裸燕麦谷蛋白酶解物的纯化及其清除自由基活性研究

利用碱性蛋白酶对裸燕麦谷蛋白进行酶解,采用超滤及离子交换层析对酶解物进行纯化,然后考察各分离组分清除·OH、DPPH·能力。结果表明:超滤法分离裸燕麦谷蛋白酶解物所得的5个组分中,组分Ⅰ清除·OH能力最强。其质量浓度为3 mg/m L时清除·OH能力高于90%。进一步对组分Ⅰ离子交换分离,所得的4个组分中,组分D清除·OH(IC501.532 mg/m L)、清除DPPH·(IC501.278 mg/m L)能力高于其他3个组分。分离组分D为碱性氨基酸,清除·OH与DPPH·能力都强于裸燕麦谷蛋白酶解物。     

裸燕麦球蛋白的分离纯化及其抗氧化活性研究

采用Osborne 法提取裸燕麦球蛋白,利用盐析、SephadexG-100 凝胶过滤层析、SDS-PAGE 电泳等方法进一步纯化,并对各球蛋白组分进行抗氧化能力的研究。结果表明：裸燕麦球蛋白的硫酸铵饱和度为60%。在柱层析分离条件下(洗脱速度为3～7mL/10min,缓冲溶液为蒸馏水),得到的组分I 分子质量范围分布在44、34～29、25kD,组分II 分子质量范围分布在25、23、19kD。组分I 清除3 种自由基的作用较强, 清除·OH、O2·、DPPH 自由基的IC50 分别为 3.73、0.016、1.033mg/mL,其中对O2·清除能力大于VC 对O2·的清除能力。组分II 清除3 种自由基能力均低于分离组分I、盐析后球蛋白和球蛋白粗提物。     

猪皮胶原蛋白酶解及其酶解产物的抗氧化活性

以新鲜猪皮为原料,利用Alcalase水解胶原蛋白,并对影响Alcalase水解过程的各个因素进行研究,通过对水解度和超氧阴离子自由基(O2－ ·)清除率的测定,确定Alcalase水解猪皮胶原蛋白的最适条件;研究在最适条件下制备的不同质量浓度的猪皮胶原蛋白酶解液对DPPH自由基和O2－ ·的清除效果。结果表明：Alcalase水解猪皮胶原蛋白的最适条件为：pH7.5、温度55℃、酶与底物比6000U/g、底物质量浓度40mg/mL,水解时间4h;在此水解条件下,水解度达到9.55%,O2－ ·清除率达到60.11%;在相应质量浓度10～50mg/mL范围内,猪皮胶原蛋白酶解液的DPPH自由基最大清除率为95.06%,IC50为3.89mg/mL;O2－ ·最大清除率为65.89%,IC50为16.43mg/mL。猪皮胶原蛋白酶解液具有较强的自由基清除能力。     

不同分子质量鲍鱼外套膜酶解物抗氧化活性研究

研究鲍鱼外套膜酶解物(AMH)及其不同分子质量组分的抗氧化活性。采用中性蛋白酶水解鲍鱼外套膜制得AMH,通过超滤得到分子质量分别为小于1kDa和1～3,3～5,5～10kDa的4种酶解物组分;考察AMH和不同分子质量组分的体外抗氧化活性。结果表明:AMH清除DPPH自由基、OH自由基和亚铁离子螯合能力的IC50值分别为11.76,12.07,4.04mg/mL;经过超滤分离后,其抗氧化活性明显增强,且1～3kDa分子质量范围组分的清除DPPH自由基和OH自由基能力最强,3～5kDa分子质量范围组分的亚铁离子螯合能力最强。     

中华真地鳖抗氧化肽的分离及其抗氧化活性的研究

以中华真地鳖酶解物为原料,分离抗氧化肽,并对其抗氧化活性进行研究。采用DEAE-SephadexA50离子交换层析分离中华真地鳖抗氧化肽,得到FⅠ、FⅡ、FⅢ3个组分。其中FⅡ组分对O2-·自由基、OH.自由基、DPPH.自由基的清除能力最强,清除率分别为86.83%(10mg/mL)、92.28%(0.7mg/mL)、68.06%(1.8mg/mL),其半抑制质量浓度(IC50)分别为5.98、0.27、1.09mg/mL。利用高效液相分离FⅡ组分,以0%～30%乙腈为流动相,在进样量1mg时分离效果较好。     

