柚皮苷酶对琯溪蜜柚果汁脱苦效果工艺优化

以琯溪蜜柚果汁为对象,研究在不同条件下柚皮苷酶对蜜柚果汁的脱苦效果。采用HPLC 测定柚皮苷含量,通过单因素试验分别考察加酶量、温度、酶解时间及pH 值对柚皮苷酶酶解反应的影响,在单因素试验基础上以柚皮苷脱除率为指标进行正交试验,确定最佳工艺条件：酶解温度60℃,酶活7.4U/mL 柚汁,酶解时间100min,pH3.6。在此条件下琯溪蜜柚果汁的柚皮苷脱除率达97% 以上。     

黑曲霉DB056分泌的柚苷酶分离纯化及酶学性质研究

对黑曲霉DB056发酵产生的柚苷酶进行分离纯化并研究其基本特性。粗酶液经硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析分离,所得柚苷酶的比活力为1716.41U/mg蛋白,纯化倍数为17.52倍。柚苷酶具有4个相对分子质量的组分,较适pH值范围4.0～5.0,最稳定的pH4.5;该酶适宜的作用温度范围45～55℃,温度50℃时酶活力最大,45℃和50℃条件下可以分别稳定4h和2h,55℃时柚苷酶1h失活50%;Ag+、Hg2+对柚苷酶具有强烈的抑制作用,其它金属离子对柚苷酶的影响随离子浓度的不同而不同,如0.1mmol/LCa2+、K+、Al3+、Mn2+、Cu2+可提高柚苷酶的活力,而5.0mmol/LFe2+、Al3+对柚苷酶显示抑制作用。     

柚苷酶处理对琯溪蜜柚果汁澄清度和营养品质的影响

目的:以琯溪蜜柚果汁为对象,研究柚苷酶处理对柑橘果汁澄清度和营养品质的影响。方法:利用反向高效液相色谱法测定柚苷酶对琯溪蜜柚果汁中柚皮苷的水解作用,考察柚苷酶去除琯溪蜜柚果汁中柚皮苷的动态规律;通过检测柚苷酶处理前、后琯溪蜜柚果汁的澄清度、pH值、总酸、抗坏血酸、游离氨基酸、可溶性固形物、总糖及总酚含量,评价柚苷酶处理对琯溪蜜柚果汁品质的影响。结果:柚苷酶能有效去除琯溪蜜柚果汁中的柚皮苷,该动态过程符合经典米氏方程的双曲线特征,柚皮苷分解的Vmax为56.2 U/mL,Km为1.78 mmol/L,柚皮素生成符合酶促反应的1级反应特征;在柚苷酶处理过程中加热导致果汁总酸、总糖、可溶性固形物和抗坏血酸含量降低及游离氨基酸含量和pH值上升;柚苷酶作用也引起总糖、可溶性固形物、抗坏血酸含量降低,同时增加酸和酚类物质的释放,减少游离氨基酸的产生,并可显著提高果汁的澄清度;在柚皮苷去除率为98.5%的条件下,琯溪蜜柚果汁澄清度上升了44.9%,总酸、游离氨基酸含量无明显变化,而总糖、抗坏血酸、总酚含量分别下降10%,14.6%和12.2%,其损失量远远小于树脂吸附法和超滤法。结论:用柚苷酶处理柑橘果汁,能够高效去除柚皮苷的苦味且可提高果汁澄清度并较好保持果汁的营养品质,该过程可通过米氏方程进行有效控制。     

琯溪蜜柚海带复合果汁加工工艺的研究

以琯溪蜜柚和海带为原料,研究了琯溪蜜柚海带复合果汁的加工工艺,并通过对比试验和正交试验确定了关键工序的最佳工艺参数。在海带浸提液中加入0.06%的冰醋酸可明显提高海带的浸提率;琯溪蜜柚汁提取时,用0.4%的果胶酶制剂在(45±2)℃下酶解处理果浆90min,可使果实的出汁率提高24%左右。通过添加稳定剂和二次高压均质(30~35MPa),解决了复合果汁产品的沉淀问题。     

