人工虫草多糖对小鼠CCl4肝损伤的保护作用

目的：研究人工虫草不同部位多糖及固体培养残基多糖对小鼠CCl4肝损伤的保护作用。方法：取健康的雄性小鼠60只,按体质量随机分成6组：正常对照组、急性CCl4肝损伤模型组、虫草子实体多糖组、菌丝体多糖组、固体培养残基多糖组和阳性药物组,每组10只。用紫外分光光度法测定比较血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量,测定肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总蛋白(TP)含量,并对肝细胞的组织形态学进行观察。结果：虫草多糖子实体、菌丝体和固体培养残基多糖组,能显著抑制CCl4引起的小鼠血清ALT、AST活性及肝脏MDA含量的升高,以及肝脏SOD含量的降低,并能显著减轻CCl4引起的肝小叶内的灶性坏死。结论：虫草多糖子实体、菌丝体和固体培养残基多糖组对小鼠化学性肝损伤具有保护作用,人工虫草子实体多糖效果最优,其次为菌丝体多糖,再次为固体培养残基多糖。     

不同种类氨基酸对蛹虫草菌丝体生长和虫草素含量的影响

在蛹虫草液体摇瓶培养过程中分别添加20种不同的氨基酸,添加量为0.2g/100mL,以研究其对蛹虫草菌丝体生长和虫草素含量的影响。结果表明:在20种氨基酸中,16种氨基酸能显著促进蛹虫草菌丝体的生长。其中列前5位的依次为3种碱性氨基酸:精氨酸、赖氨酸和组氨酸,两种酸性氨基酸:谷氨酸和天冬氨酸。这5种氨基酸分别使菌丝体生长量增加了1.10、0.82、0.63、0.48、0.40倍。且每一种氨基酸添加后都能使菌丝体中虫草素含量显著增加。其中两种碱性氨基酸中的精氨酸和组氨酸添加后菌丝体中的虫草素含量分别增加了1.91和1.90倍,极性氨基酸中的苏氨酸和天冬酰胺添加后虫草素含量分别增加了1.43和1.42倍,非极性氨基酸中的丙氨酸添加后虫草素含量增加了1.05倍。     

人工冬虫夏草不同部位核苷类成分分析

目的:分析测定人工冬虫夏草不同部位核苷类含量,为充分利用人工冬虫夏草资源提供参考。方法:水提醇沉,RP-HPLC分离,紫外检测器检测虫草素、腺苷和腺嘌呤含量。结果:人工虫草中子实体、菌丝体和固体培养残基中腺嘌呤含量(μg/g)分别为193.92、142.66、71.25;腺苷分别1302.52、635.02、171.73;虫草素分别为1356.92、1101.04、350.96。结论:人工虫草中不但子实体含有腺嘌呤、腺苷和虫草素,菌丝体及固体培养残基也含有这3种主要核苷类物质,具有进一步开发利用价值。     

人工培养的兰坪虫草子实体中核苷类成分研究

兰坪虫草(Ophiocordyceps lanpingensis)产于我国滇西北地区,是一种寄生在钩蝠蛾幼虫上的虫生真菌。本文以四种不同培养基培养的兰坪虫草子实体为原料,采用高效液相色谱法(HPLC)同时检测10种核苷类成分(尿嘧啶、尿苷、2'-脱氧尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、胸腺、腺苷、2'-脱氧腺苷、虫草素),并将其与野生冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)、野生兰坪虫草进行对比分析,初步评估人工培养兰坪虫草子实体的质量。结果表明,以大米和蚕蛹粉为主要原料的培养基所培养的兰坪虫草子实体生长时间平均为40 d,周期短于其他三种培养方式;且其腺苷、总核苷含量分别为2744μg/g和8015μg/g,明显高于野生冬虫夏草、野生兰坪虫草,有较好的质量水平。因此,人工培养的兰坪虫草子实体具有重要的研究价值和应用潜力。     

海蓬子不同部位氨基酸含量分析及营养评价

采用氨基酸自动分析仪对海蓬子不同部位氨基酸组成进行分析和比较,并对其营养价值进行评价。结果表明:海蓬子嫩茎、茎秆、根部位中均含有16种氨基酸,其中必需氨基酸8种,比例比较均衡。海蓬子嫩茎部位蛋白质含量最高,达到16.53%,必需氨基酸含量58.04mg/g、必需氨基酸与非必需氨基酸比值0.59、氨基酸比值系数分65.72,符合WHO/FAO的推荐标准。研究表明,海蓬子嫩茎有较高的营养价值和良好的开发利用前景。     

