反式脂肪酸Trans C18∶1诱导内皮细胞凋亡的研究

通过检测相关细胞凋亡指标,探讨trans C18:1诱导内皮细胞的凋亡机制。采用体外细胞培养方法将不同浓度trans C18∶1与内皮细胞共同孵育后,通过吉姆萨染色,观察内皮细胞形态变化;采用流式细胞仪检测细胞的早期凋亡变化;通过试剂盒检测观察trans C18:1对凋亡酶Caspase活力的影响;最后考察Caspase抑制剂z-VAD-fmk,对trans C18∶1对内皮细胞存活率的影响。吉姆萨染色后,细胞呈典型的凋亡形态;流失细胞仪检测内皮凋亡细胞的数量明显增加;同时发现trans C18∶1引起内皮细胞的凋亡可能与Caspase-3酶激活有关,因为Caspase抑制剂又能提高trans C18∶1处理的内皮细胞存活率。     

反式脂肪酸Trans C18:1诱导内皮细胞凋亡的研究

通过检测相关细胞凋亡指标,探讨trans C18∶1诱导内皮细胞的凋亡机制.采用体外细胞培养方法将不同浓度trans C18∶1与内皮细胞共同孵育后,通过吉姆萨染色,观察内皮细胞形态变化；采用流式细胞仪检测细胞的早期凋亡变化；通过试剂盒检测观察trans C18∶1对凋亡酶Caspase活力的影响；最后考察Caspase抑制剂z-VAD-fmk,对trans C18∶1对内皮细胞存活率的影响.吉姆萨染色后,细胞呈典型的凋亡形态；流失细胞仪检测内皮凋亡细胞的数量明显增加；同时发现trans C18∶1引起内皮细胞的凋亡可能与Caspase-3酶激活有关,因为Caspase抑制剂又能提高trans C18∶1处理的内皮细胞存活卒.     

反式脂肪酸对血管内皮细胞损伤的影响

探讨不同反式脂肪酸促动脉粥样硬化(AS)的共同机制。通过采用反油酸和反亚油酸作用于人脐静脉内皮细胞,对其存活率、一氧化氮合酶(NOS)活性、一氧化氮(NO)生成量以及乳酸脱氢酶(LDH)渗出率的影响,比较不同反式脂肪酸对血管内皮细胞损伤的影响。结果表明：反式脂肪酸能抑制细胞增殖,可通过降低NOS活性影响NO分泌,能增加细胞LDH渗出率,从而影响细胞氧化应激水平,降低血管舒张能力。此外,实验发现反亚油酸对细胞损伤能力较反油酸强。     

榆干离褶伞溶栓酶对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护机制研究

目的:研究榆干离褶伞(Lyophyllum ulmarium,LU)溶栓酶对氧化应激所致损伤血管内皮细胞的保护机制研究。方法:以过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧化损伤,通过甲基噻唑基四唑(MTT)法和细胞培养上清液的乳酸脱氢酶(LDH)活性来分析细胞损伤程度;ELISA方法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;硝酸还原酶法测定细胞NO含量;Western印记法检测NF-κB p65、iNOS和eNOS蛋白表达。结果:LU溶栓酶预处理后显著提高细胞存活率,抑制过氧化氢所致的LDH、TNF-α和NO水平的升高,同时抑制NF-κB、p-NF-κB、iNOS和eNOS的表达。结论:LU溶栓酶对血管内皮细胞的保护作用是通过下调NF-κB信号通路来实现的。     