琯溪蜜柚果汁树脂吸附脱苦前后酚类物质含量的测定

利用高效液相色谱法测定了琯溪蜜柚果汁酚类成分的含量,并研究了吸附脱苦对琯溪蜜柚果汁中酚类物质含量的影响。结果表明,琯溪蜜柚果汁中含有绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、芸香苷和柚皮苷等六种酚类物质;用高效液相色谱法分析琯溪蜜柚果汁中酚类物质,它们的加标回收率均在85.0%~103.6%之间,相对标准偏差(RSD)均在0.48%~2.9%之间。经XAD-16树脂吸附脱苦后,柚汁中的香豆酸、阿魏酸、芸香苷等三种酚类成分已检测不到,而绿原酸、柚皮苷和咖啡酸的损失率分别为97.2%、93.5%、87.9%,说明树脂吸附脱苦导致琯溪蜜柚汁中绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、芸香苷和柚皮苷等六种酚类物质含量严重降低。     

黑曲霉DB056发酵α-鼠李糖苷酶和柚苷酶培养基的优化研究

目的:优化黑曲霉DB056产α-鼠李糖苷酶和柚苷酶的培养基,提高这两种醇的产量.方法:以α-鼠李糖苷酶活力和柚苷酶活力为指标,研究碳源、氯源和乳化剂Triton X-100对α-鼠李糖苷酶活力和柚苷酶活力的影响,优化黑曲霉DB056摇瓶发酵α-鼠李糖苷酶和柚苷酶的培养基.结果:碳氮源的种类与浓度,乳化剂Triton X-100的浓度对黑曲霉DB056产α-鼠李糖苷酶和柚苷酶有重要影响;黑曲霉DB056产酶的优化培养基是:柚皮苷3.5 g/L,玉米浆4g/L,MgSO4·7H2O 1.0g/L,KH2PO41.0g/L,KCl 0.5 g/L,无水CaCl20.1 g/L,乳化剂Triton X-1001.0%.此时α-鼠李糖苷酶活力和柚苷酶活力分别为994U/mL和276U/mL,分别比发酵初始培养基提高了42.3%和147.8%.结论:通过培养基优化,大幅度提高了黑曲霉DB056液态深层发酵α-鼠李糖苷酶活力和柚苷酶活力.     

琯溪蜜柚果汁树脂吸附脱苦前后酚类物质含量的测定

利用高效液相色谱法测定了琯溪蜜柚果汁酚类成分的含量,并研究了吸附脱苦对琯溪蜜柚果汁中酚类物质含量的影响。结果表明,琯溪蜜柚果汁中含有绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、芸香苷和柚皮苷等六种酚类物质;用高效液相色谱法分析琯溪蜜柚果汁中酚类物质,它们的加标回收率均在85.0%¹03.6%之间,相对标准偏差（RSD）均在0.48%².9%之间。经XAD-16树脂吸附脱苦后,柚汁中的香豆酸、阿魏酸、芸香苷等三种酚类成分已检测不到,而绿原酸、柚皮苷和咖啡酸的损失率分别为97.2%、93.5%、87.9%,说明树脂吸附脱苦导致琯溪蜜柚汁中绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、芸香苷和柚皮苷等六种酚类物质含量严重降低。      

溶氧状况对黑曲霉DB056产柚苷酶的影响研究

以α-L-鼠李糖苷酶和柚苷酶的酶活为评价指标,从装液量、玻璃珠数量、氧载体这3个方面来研究黑曲霉DB056摇瓶发酵产柚苷酶的溶氧条件。通过单因素优化得到的摇瓶发酵条件为:装液量35mL、玻璃珠添加个数为3个(直径4mm)、最适氧载体为1%正己烷,在此条件下α-鼠李糖苷酶活力最大可达787.8U/mL,柚苷酶活力最大可达232.5U/mL。     