青鱼肉活性肽的制备及其抗肿瘤活性研究

以青鱼肉为原料,经二步酶解、凝胶色谱分离纯化制备抗氧化和抗肿瘤活性肽。首先以抗氧化活性和水解度为评价指标,采用单因素和正交试验优化青鱼肉活性肽的制备工艺;然后采用凝胶色谱进行分离纯化,得到不同分子质量多肽组分并分析其氨基酸组成、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力和抗肿瘤活性。结果表明,二步酶解青鱼肉的最优酶解组合为碱性蛋白酶-复合蛋白酶,最佳制备工艺为:pH 8.00、酶解温度50℃、料液比2∶10(g∶mL)、酶添加量6000 U/g、酶解时间3 h,在此条件的二步酶解物清除DPPH自由基的半抑制浓度(half inhibiting concentration,IC 50)为9.52 mg/mL;经Sephadex G-15分离得到5个肽组分,其分子质量范围为130~1397 Da;抗氧化实验表明,组分IV具有最强的DPPH自由基清除能力,其IC ₅₀为3.17 mg/mL,为二步水解物的3倍。细胞增殖抑制实验发现,10 mg/mL组分IV对HepG 2细胞抑制率为92.54%,表明青鱼肉活性肽同时具有抗氧化和抗肿癌活性。     

海参脏器多糖体外抗氧化活性研究

研究海参脏器多糖HPS1、HPS2在体外对羟自由基(·OH)、超氧阴离子(O2-·)、以及1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH·)自由基的清除能力.结果表明,HPS1、HPS2对·OH、O2-·和DPPH·自由基均有一定清除作用,且随着多糖质量浓度的增大,其抗氧化活性逐渐增加.HPS1对·OH、O2-·和DPPH.自由基清除能力IC50分别为0.89、0.98、0.31mg/mL;HPS2对·OH、O2-·和DPPH·自由基清除能力IC50分别为0.64、0.78、0.24mg/mL.2种多糖对DPPH.自由基的清除活性尤其明显.HPS2对于3种自由基的抗氧化活性均强于HPS1.     

鲨鱼肉酶解物的抗氧化作用及其稳定性研究

以还原能力和金属离子螯合能力、清除DPPH·、O2-·、OH·自由基能力为指标,考察鲨鱼肉酶解物的抗氧化活性,同时以清除自由基DPPH·的活性为指标,分析温度和pH值对其抗氧化作用稳定性的影响。结果表明:鲨鱼肉酶解液产物具有一定的还原能力和金属离子螯合能力,其清除DPPH·、O2-·、OH·自由基的IC50值分别为10.16、23.71、19.82mg/mL。酶解产物耐热性强;在酸性环境中,鲨鱼肉酶解液能较好地保持其抗氧化活性,但在碱性环境中抗氧化活性丧失较快。     

马氏珠母贝肉酶解产物清除自由基活性的研究

对马氏珠母贝肉的风味酶酶解产物对超氧阴离子自由基、羟自由基及DPPH·的清除效果进行了研究.结果表明,马氏珠母贝肉酶解产物对三种自由基均有一定的清除活性,量效关系明显;其清除O2-·、·OH、DPPH·三种自由基的IC50分别为1.513、1.423、2.618mg/mL,清除自由基能力总体高于牡蛎和海湾扇贝提取物.     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备抗氧化多肽