大黄酸对正常和氧化损伤内皮细胞的增殖和氧化保护作用

目的：观察大黄酸对正常和氧化损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的影响。方法：建立H2O2氧化损伤模型,采用不同浓度的大黄酸对内皮细胞进行处理,检测内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活力和超氧化物歧化酶(SOD) 活力及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 活力的变化;采用流式细胞术研究内皮细胞的凋亡情况,探讨大黄酸对内皮细胞的保护作用。结果：大黄酸浓度在16μmol/L以下时,对HUVEC的增殖无显著性影响;浓度在2μmol/L以上时,减轻HUVEC受到氧化损伤的程度,对氧化性损伤具有保护作用;同时降低了LDH释放率,下调了MDA含量,提高了NO含量和NOS、SOD、GSH-Px的酶活力,显著减少了细胞凋亡率。结论：HUVEC经2～16μmol/L大黄酸处理,可以有效减轻H2O2对其造成的氧化损伤,维持正常的生理形态。     

小檗碱活化AMPK-eNOS减轻油酸所致人主动脉内皮细胞损伤

目的：考察小檗碱对油酸所致内皮细胞损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法：以体外培养人主动 脉内皮细胞系（human aorta endothelial cells,HAEC）为受试对象;分别以油酸、油酸联合小檗碱、油酸联合单 磷酸腺苷活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）激活剂（AICAR）或抑制剂 （Compound C）处理HAEC;采用油红O染色法观察细胞内脂滴合成;采用比色法检测细胞内甘油三酯、总胆 固醇含量,硝酸还原酶法检测NO的水平,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐探针检测细胞内总活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,Western Blotting检测细胞总AMPK、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）及其磷酸化（p-AMPK、p-eNOS）水平。结果：油酸可浓度依赖性地抑制细胞增殖,小檗碱组各项指标 较正常对照组无显著性差异,油酸联合小檗碱组的细胞活性较油酸组明显好转（P＜0.01）。与正常对照组比较, 油酸组的脂质浸润程度明显,油酸在不同浓度下使内皮细胞的脂质含量呈剂量依赖性增加,加入小檗碱可明显减 少这种脂质堆积。油酸组的NO水平较正常对照组明显减少,小檗碱能显著抑制油酸所致的内皮NO水平的减少, 并且减少由于油酸所致的ROS水平的升高;油酸抑制了AMPK的活化,使p-AMPK和p-eNOS的蛋白水平明显降低 （P＜0.01）;小檗碱可明显逆转油酸所致AMPK和eNOS磷酸化水平下降,Compound C可拮抗其作用。结论：小檗 碱可减轻油酸所致血管内皮细胞损伤,或与其活化AMPK/eNOS信号相关。     

苦荞球蛋白酶解液对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

研究苦荞球蛋白酶解液(EHBG)对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。苦荞球蛋白(BG)经胃-胰蛋白酶连续酶解后制备EHBG;采用oxLDL诱导HUVEC细胞氧化损伤模型,将EHBG作用于细胞,Vc为阳性对照;MTT法检测细胞存活率,测定各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、一氧化氮(NO)含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测各组细胞中凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX1)和核转录因子(NF-κB)的表达情况。结果显示,与氧化损伤模型组比较,EHBG、BG和Vc均可提高oxLDL处理后HUVEC生存率,降低细胞培养液中MDA含量、LDH活性,升高SOD活性及NO含量;下调ox-LDL诱导的内皮细胞LOX1和NF-κB的表达,且与BG相比,EHBG的效果均较显著。表明EHBG具有抗HUVEC氧化损伤的作用,其机制可能与抑制ox LDL/LOX1/NF-κB信号通路有关。     

一氧化氮对采后油菜品质与活性氧代谢相关酶的影响

NO是植物体内重要的信号分子,其在采后保鲜方面的应用是近年研究的焦点。本研究以油菜(Brassicarapa L.ssp.chinensis,cv.Huaguan)为试材,使用一氧化氮(NO)供体100μmol/L硝普钠(SNP)-0.04mp真空渗透处理2min,贮藏于25℃相对湿度(RH)70%的环境中。在贮藏后0、1、2、3、4d分别测定油菜的腐烂率及黄变率;并测定贮藏过程中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT),抗坏血酸过氧化物酶(APX)和谷胱甘肽还原酶(GR)的活性。结果表明,SNP处理显著降低了采后油菜的黄变率及腐烂率;提高了油菜贮藏期间SOD、APX的活性,降低了1～3d的GR活性;贮藏1d时提高了CAT的活性,2d之后抑制CAT活性。说明100μmol/L SNP处理提高了油菜采后品质,并可能通过提高贮藏期前期CAT活性和整个贮藏期间SOD及APX的活性延缓油菜采后品质的下降。     