琯溪蜜柚柚皮苷纯化鉴定及其对胰脂肪酶的抑制作用

为了探索琯溪蜜柚黄酮作为胰脂肪酶抑制剂的应用价值,本实验采用Sephadex LH-20葡聚糖柱层析、高效液相色谱-质谱联用、傅里叶变换红外光谱对琯溪蜜柚柚皮黄酮进行分离纯化及结构鉴定,并通过酶反应动力学和分子对接技术研究其对胰脂肪酶的抑制类型和分子间相互作用。高效液相色谱-质谱联用和傅里叶变换红外光谱分析结果表明,纯化后的琯溪蜜柚柚皮主要黄酮成分为柚皮苷;纯化鉴定的柚皮苷对胰脂肪酶半抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）为0.99 μg/mL,抑制类型为可逆非竞争型,抑制常数Ki＝0.58 μg/mL;该黄酮与胰脂肪酶的结合自由能为－30.14 kJ/mol,相互间的分子作用力包括范德华力、疏水相互作用、氢键、π键等,结合区域位于酶催化活性中心之外的位点。本研究表明琯溪蜜柚的主要黄酮成分柚皮苷对胰脂肪酶具有强烈的抑制作用,为利用琯溪蜜柚黄酮开发高效安全的胰脂肪酶抑制剂提供了理论依据。     

富含柚皮精油的琯溪蜜柚果脯生产工艺研究

柚子是我国重要的柑橘类水果,琯溪蜜柚是一种大规模种植的特色柚类水果.柚皮富含精油,具有清新的香气及多种保健功能.该研究以苦味物质含量及感官评价为指标对盐水浸煮去除琯溪蜜柚柚皮苦味的工艺进行优化,以弹性为指标优化柚皮果脯糖液配方,并采用顶空固相微萃取结合气相色谱质谱联用仪(Headspace-solid phase mi...     

黑曲霉液态发酵产柚苷酶的分离纯化及其性质研究

本文针对黑曲霉液态发酵所产柚苷酶的分离纯化工艺及其酶学性质进行研究。将黑曲霉液态发酵所产酶液,依次通过30%~70%硫酸铵盐析、膜透析和DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析后得到高纯度柚苷酶。经SDS-PAGE凝胶电泳仅得到一条清晰条带,分子量约为65.10 ku。纯化获得的柚苷酶比酶活可达6932.54 U/mg,纯化倍数和酶活回收率分别为13.82倍和13.30%,并且能有效水解柚皮苷。进一步研究发现,该酶的最适反应p H为4.5,最适作用温度为50℃,在20℃~50℃及p H 3.0~6.0范围内有良好的稳定性。在一定浓度范围内,K+、Ca2+和Na+对柚苷酶活性有促进作用,而Fe3+、SDS和EDTA-Na2对其活性有明显的抑制作用。本研究为深入理解柚苷酶分离纯化过程,明确其酶学性质,进一步探索柚苷酶应用于天然活性产物生物转化过程的相关机制提供了基础数据,具有非常重要的科学意义和潜在的应用价值。     

黑曲霉产柚苷酶的发酵条件优化

利用高效液相色谱法,检测发酵液中α-鼠李糖苷酶和柚苷酶的活力,考察碳源、pH值、搅拌转速、发酵温度对柚苷酶产量的影响,对黑曲霉DB056产柚苷酶的7L罐发酵工艺进行优化.研究结果表明,以20g/L柚皮苷为唯一碳源,发酵黑曲霉DB056产柚苷酶的效果最佳.发酵过程的pH值、搅拌转速和发酵温度的最优控制值分别为6.0、700 r/min和32℃,此时产酶效果最理想,发酵过程α--鼠李糖苷酶和柚苷酶最大酶活力分别达到1 133.00和788.42U/mL.将优化的发酵工艺放大到200 L发酵罐进行试验,α-鼠李糖苷酶和柚苷酶的最大酶活力分别为1 069.30 U/mL和727.44 U/mL.中试放大效果良好.     

