仿刺参卵多糖的分离纯化及体外抗肿瘤活性

目的：探究仿刺参卵多糖的结构及体外抗肿瘤活性。方法：通过酶解醇沉获得仿刺参卵粗多糖（polysaccharides from Apostichopus japonicus spawn,SPS）;通过色谱柱纯化后进行理化性质分析;采用噻唑蓝法研究卵多糖对HeLa、HGC-27细胞的体外增殖抑制作用。结果：获得3 种不同多糖组分SPS-1、SPS-2、SPS-3,对干预的肿瘤细胞均有显著抑制作用。SPS-1抑制作用最强,对HeLa及HGC-27细胞的最高抑制率分别为98.04%、99.4%。结论：从仿刺参卵中分离出3 种多糖组分,均表现出一定的抑制肿瘤细胞增殖活性。     

仿刺参肠道多糖的纯化及理化分析

目的：对仿刺参肠道多糖进行纯化,并对纯化产物进行理化分析。方法：使用葡聚糖凝胶(G-100)层析柱分离出两种仿刺参肠道多糖,选取其中多糖A进行研究。使用葡聚糖凝胶(G-100)柱层析法和琼脂糖凝胶电泳法进行纯度检测,葡聚糖凝胶(G-200)柱层析测定分子质量,高效液相色谱法确定其单糖组分,并结合红外吸收光谱法与核磁共振对其结构进行初步检测。结果：实验所得纯化产物多糖A为均一组分,主要含有氨基糖醛酸、氨基半乳糖盐酸盐和岩藻糖3种单糖,并含有少量的氨基葡萄糖、半乳糖。其中岩藻糖有α和β两种构型,以α-岩藻糖硫酸酯残基、β-岩藻糖硫酸酯残基形式存在。分子质量约为18.8×104D。结论：该纯化产物多糖A为一种酸性多糖,推测其为硫酸软骨素类。     

大连刺参多糖的提取纯化及体外抗氧化活性研究

以大连刺参为原料,多糖提取率为指标,通过单因素实验和响应面试验法优化木瓜蛋白酶提取刺参多糖的酶解工艺条件;以蛋白脱除率为指标,通过单因素实验和正交试验法,优化D-葡萄糖酸-δ-内酯(GDL)对刺参多糖的脱蛋白工艺;并检测经过提取纯化后的刺参多糖的体外抗氧化活性。结果表明,刺参多糖的最佳提取工艺为:加酶量1.60%、pH7.30、温度54.0 ℃,在此条件下刺参多糖提取率为5.34%;最佳脱蛋白工艺条件为:反应温度60 ℃、反应时间2 h、GDL溶液(w/w,20%)加入量2.5 mL,蛋白脱除率为95.8%。提取纯化的刺参多糖清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子和ABTS自由基的IC₅₀分别为0.3、4.5、3.9、0.85 mg/mL。刺参多糖浓度为3.0 mg/mL时,ABTS⁺自由基的清除能力最强,达到90.4%,且与阳性对照V_C的清除能力相差不大。说明刺参多糖具有较好的体外抗氧化活性。     

仿刺参精酶解工艺条件优化及体外抗氧化

本研究以仿刺参精(Apostichopus japonicus spermary,ASJS)为材料,以水解度为指标优化了酶解工艺条件,并考察了酶解产物的体外抗氧化效果。实验选用木瓜蛋白酶(PAP)、复合蛋白酶(PRO)和风味蛋白酶(FLA)作为实验用酶,以双缩脲法结合三氯乙酸法测定水解度,通过单因素与正交实验,优化了单酶酶解工艺条件,并与双酶及三酶复配水解进行了比较实验,最后对不同的水解产物进行了体外抗氧化活性测定。结果表明:单酶最佳酶解工艺条件为PAP:酶添加量3.0%、温度70℃及反应时间4 h;PRO:酶添加量3.0%、温度45℃及反应时间4 h;FLA为:酶添加量2.0%、温度45℃及反应时间4 h。在最佳酶解工艺条件下PAP水解度为32.14%,PRO为31.09%,FLA为11.89%。双酶及三酶的复配水解工艺检测到的水解度均低于单PAP及单PRO。不同水解产物清除羟自由基和超氧阴离子自由基能力结果为,在样品浓度为5 mg/m L和10 mg/m L时,ASJS的PAP酶解产物好于PRO、FLA、双酶、三酶复配,同时也好于仿刺参卵及体壁PAP酶解产物。综上可知,ASJS的PAP水解产物显示出较好的体外抗氧化活性,可以进一步开发利用。      