辣木异硫氰酸酯改善C2C12肌管细胞胰岛素抵抗

目的: 建立C2C12肌管细胞胰岛素抵抗(C2C12-IR)模型,探讨辣木异硫氰酸酯(MIC-1)对C2C12肌管细胞胰岛素抵抗的影响。方法:利用棕榈酸(PA)诱导C2C12肌管细胞,建立稳定的C2C12-IR模型,并用不同浓度MIC-1(0,2,4,8,16 μmol/L)处理细胞16 h。采用MTT法检测C2C12-IR细胞存活率,并观察MIC-1对C2C12-IR细胞葡萄糖代谢的影响;检测细胞氧化损伤情况,包括一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH);采用Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路中相关蛋白表达变化情况。结果:确定了C2C12-IR模型最佳建模条件,即用0.5 mmol/L PA处理C2C12肌管细胞16 h;与C2C12-IR组相比,MIC-1呈剂量依赖性方式,显著增加了C2C12-IR细胞葡萄糖消耗量和糖原含量;MIC-1显著降低了C2C12-IR细胞中MDA和NO水平,显著增加了GSH水平;此外,MIC-1显著增加了丙酮酸脱氢酶激酶同工酶1(PDK1)、磷酸化AKT和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达水平。结论:MIC-1通过抑制氧化应激改善胰岛素抵抗。     

绿豆皮黄酮对H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究绿豆皮黄酮对H2O2诱导损伤人脐静脉血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法:用体积分数70%的乙醇提取绿豆皮中黄酮,采用高效液相色谱法测定其有效成分;通过H2O2诱导HUVEC细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型。试验被分为正常对照组、H2O2组、维生素C组、绿豆皮黄酮低、中、高剂量组(20,60,80μg/m L),通过MTT法测定细胞增殖能力,生化比色法检测各组细胞及培养液中的超氧化物酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量。结果:H2O2呈剂量依赖性降低内皮细胞活力,并引起细胞凋亡。其中1 000μmol/L H2O2处理HUVEC后,与正常组相比,细胞存活率明显受到抑制,而绿豆皮各剂量组能显著提高细胞和细胞培养液中的GSH-Px、SOD、GSH活性,降低MDA含量,同时降低细胞中LDH活性并增强细胞培养液中的LDH含量。结论:绿豆皮黄酮能抑制H2O2诱导的内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,其机制是:绿豆皮黄酮抑制损伤细胞脂质过氧化,提高机体抗氧化酶活性,清除自由基。     

AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞建立高血压损伤模型

目的:采用高血压发病因子血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立高血压损伤模型。方法:使用不同浓度(0.01、0.10、1.00μmol/L和10.00μmol/L)AngⅡ诱导HUVECs不同时间(3、6、9、12 h和24 h),通过考察HUVECs形态、活性、功能、微观结构及凋亡程度来评价HUVECs损伤程度,同时采用交叉设计方差分析和多重比较方法得到AngⅡ最适诱导浓度和最佳诱导时间。结果:AngⅡ呈浓度依赖式诱导HUVECs损伤,最佳诱导条件为1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h,此时HUVECs活性为44.85%、NO含量为43.57μmol/L、总一氧化氮合酶活力为6.99 U/mg pro、内皮型一氧化氮合酶活力为1.89 U/mg pro、丙二醛含量为7.46 nmol/mL、超氧化物歧化酶活力为27.29 U/mg pro、细胞凋亡率为41.5%,微观结构显示核膜皱缩,核仁消失,胞浆内出现大量空泡状结构,线粒体或细小或肿胀,粗面内质网扩张数目较少,部分核糖体丢失,平面内质网扩张,但细胞未解体,仍然保持细胞结构。结论:1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h可以成功诱导HUVECs建立高血压损伤模型。     