为优化碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白制备抗氧化多肽的条件,采用响应面分析法,以·OH清除率为响应值,研究酶解温度、酶用量、酶解p H值对制备抗氧化肽的影响。此外,还研究了不同分子质量魔芋多肽的抗氧化活性,结果表明:最佳酶解工艺参数:底物质量分数2.25%、温度55℃、酶用量3 228 U/g底物、p H 7.84、水解时间270 min。该条件下抗氧化多肽(18.35 mg/m L)的·OH清除率为73.41%,多肽得率为75.37%。通过Sephadex G-25和Sephadex G-15串联柱分离得到5个多肽组分,其中分子质量为1 500 u和1 000 u的组分抗氧化活性较高,其清除DPPH·的IC50分别为2.82 mg/m L和3.65 mg/m L;清除·OH的IC50分别为9.03mg/m L和14.16 mg/m L;抑制大鼠肝脏自发性脂质过氧化的IC50分别为0.21 mg/m L和0.66 mg/m L;抑制大鼠红细胞H2O2诱导氧化溶血的IC50分别为0.11 mg/m L和0.22 mg/m L。     

葛根抗氧化肽的分离及清除自由基活性研究

目的：分离纯化葛根抗氧化肽并对其进行体外清除自由基活性的研究。方法：以野生葛根为实验材料,经30%的乙醇浸提、透析、冷冻干燥,进一步采用DEAE阴离子交换层析,反相高效液相色谱的方法,对葛根抗氧化肽进行纯化,对不同组分进行还原能力的测定,还原能力最强的命名为PE1。对PE1进行茚三酮反应和分子质量测定。采用邻苯三酚自氧化法、DPPH法、Fenton反应法检测PE1体外对超氧阴离子自由基、DPPH自由基、羟自由基的清除作用。结果：反相高效液相色谱检测PE1纯度,显示为单一峰,PE1与茚三酮反应呈阳性,分子质量约为746D,PE1在体外可以有效清除以上3种自由基。在质量浓度为0.652mg/mL时,羟自由基清除率可达到80.01%;在5mg/mL质量浓度条件下,对超氧阴离子自由基的清除率高达97.35%;在3.5mg/mL质量浓度条件下,对DPPH自由基的清除率达到75.02%,其IC50为2.83mg/mL。结论：PE1具有较强的清除自由基活性。     

中华真地鳖酶解短肽的抗氧化作用

目的：研究中华真地鳖酶解短肽的体内外抗氧化作用。方法：测定中华真地鳖酶解短肽体外对?OH、O2－?和DPPH自由基的清除作用;并将中华真地鳖酶解短肽灌胃,颈背部皮下注射D-半乳糖致衰老模型小鼠,以小鼠血浆和肝脏中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(T-SOD)及清除?OH活性为指标,研究其体内抗氧化活性。结果：中华真地鳖酶解短肽对?OH、O2－?和DPPH自由基有较强的清除作用,其IC50分别为0.40、8.73、1.32mg/mL;并且与模型组相比,中华真地鳖酶解短肽能显著降低模型小鼠血浆和肝脏中MDA含量(P＜0.01),显著提高其CAT活力(P＜0.05)、GSH-Px活力(P＜0.01)及清除?OH(P＜0.05)能力,显著提高小鼠肝脏T-SOD活力(P＜0.05)。结论：中华真地鳖酶解短肽有较强的体内外抗氧化作用。     

响应面法优化金蝉花多糖提取工艺及抗氧化活性分析

通过考察液料比、浸提时间及浸提温度对金蝉花多糖含量的影响,在单因素试验基础上进行响应面优化提取工艺条件,并通过测定金蝉花多糖总还原力、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine,DPPH）自由基、羟自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2－·）的能力研究其体外抗氧化活性。结果表明,金蝉花多糖适宜的提取工艺参数为浸提时间130min、浸提温度80℃、液料比50∶1（mL/g）,在此条件下金蝉花多糖含量实际值为26.14mg/g。金蝉花多糖具有较好的抗氧化能力,其清除DPPH自由基、·OH、O2－·的半抑制质量浓度（IC50）分别为28.99μg/mL、0.19mg/mL和0.30mg/mL。     