Treatment of Grapefruit Juice for Bitterness Removal by Amberlite IR 120 and Amberlite IR 400 and Alginate Entrapped Naringinase Enzyme

ABSTRACT: Treatment of grapefruit ( Citrus aurantium ) juice with Amberlite IR 400 resulted in 69.23% naringin removal after 5 min exposure with significant clarification and 89.41% tartness (acidity) reduction. Amberlite IR 120 removed only 9% naringin in 1 min with increased shelf life of the juice without any change in clarity, quality, and naringin content. Alginate entrapped naringinase treatment of the juice resulted in 83.84% naringin hydrolysis at 55°C and 220 rpm in 180 min with 1.98 enzyme units/mL of juice. The soluble enzyme hydrolyzed only 65.53% naringin under similar conditions. Kinetic constant values of the immobilized and soluble enzymes were found to be 9.75 mM and 20 mM, respectively.     

Characterization and preparation of Aspergillus niger naringinase for debittering citrus juice

Naringinase from Aspergillus niger was prepared and characterized to evaluate its effectiveness in debittering citrus juice. The enzyme was purified to homogeneity by sulfate fractionation and chromatographies on Q-Sepharose, Sephacryl S-200, and S-100 HR columns, and estimated by gel filtration chromatography (GFC) to have a molecular weight (MW) of 131 kDa, of which its subunit was measured by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis to be around 65.5 kDa. The enzyme showed active and stable pH ranges both within 4.5 to 5.0. Its optimal temperature was in the range of 45 to 55 °C. Freeze drying provided an estimated enzymatic recovery of 95.9%, greater than spray drying with the recovery at 55.6%. The freeze-drying powder could retain its enzymatic activity stably at 4 °C for 6 mo. Also, the enzyme in 0.220 U/mL citrus juice could sufficiently remove the naringin for the bitterness. Oral acute toxicity study revealed the maximum tolerated dose (MTD) of the naringinase powder was >10 g/kg in mice. The contents of arsenic (As), lead (Pb), mercury (Hg), the aerobic plate count, and coliform number in the enzyme powder all met the criteria for food use. These characteristics suggest that the naringinase from A. niger is efficient and suitable for debittering the citrus juice, and the process consisting of fermentation, salt precipitation, ion exchange, ultrafiltration, and freeze drying is a promising means to prepare the naringinase for food industry, setting up a strong base to enzymatically debitter citrus juice. PRACTICAL APPLICATION: This study focused on characterization, preparation, and validation of naringinase from A. niger, which provided useful information on how to prepare, store, and use the naringinase. In addition, this naringinase met the safety standards for food use and showed strong ability to remove the bitter taste from citrus juice, which provided useful information for interested readers, and the food industry.     

柚苷酶处理、果汁浓缩和低温贮藏对柚子果汁中柠檬苦素的影响

采用高效液相色谱法测定柠檬苦素含量,以柚子果汁为对象研究柚苷酶处理、果汁浓缩和低温贮藏等工序对柑橘果汁中柠檬苦素含量的影响。结果表明,液相色谱方法可使柠檬苦素、普鲁宁、柚皮苷和柚皮素完全分离,消除了柚皮素对柠檬苦素测定的影响;柠檬苦素检出限为0.95μg/m L,定量限为3.17μg/m L,样品回收率为102.6%~104.2%,相对标准偏差为0.34%~1.04%。柚苷酶水解过程中的加热及果汁浓缩和低温贮藏等操作都能促进柠檬苦素的从果汁中结晶析出,综合采用柚苷酶水解、浓缩和低温贮藏等操作,并经过离心分离可去除柚汁中78%的柠檬苦素,使果汁中柠檬苦素含量降低到19μg/m L。     