木瓜蛋白酶提取刺参消化道多糖

采用酶解法提取仿刺参消化道多糖并进行初步性质测定。方法：通过木瓜蛋白酶酶解获得粗多糖,并综合考虑酶解时间、温度、加酶量的影响,获得优化的酶解条件;采用三氯醋酸法除蛋白,Sephacryl S-400 凝胶柱层析进行纯化,并测定其相对分子质量和硫酸基含量。结果：酶解最佳条件为加酶量10400U/g,酶解温度55℃,酶解时间6h,多糖得率8.11‰;纯化多糖为组分单一的酸性多糖,分子质量约25kD,硫酸基含量约为9.29%。     

薇菜多糖的分离纯化及体外抗氧化活性

通过水提醇沉法制备薇菜粗多糖（water-soluble polysaccharide of Osmunda japonica,WOJP）,并用二乙氨乙基（diethylaminoethyl,DEAE）-纤维素层析法对其进行分离纯化,获得2?个多糖组分薇菜中性糖（neutral WOJP,WOJP-N）和薇菜酸性糖（acidic WOJP,WOJP-A）。WOJP-N的分子质量为31.8?kDa,由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成,对应各成分物质的量比为9.1∶5.7∶13.3∶37.6∶5.6∶11.8;WOJP-A的分子质量为15.7?kDa,由鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖组成,对应各成分物质的量比为7.0∶56.4∶26.1∶5.2。傅里叶变换红外光谱分析结果表明,WOJP-N主要由β-构型的半乳糖组成;WOJP-A主要由吡喃半乳糖醛酸组成,且存在部分酯化修饰。体外抗氧化活性实验结果表明,WOJP的Fe3＋还原能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）清除能力和超氧阴离子清除能力与VC相当,具有较好的抗氧化活性,其中WOJP-N和WOJP-A在WOJP发挥抗氧化活性时具有协同作用,两者均是WOJP发挥抗氧化活性的多糖组分。本研究结果可为进一步研究薇菜多糖的构效关系和开发功能性食品提供依据,并为薇菜的应用提供理论参考。     

紫苏叶多糖分离纯化及体外抗氧化活性

通过水提醇沉法得到紫苏叶粗多糖（Perilla frutescens leaf polysaccharides,PFP）,并用DEAE-52纤维素层析法对其进行分离纯化,获得4个多糖组分PFP-1、PFP-2、PFP-3和PFP-4。PFP-1为中性低聚糖,但总糖含量较低;PFP-2重均分子量为4.7 kDa,峰位分子量为2.2 kDa,主要组成单糖为半乳糖醛酸;PFP-3主要由两种分子量段的多糖组成,主要峰位分子量为5.2 kDa和40.0 kDa,为杂多糖,所含单糖种类较多,主要含半乳糖醛酸和半乳糖;PFP-4分子量较小,主要组成单糖为半乳糖和阿拉伯糖。体外抗氧化活性试验表明,PFP的DPPH自由基清除能力、ABTS+自由基清除活性和Fe3+还原能力较强,具有良好的抗氧化活性,其中组分PFP-3和PFP-4抗氧化活性与PFP接近,是其发挥抗氧化作用的关键组分。     