红车轴草不同部位中氨基酸含量的测定

应用氨基酸自动分析仪对红车轴草花、茎和叶中17种氨基酸含量分别进行了测定，结果表明：以占干物质计，红车轴草不同部位中总氨基酸含量有较大差异，叶中含量最高，高达17．73％；花次之，含量为13．71％；茎中含量最低，只有6．44％。叶中氨基酸，以Asp、Glu、Leu、Val、Ala、Phe、Lys、Gly8种氨基酸含量较高，分别为2．31％、2．18％、1．66％、1．25％、1．13％、1．10％、1．04％和1．03％；花中氨基酸，以Asp、Glu、Leu3种氨基酸含量较高，分别为1．91％、1．70％和1．14％；而茎中的每种氨基酸含量均较低。     

人工蛹虫草固体培养残基中虫草素的提取分离研究

以人工蛹虫草固体培养残基为原料,采用索氏提取后,用离子交换层析进行分离研究。索氏提取结果表明水比乙醇更优于提取虫草素;离子交换层析分离提取固体培养残基中虫草素的正交实验表明洗脱流速、料水比为主要影响因子,最优条件为:料水比1:16,离子柱pH3.5;洗脱流速为1滴/2秒。     

HPLC-DAD测定人工北冬虫夏草中虫草素含量

建立了测定北冬虫夏草子实体中虫草素的高效液相色谱法.使用Eclipse XDB C18(4.6mm X 150mm,5μm)色谱柱,以水:甲醇:甲酸(95:4:1)为流动相,流速为0.8ml/min,25℃下检测.检测波长为260nm.结果表明:虫草素的平均回收率为100.8%,RSD值1.88%.此方法简单、可靠.     

基质固相分散-高效液相色谱法同时测定冬虫夏草和蛹虫草中的9种核苷及碱基

目的:建立基质固相分散-高效液相色谱法(MSPD-HPLC)同时测定野生冬虫夏草、深层发酵培养的蛹虫草菌丝体和固态培养的蛹虫草子实体中的腺嘌呤、腺苷、胸腺嘧啶、胸苷、尿嘧啶、尿苷、胞嘧啶、鸟苷和虫草素。方法:采用MSPD-HPLC法同时测定上述9种核苷及碱基。结果:MSPD提取条件为:弗罗里硅土为分散剂,分散剂与样品质量比为4∶1,15mL石油醚为淋洗剂,15mL甲醇为洗脱剂。标准曲线在线性范围内具有较好的线性关系(r0.9997),化合物的检出限和定量限分别为12.4~79.4ng·mL-1和41.2~264.6ng·mL-1。日内和日间精密度均低于7.28%。样品加标回收率在81.54%~95.77%之间。结论:本法简单快速,样品用量少,可广泛应用于中草药和生物药品中核苷和碱基的同时测定。     

基质固相分散-高效液相色谱法同时测定冬虫夏草和蛹虫草中的9种核苷及碱基

目的:建立基质固相分散-高效液相色谱法（MSPD-HPLC）同时测定野生冬虫夏草、深层发酵培养的蛹虫草菌丝体和固态培养的蛹虫草子实体中的腺嘌呤、腺苷、胸腺嘧啶、胸苷、尿嘧啶、尿苷、胞嘧啶、鸟苷和虫草素。方法:采用MSPD-HPLC法同时测定上述9种核苷及碱基。结果:MSPD提取条件为:弗罗里硅土为分散剂,分散剂与样品质量比为4∶1,15mL石油醚为淋洗剂,15mL甲醇为洗脱剂。标准曲线在线性范围内具有较好的线性关系（r>0.9997）,化合物的检出限和定量限分别为12.4⁷9.4ng·mL-1和41.2²64.6ng·mL-1。日内和日间精密度均低于7.28%。样品加标回收率在81.54%⁹5.77%之间。结论:本法简单快速,样品用量少,可广泛应用于中草药和生物药品中核苷和碱基的同时测定。      

富锌冬虫夏草菌丝体有机化程度及氨基酸含量分析

对冬虫夏草进行液体富锌培养 ,结果表明 ,培养基中适宜添加锌浓度为 1 5 0 μg/mL ,此时菌丝体生物量达到 1 0 7g/L ,菌丝体含锌量为 4875 1 μg/g ,富锌率为 3 4 0 5 % ,有机化程度达到76 3 3 %。分析氨基酸含量 ,富锌冬虫夏草菌丝体中氨基酸含量比对照明显增加 ,说明锌能促进其氨基酸生物合成。     

一株冬虫夏草菌的液态发酵条件研究

以菌丝体干质量、胞内多糖含量及腺苷含量为评价指标,研究了一株冬虫夏草菌的液态发酵条件。确定利用葡萄糖蛋白胨液体培养基发酵生产菌丝体、胞内多糖及腺苷的最佳条件为装液量100 mL/500 mL,接种量3%,温度24 ℃,培养时间4 d,摇床转速140 r/min;试验得菌丝体干质量为17.232 g/L;胞内多糖含量为78.34 mg/g;腺苷含量为633.7 μg/g。     