4种龙眼核提取物的总黄酮含量、体外抗菌活性与抗氧化活性

以聚酰胺吸附-硝酸铝显色法测定龙眼核水提取物、95%乙醇提取物、丙酮提取物、乙酸乙酯提取物等4种不同极性提取物的总黄酮含量,同时采用管碟法、最小抑菌浓度(MIC)法测定比较4种提取物的抗菌活性,并测定评价在二苯代苦肼自由基(DPPH自由基)体系、羟自由基体系、超氧阴离子自由基体系及抗脂质体过氧化体系中各提取物的抗氧化活性。结果表明：95%乙醇提取物的总黄酮含量最高,为(3.90±0.12)%,其抗菌活性也强于其他3种提取物,在质量浓度100mg/mL时,对大肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌、藤黄八叠球菌、金黄色葡萄球菌、白菜软腐菌、甘蓝黑腐菌7种菌的抑菌圈直径均达15mm以上,对各菌的MIC均≤100mg/mL;在不同的自由基体系中,4种提取物均对超氧阴离子自由基的清除作用相对较弱,但对清除DPPH自由基、清除羟自由基、抗脂质体过氧化均表现出较强的效果;以清除率达50%时所对应的样液质量浓度IC50作为指标比较发现4种提取物对3种自由基的的抗氧化作用由强到弱依次是水提取物、95%乙醇提取物、丙酮提取物、乙酸乙酯提取物,其中水提取物对这3种自由基的IC50分别为0.20、0.15、2.69mg/mL。可见,龙眼核的95%乙醇提取物适宜作为植物源抗菌剂,水提取物则适宜作为植物源抗氧化剂以深度开发利用。     

马兰提取物抗氧化性研究

目的：考查马兰中水提取物和乙醇提取物抗氧化活性。方法：分别以水和乙醇为提取液,探讨马兰中水提取物和乙醇提取物的抗氧化活性,包括还原能力以及清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基和H2O2的能力。 结果：提取物主要成分为黄酮类化合物。马兰水提取物的抗氧化活性为：超氧阴离子自由基(IC50 2.2μg/mL)＞H2O2(IC50 2.8μg/mL)＞羟自由基(IC50 5.6μg/mL)＞DPPH自由基(IC50 8.5μg/mL) ＞金属螯合性(IC50 28.0μg/mL)。而马兰乙醇提取物的抗氧化活性为：H2O2(IC50 2.0μg/mL) ＞超氧阴离子自由基(IC50 2.1μg/mL)>羟自由基(IC50 2.5μg/mL)> DPPH自由基(IC50 5.6μg/mL) ＞金属螯合性(IC50 51.2μg/mL)。结论：马兰提取物具有较强的抗氧化活性。     

石榴皮提取物体外抗氧化活性比较研究

研究石榴皮提取物的体外抗氧化作用。采用羟自由基(.OH)、超氧阴离子自由基(.O2-)、2,2-二苯代苦味酰基自由基(DPPH.)的生成体系,研究石榴皮提取物及绿茶多酚、没食子酸为对照,对自由基的清除能力和对小鼠肝组织匀浆脂质过氧化抑制作用。结果表明:石榴皮提取物对羟自由基、超氧阴离子、DPPH.的半清除率分别为I:C50=71.37 mg/mL、SC50=557.55 mg/mL、DC50=31.98 mg/mL;没食子酸对这3种自由基的半清除率分别为I:C50=51.85 mg/mL、SC50=289.2 mg/mL、DC50=37.65 mg/mL;绿茶多酚对这3种自由基的半清除率分别为:IC50=66.67 mg/mL、SC50=1043.91 mg/mL、DC50=22.48 mg/mL。石榴皮提取物对小鼠肝组织匀浆的脂质过氧化半抑制率EC50=5.21 mg/mL、没食子酸半抑制率EC50=22.82 mg/mL、绿茶多酚半抑制率EC50=3.47 mg/mL。研究表明石榴皮提取物较没食子酸和绿茶多酚具有良好的清除自由基及抑制脂质过氧化的能力。石榴皮提取物能有效清除羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH.自由基,抑制脂质过氧化作用,具有进一步研究和开发价值。     