A Maillard reaction product enhances eNOS activity in human endothelial cells

Nitric oxide (NO) produced by the endothelial nitric oxide synthase (eNOS) is an important signaling molecule in the cardiovascular system. Although dietary factors can modulate eNOS activity, putative effects of processed food are barely investigated. We aimed to examine whether the model Maillard reaction product 3‐hydroxy‐2‐methyl‐1‐propyl‐4(1H)‐pyridone (HMPP), formed from maltol or starch and propylamine, affects the eNOS system. Incubation of EA.hy926 endothelial cells with 30–300 μM HMPP for 18 h enhanced endothelial NO release measured with the fluorescent probe diaminofluorescein‐2 and eNOS activity determined by the [14C]L‐arginine‐[14C]L‐citrulline conversion assay. HMPP increased NO production also in two different types of primary human endothelial cells. Protein levels of eNOS and inducible NO synthase remained unaltered by HMPP. HMPP inhibited eNOS activity within the first 2–4 h, whereas it potently increased eNOS activity after 12–24 h. Levels of eNOS phosphorylation, expression of heat‐shock protein 90, caveolin‐1 and various antioxidant enzymes were not affected. Intracellular reactive oxygen species remained unchanged by HMPP. This is the first study to demonstrate positive effects of a Maillard reaction product on eNOS activity and endothelial NO production, which is considered favourable for cardiovascular protection.     

虫草素抑制脂多糖诱导的小胶质细胞活化及神经保护作用

目的：研究虫草素抑制脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导小胶质细胞激活及其神经保护作用。方法：培养原代小鼠小胶质细胞,以LPS激活小胶质细胞使NO大量释放,同时给予不同浓度的虫草素（0.1～10 μmol/L）处理,四甲基偶氮唑蓝（3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT）法检测细胞存活率,Griess法测定小胶质细胞NO释放,逆转录聚合酶链式反应法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxidesynthase,iNOS）的mRNA表达。以硝普钠作为NO供体,以1,1-二苯基苦基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基作为自由基的供体,分别考察虫草素对NO和DPPH自由基的直接清除作用。分别以H2O2和以LPS激活的小胶质细胞条件培养液损伤小鼠PC12神经元细胞,MTT法考察虫草素对PC12细胞损伤的保护作用。此外,以羟胺法测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。结果：虫草素能够显著抑制LPS激活的原代小鼠小胶质细胞NO产生及iNOS mRNA表达,同时不影响细胞的存活率;虫草素具有显著的NO清除和DPPH自由基清除作用;虫草素本身对PC12小鼠神经元细胞的生长没有显著影响,但能够显著抑制H2O2或活化小胶质细胞的条件培养液引起的PC12细胞损伤。此外,虫草素可显著提高H2O2损伤的PC12细胞中SOD活性。结论：虫草素可通过抑制iNOS转录和直接清除NO而抑制LPS激活小胶质细胞的NO产生;虫草素还可通过抑制小胶质细胞激活而对PC12神经元细胞产生保护作用,也可通过提高SOD活性而保护H2O2损伤的PC12细胞。因此,虫草素可能对与小胶质细胞激活相关的神经退行性疾病具有潜在的防治作用。     

苦荞蛋白源肽AFYRW对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的：探讨苦荞蛋白源肽AFYRW在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法：采用LPS诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）建立血管内皮细胞炎症损伤模型;采用CCK8试剂盒检测AFYRW对细胞增殖活力的影响;Western blot检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhension molecule-1,VCAM-1)、细胞内黏附分子-1(intercellular adhension molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素（interleukin,IL）-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,e NOS）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitricoxide synthase,iNOS）水平及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65的磷酸化水平;酶法...     