冬虫夏草与蛹虫草融合株的原生质体诱变育种

以冬虫夏草与蛹虫草融合株为研究材料,对其原生质体进行紫外诱变,筛选优质高产的新型菌株。得到了高产菌株Y-90,虫草酸产量是出发菌株的1.80 倍,高产菌株YP-42,虫草素产量是出发菌株的1.33 倍。采用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）分子标记技术和核糖体rDNA内部转录间隔区（internaltranscribed spacer,ITS）序列分析技术对突变株的遗传变异情况进行分析。结果表明突变株的ITS序列并没有发生变化。RAPD结果显示突变株的扩增片段与亲本菌株不同,说明发生了基因突变,其高产性状是可遗传的性状,可以将其用于进一步的育种研究。     

冬虫夏草液态发酵菌丝体中化学成分分析

对冬虫夏草(Cordyceps sinensis)液态发酵菌丝体的主要化学成分进行了分析.冬虫夏草液体发酵菌丝体中粗蛋白和粗脂肪的含量分别为24.53%和6.69%;腺苷含量为0.3755mg/g,D-甘露醇含量为88.80mg/g,胞内多糖含量为133.9mg/g,麦角甾醇含量为1.80mg/g.冬虫夏草液态发酵菌丝体主要成分含量与天然虫草相似.     

高效液相色谱法测定冬虫夏草中虫草素和虫草酸的含量

为建立检测冬虫夏草中虫草素和虫草酸的方法,用甲醇超声提取虫草素、水超声提取虫草酸,再用高效液相色谱、示差折光检测器与紫外检测器串联的方法测定虫草素和虫草酸含量。通过对样品进行预处理、色谱条件和方法学指标的验证,建立了定量检测虫草素、虫草酸的新方法,二者回收率在90%～101%之间,二者日内、日间精密度(RSD)≤7.2%。虫草素、虫草酸检出限分别为50ng/mL和1.5μg/mL。该方法具有快速、准确、简便的特点。     

冬虫夏草液体发酵生产多糖和菌丝体的研究

本实验采用液体发酵冬虫夏草生产菌丝体和多糖。通过单因素试验,确定利用蔗糖酵母膏液体培养基发酵生产多糖和菌丝体的最佳条件为：接种量5%、温度26℃、培养时间4d,通气流量1L/min。     

蛹虫草菌丝体发酵培养过程中氨基酸添加技术研究

组氨酸、精氨酸、赖氨酸是对蛹虫草生长影响较大的3 种碱性氨基酸,本实验研究在蛹虫草液体发酵过程中添加上述氨基酸的不同条件对蛹虫草菌丝体生物量和其中主要抗癌功能成分虫草素的影响。首先进行添加氨基酸种类、氨基酸的添加量、初始pH 值、培养温度对蛹虫草菌丝体生物量和虫草素含量的单因素试验,在此基础上进行四因素三水平的正交试验。结果表明：对蛹虫草菌丝体生物量影响从大到小的顺序依次是：氨基酸种类＞培养温度＞初始pH 值＞氨基酸添加量。增加蛹虫草菌丝体生物量的最佳培养条件为：添加氨基酸种类为精氨酸,培养温度为26℃,培养初始pH 值为6,100mL PDA 发酵培养液添加精氨酸0.3g。对蛹虫草菌丝体中虫草素含量影响从大到小的顺序依次是：氨基酸种类＞初始pH 值＞培养温度＞氨基酸添加量。增加菌丝体中虫草素含量的最佳培养条件是添加氨基酸种类为精氨酸,培养温度为24℃,100mL PDA 发酵培养液添加0.3g,培养的初始pH 值为6 。     

冬虫夏草与蛹虫草融合子菌丝体液体培养基筛选

以冬虫夏草与蛹虫草融合子菌丝体生物量为主要指标,采用正交设计方法对其菌丝体液体培养基进行筛选,比较3种培养方法对菌丝体的影响.结果表明其最适培养基配方为葡萄糖5.00g/L,蔗糖5.00g/L,酵母粉0.25g/L、黄豆粉5.00g/L(浸提液),KH2PO41.50g/L,MgSO4·7H2O 0.50g/L,VB1 4g/L,pH自然.25℃培养,周期156h,其菌丝体干重生物量可达3.51g/L.持续摇动培养法获得菌丝体生物量最多,利于菌体的规模发酵生产;动静相间法次之;静止法获得量较少.动静相间法所培养的菌丝体更有利于原生质体的制备和诱变育种.