花红可溶性膳食纤维的抗氧化活性

目的:以混合菌种发酵法制备的花红可溶性膳食纤维(MPSDF)为原料,研究其对.OH、O-2.和DPPH自由基3种自由基的清除作用,以及对大豆油的抗氧化效果。方法:采用.OH、O-2.体系、DPPH自由基体系和油脂过氧化值测定法,测定MPSDF对.OH、O-2.和DPPH自由基的清除率以及Schaal烘箱法对大豆油过氧化值抑制效果。结果:MPSDF对.OH和O-2.均有较强的清除能力,其EC50分别为4.63mg/mL和8.84mg/mL,但对DPPH自由基的清除率较低。MPSDF添加到大豆油中,其抗氧化效果与丁基羟基茴香醚(BHA)接近。结论:发酵法制备的花红可溶性膳食纤维(MPSDF)对.OH和O-2.均有较强的清除作用,对大豆油有很强的抗氧化作用,具有较强的抗氧化活性。     

盐渍裙带菜多糖的超声提取工艺及生物活性研究

以盐渍裙带菜为原料,采用超声波技术,通过单因素和正交试验优化了提取裙带菜多糖(PUP)的工艺条件,并且研究了PUP的抗氧化活性及抑菌活性。结果表明：提取PUP的最适宜工艺条件为超声波功率180W、料液比1:40(g/mL)、提取温度70℃、提取时间10min、提取2次,此条件下PUP提取率为2.0%。用Sevag法去除粗PUP中蛋白质、核酸等杂质,并用紫外光谱、红外光谱对脱蛋白PUP进行表征,证明产物是多糖,基本不含蛋白质、核酸。以VC为对照物,研究了脱蛋白PUP对羟自由基(•OH)和超氧阴离子自由基(O2¯•)的清除能力,结果表明PUP对二种自由基的清除效果较好,而且对O2¯•的清除能力较强,但不如VC效果好。其抑制O2¯•和•OH的IC50分别为16.50、23.31mg/mL。抑菌试验表明PUP对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌均具有良好的抑制作用。     

鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的抗氧化活性

选取铁离子还原体系和3 种自由基体系为指标,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体外清除自由基效果和抗氧化作用。采用超滤膜分离鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽组分,筛选出体外清除•OH活性最好的组分,再建立小鼠衰老模型,将分离得到活性最好的组分采用灌胃法,测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）和羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）的含量,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内抗氧化和清除自由基作用。结果表明：鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O－2•、DPPH自由基、•OH具有清除效果,质量浓度为10 mg/mL时对•OH、DPPH自由基、O－2•的清除率和对Fe3+ 的还原能力分别为70.48%、68.78%、42.53%和0.676;分子质量小于2 000 D的鮟鱇皮胶原蛋白肽组分对•OH具有较好的清除效果,IC50为15.7 mg/mL;剂量为100 mg/（kg•d）时,显著提高了皮肤中SOD、GSH-Px、CAT的活性,较模型组分别增加20.9%、41.3%和58.1%,且显著抑制MDA的形成。     

海芦笋膳食纤维抗氧化性能的研究

通过测定海芦笋膳食纤维对自由基的清除能力,研究其抗氧化性能。采用羟基自由基体系、超氧阴离子自由基体系、烷基自由基引发的亚油酸氧化体系和DPPH体系对海芦笋膳食纤维清除自由基的活性进行研究。结果显示:海芦笋膳食纤维对羟基自由基的IC50为4.15 mg/mL;对超氧阴离子自由基,在本试验测定范围内的最高清除率为40.5%;对烷基自由基的IC50为3.6 mg/mL;对DPPH自由基的IC50为6.28 mg/mL。结论:海芦笋膳食纤维对羟基自由基、烷基自由基、DPPH自由基均有较强的清除能力,对于超氧阴离子自由基的清除能力较弱。但因为膳食纤维的纯度比阳性对照物低,清除机理也可能不尽相同,因此清除自由基的效果弱于阳性对照物。