黑曲霉酸性果胶裂解酶的高效表达及其在果汁澄清中的应用

利用黑曲霉自身强启动子（葡萄糖淀粉酶启动子,PglaA）实现了酸性果胶裂解酶PelD在黑曲霉中的过量表达,重组酸性果胶裂解酶经镍柱亲和层析纯化后进行Western blot鉴定及酶学性质研究。重组酸性果胶裂解酶在摇瓶发酵条件下最高酶活力达到8?822.6?U/mL;经一步纯化后,该重组酶的比活力为8?522.7?U/mg,回收率为79.4%;该重组酶的最适反应pH值为5.0,在pH?3.0～6.5范围内40?℃保温2?h仍能保持50%以上的相对酶活力,在酸性pH值下稳定性良好;最适反应温度为50?℃,该重组酶在30～50?℃的范围内非常稳定;在1?mmol/L浓度下,Ca2＋、Mg2＋、Cu2＋、Zn2＋、Ni2＋、Mn2＋、Ba2＋对该重组酶具有激活作用,其中Zn2＋、Ni2＋、Ba2＋激活作用较为显著,而十二烷基硫酸钠表现为抑制作用;底物特异性分析表明该酶能够特异性地降解高度甲酯化果胶,其对柑橘果胶（酯化度≥85%）酶活力高达31?248.0?U/mL;此外,重组酶对橙汁、苹果汁和葡萄汁具有良好的澄清效果,其中橙汁的透光度提高了16.9?倍,苹果汁的透光度提高了10.5?倍,葡萄汁的透光度提高了4.7?倍。     

产柚苷酶黑曲霉SL2K发酵条件优化

该研究以黑曲霉（Aspergillus niger）SL2K为研究对象,对其产柚苷酶的液态发酵条件进行优化。 通过单因素试验对碳源、氮 源、诱导物、接种量、初始pH值和培养时间进行考查,在单因素基础上,选取麸皮粉添加量、蛋白胨添加量、接种量、初始pH值4个因素 进行4水平正交试验优化。 结果表明,优化后的产酶发酵条件为麸皮粉添加量3%,蛋白胨添加量5%,接种量8%,初始pH值为5.0,鼠李 糖0.08%、KH2PO4 1 g/L,KCl 0.5 g/L,MgSO·4 7H2O 0.5 g/L,FeSO4 0.01 g/L,装液量为100 mL/250 mL,摇床转速180 r/min,培养温度28 ℃, 培养时间96 h。 在此优化条件下,柚苷酶活力为233.89 U/mL,是优化前的2.13倍。     

琯溪蜜柚蒸馏酒香气特征及风味成分分析

研究由琯溪蜜柚汁所制成的蒸馏酒的品质特征,运用感官检验、气相色谱-质谱（gas chromatographymass spectrometry,GC-MS）联用仪、气相色谱火焰离子化检测-嗅闻（gas chromatography-flame ionization detectorolfactory,GC-FID-O）联用分析琯溪蜜柚蒸馏酒的主要香气轮廓及风味成分。感官分析结果表明,琯溪蜜柚蒸馏酒的主体香气是果香和柑橘香。GC-MS结果共鉴定出40 种挥发性物质,其中醇类8 种,酯类14 种,萜烯类10 种,其他8 种。通过制定标准曲线进行定量分析,发现含量较多的挥发性成分为癸酸乙酯（744.73 μg/L）、己酸乙酯（524.74 μg/L）和月桂酸乙酯（193.42 μg/L）。GC-FID-O分析显示：戊酸乙酯、D-柠檬烯、己酸乙酯是琯溪蜜柚蒸馏酒香气轮廓的主要贡献成分。本实验可为研究琯溪蜜柚蒸馏酒及其他柑橘果酒的香气质量提供参考依据。