassSpectrometry

Tandem quadrupole-time of flight(QTOF) mass spectrometry can provide the high accurate mass (＜2×10^－6) of parent and product ions for small and large molecules with excellent sensitivity and high mass resolution. Especially for the trace analysis in complex matrix(e.g. food, serum, fluid, environmental matrix), HPLC-QTOF plays an important role in identification and determination. In this study, a 250-illigal drug database based on accuracy mass was established, and a process for rapid screening and confirming of non-target illegal drugs was presented using urine and oral fluid preparation. The real samples were rapidly screened for illegal drugs using the molecular feature Extraction(MFE) algorithm of the Agilent Mass Hunter software, the established drug database, and accurate mass spectra using liquid-chromatography(LC), electrospray(ESI), quadrupole-time-of-flight mass spectrometry(Q-TOF LC/MS). The TOF data was processed by MFE, based on which the ions from noise and background were greatly removed. Using the MFE algorithm, a compound list containing interesting ions were contracted and the related chemical formula were calculated based on accuracy mass and isotope ratio calculation. Accurate masses of the ions detected and identified by MFE were compared to the exact masses of compounds in the database. Positive compounds were then further confirmed using the MS/MS(Q-TOF LC/MS) mode. Finally, the product ions from MS/MS mode are used for the determination of illegal drugs in the positive samples, and the methodology(linearity, repeatability and sensitivity) were investigated.