人参果多糖的分离纯化及体外抗氧化活性研究

通过水提法得到人参果中的总多糖(WGBP),并通过离子交换层析对WGBP进行分离纯化,得到一个中性糖WGBP-N和三个酸性糖级分(WGBP-1、WGBP-2、WGBP-3)。利用高效液相色谱及分子筛层析法对各个级分的单糖组成、分子量等进行了分析,并对结构特点进行了概括。通过DPPH和羟自由基清除实验分析了各级分的抗氧化活性。结果表明,WGBP主要由鼠李糖(rhamnose,Rha)、半乳糖醛酸(galacturonic acid,GalA)、半乳糖(galactose,Gal)、阿拉伯糖(arabinose,Ara)和葡萄糖(glucose,Glc)组成,分子量分布广泛。WGBP-N主要由Gal、Ara和Glc组成,比例为62.7:17.0:17.1。三个酸性糖主要由不同比例的Rha、GalA、Gal和Ara构成。WGBP具有明显的DPPH·和羟自由基清除活性,且清除率随浓度的升高而逐渐增强。当WGBP浓度为2.0 mg/mL时,DPPH·清除率为62.7%;当浓度为0.2 mg/mL时,羟自由基清除率为81.2%。WGBP对DPPH·和羟自由基清除活性优于四个子级分。     

仿刺参雌性生殖腺皂苷提取分离工艺优化及体外抗氧化活性研究

目的:优化超声辅助提取和高速逆流色谱(HSCCC)分离仿刺参雌性生殖腺皂苷工艺并探究其抗氧化活性。方法:以提取时间、乙醇体积分数、超声时间、料液比为考察因素,采用响应面试验优化皂苷提取工艺;针对高速逆流色谱分离工艺的关键参数溶剂体系配比、流动相体积流量、转速进行优化,并通过DPPH自由基、ABTS自由基清除试验评价粗提物及分离组分的抗氧化活性。结果:粗皂苷的最佳提取条件为提取时间7 d,乙醇体积分数83%,超声时间33 min,料液比1∶20 (g/mL),此条件下皂苷提取率为(0.66±0.02)%。在HSCCC溶剂体系配比为V_乙酸乙酯∶V_正丁醇∶V_甲醇∶V_水为2.0∶3.0∶0.2∶4.8,流动相体积流量为2 mL/min,转速为800 r/min的条件下分离粗皂苷提取物得到组分1和组分2。粗皂苷提取物、组分1和组分2的DPPH自由基清除率分别可达(36.23±0.55)%,(35.07±0.20)%和(38.40±0.14)%,ABTS自由基清除率分别可达为(17.55±0.42)%,(24.49±0.50)%和(33.65±0.34)%。结论:经工艺优化获得了较高的仿刺参雌性生殖腺粗皂苷得率及较好的分离效果,且相较于粗皂苷,经HSCCC分离后得到的组分2的抗氧化活性有所提高。     

米邦塔仙人掌多糖的提取纯化及体外抗氧化活性

目的:研究米邦塔仙人掌多糖的纯化及体外抗氧化活性。方法:用水提醇沉的方法提取得到米邦塔仙人掌粗多糖polysaccharides from Opuntia Milpa Alta（MAP）,MAP经过DEAE-纤维素-52柱纯化得到多糖MAP1和MAP2,经过DEAE-琼脂糖-CL-6B柱纯化得到多糖MAP3。采用凝胶渗透色谱（GPC）分析多糖的相对分子质量,采用体外抗氧化评价体系研究米邦塔仙人掌多糖抗氧化活性。结果:MAP1相对分子质量（Mn）为476.9,MAP2相对分子质量（Mn）分布为5449、9724、529 ku,MAP3相对分子质量（Mn）分布为13270、15.87、474 ku。体外抗氧化活性结果显示,MAP的总抗氧化能力最高,MAP2和MAP3对羟基自由基、超氧阴离子和DPPH自由基的清除作用均高于MAP,其中MAP2的各项抗氧化指标的活性均高于MAP3。结论:纯化后的MAP2具有较好的抗氧化活性,米邦塔仙人掌多糖体外抗氧化活性与其相对分子质量有关。      