Anthocyanidins decrease endothelin-1 production and increase endothelial nitric oxide synthase in human endothelial cells

Epidemiological and intervention studies correlate anthocyanin-rich beverages and a low incidence of coronary heart diseases. Since endothelin-1 (ET-1) and nitric oxide (NO) produced by endothelial NO synthase (eNOS) are vascular tension regulators secreted by endothelial cells, we studied the influence of two anthocyanidins, namely cyanidin (CY) and delphinidin (DP), on the regulation of ET-1 and eNOS in cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Aglycon anthocyanidin forms, such as CY and DP, may be present in vivo after the first deglycosylation step occurring in the jejunum and in the liver. DP showed a major action compared to CY inducing a significant dose-dependent inhibitory effect on both protein and mRNA levels of ET-1. CY and DP both increased the protein level of eNOS, but DP showed the major effect raising eNOS protein in a dose-dependent manner. To correlate the vasoprotective effect of CY and DP with their antioxidant activity, we analysed also the antioxidant effect of anthocyanidins both in vitro and in HUVECs. In particular, we examined the effect of anthocyanidins on endothelial heme oxygenase-1 (HO-1), an inducible stress protein. In all tests, DP showed a higher antioxidant activity than CY. Finally, the antiproliferative effect induced by DP was detected in HUVECs. DP and CY differ in the number and position of hydroxyl groups in their structure; therefore, the greater biological activity by DP, compared with CY, seems to be due to the presence of the three hydroxyl groups on the B ring in the molecular structure of DP.     

NO对采后龙眼常温贮藏效果的影响

以“石峡”龙眼(Dimocarpus longan Lour.cv.Shixia)为材料,研究了外源一氧化氮(NO)供体剂硝普纳(SNP)处理对龙眼保鲜效果的影响。结果表明:0.5mmol/L和1mmol/LSNP处理显著减缓了龙眼果皮褐变,降低了果实腐烂和果肉自溶,抑制了果皮POD活性。另外,SNP处理能保持果实较高的可溶性固形物和VC水平,而对可滴定酸含量影响不大。     

Tannin 1-alpha-O-galloylpunicalagin induces the calcium-dependent activation of endothelial nitric-oxide synthase via the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway in endothelial cells

Many polyphenols have been found to increase endothelial nitric oxide (NO) production. In our present study, we investigated the effects of 1-alpha-O-galloylpunicalagin upon endothelial nitric oxide synthase (eNOS) activity in endothelial cells (ECs). Both 1-alpha-O-galloylpunicalagin and punicalagin induced NO production in a dose-dependent manner in ECs. Despite having similar chemical structures, punicalagin induced lower levels of NO production than 1-alpha-O-galloylpunicalagin. After 1-alpha-O-galloylpunicalagin addition, a rise in the intracellular Ca(2+) concentration preceded NO production. The Ca(2+) ionophore A23187 stimulated eNOS phosphorylation and augmented NO production. Pretreatment with Ca(2+) chelators inhibited 1-alpha-O-galloylpunicalagin-induced eNOS phosphorylation and NO production. Treatment with 1-alpha-O-galloylpunicalagin did not alter the eNOS protein levels but, unlike punicalagin, induced a sustained activation of eNOS Ser(1179) phosphorylation. 1-alpha-O-galloylpunicalagin was also found to activate ERK1/2, JNK and Akt in ECs. Moreover, simultaneous treatment of these cells with specific phosphatidylinositol-3-kinase inhibitors significantly inhibited the observed increases in eNOS activity and phosphorylation levels. In contrast, the inhibition of (ERK)1/2, JNK and p38 had no influence on eNOS Ser(1179) phosphorylation. Our present results thus indicate that the 1-alpha-O-galloylpunicalagin-induced calcium-dependent activation of eNOS is primarily mediated via a phosphatidylinositol 3-kinase/Akt-dependent increase in eNOS activity, and occurs independently of the eNOS protein content.