仿刺参精低分子质量多肽的制备及抗氧化作用

本实验以仿刺参精为原料,制备出多肽并考察其体外和体内抗氧化活性。以清除羟自由基（•OH）能力为指标,考察木瓜蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶的5 种酶解方式产生的酶解产物的活性,优化实验用酶。经超滤分级后,测定各级组分的分子质量分布、可溶性蛋白质含量、多肽含量和清除•OH能力。选择清除•OH能力较好的低分子质量多肽组分,测定氨基酸组成,设定低、中、高剂量组（100、200、600 mg/kg（以体质量计,下同））、模型对照组、和空白对照组进行42 d小鼠灌胃实验。实验完成后,检测小鼠血液中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力、谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量和蛋白质羰基含量。结果表明,由木瓜蛋白酶水解,经超滤制备的＜1 000 u仿刺参精多肽具有较好的体外清除•OH能力,其半数抑制浓度为6.02 mg/mL,含量占比为58%,氨基酸组成中谷氨酸等酸性氨基酸和酪氨酸等疏水性氨基酸含量丰富。小鼠抗氧化模型实验表明,实验组生长正常,高剂量多肽组小鼠体内SOD活力显著提高（P＜0.05）,GSH的含量提高极显著（P＜0.01）、GSH-Px活力也呈剂量依赖性升高,但未达到差异显著（P＞0.05）。MDA和蛋白质羰基含量得到有效降低,后者达到差异显著（P＜0.05）。研究结果显示：＜1 000 u仿刺参精多肽具有提高小鼠抗氧化能力的效果,可以作为相关功能产品开发的原材料。     

秀珍菇多糖PMP-2a的理化性质及其体外抗氧化活性研究

本文以秀珍菇菌丝体为原料提取水溶性粗多糖,经脱蛋白、脱色、DEAE-Sepharose F.F和Superdex-200柱层析纯化,得到一种秀珍菇菌丝体多糖(PMP-2a)。高效液相色谱鉴定其纯度;比色法测定其总糖、糖醛酸、蛋白质含量;紫外光谱、红外光谱、β-消去等方法研究其理化性质和部分结构;通过清除超氧阴离子自由基、羟基自由基来研究PMP-2a的体外抗氧化活性。结果表明,PMP-2a为均一组分,其中性糖部分由鼠李糖(Rha)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、甘露糖(Man)、阿拉伯糖(Ara)组成(摩尔比为1:13.18:2.19:7.23:3.15);其总糖、糖醛酸、蛋白质含量分别为82.6%、19.8%、10.6%,不含有核酸;红外光谱呈现典型的多糖特征峰,含有α-D-吡喃糖苷键;相对分子质量为9.28×104 Da,β-消去反应表明糖链与蛋白之间存在-O-的连接键;PMP-2a对超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除效果显著,且与多糖浓度呈明显的量效关系。     

葛根多糖纯化工艺及其抗氧化性能研究

目的:以葛根为原料,采用大孔树脂法分离纯化葛根多糖,研究其抗氧化性质。方法:通过对葛根多糖吸附及解吸筛选出最优树脂,分析吸附解吸时间、样液浓度、样液pH以及乙醇的体积分数对多糖纯化的影响,在静态分析条件下再运用层析柱法进行动态纯化,对纯化后的葛根多糖进行抗氧化分析。结果:D101树脂分离纯化效果较好,其对葛根多糖静态吸附和解吸最佳工艺条件吸附时间为8 h,解吸时间为3 h,吸附浓度0.75 mg/mL,样液pH6.0,乙醇解吸体积分数为60%,其对动态吸附和解吸最佳工艺条件为上样液质量浓度1.0 mg/mL,解吸剂体积(60%乙醇)51 mL,在此条件下纯化的葛根多糖纯度达到55.34%。经纯化后的葛根多糖对DPPH·和·OH具有较强的清除作用,最大清除率分别为81.74%和85.11%。结论:大孔树脂法纯化葛根多糖工艺条件合理,且纯化效果好,杂质去除率高,纯化后的葛根多糖抗氧化性得到提高。