铜绿假单胞菌M19降解黄曲霉毒素B1的产物研究

以实验室筛选保藏的黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)降解菌M19产生的降解酶PADE为对象,对其AFB1降解液进行薄层色谱及荧光光谱分析(LC-MS),分析降解产物可能的结构变化,并利用液相质谱检测AFB1降解产物。薄层色谱检测结果:有机相和水相降解液均未检测到新的荧光吸收物质,表明降解产物没有荧光吸收;荧光光谱检测结果:AFB1降解产物的荧光明显减弱;液相质谱检测结果:发现质荷比为227.18的物质P。结果推断:AFB1降解过程中内酯键断裂,产生一个分子量为226的降解产物P,利用Xcalibur软件分析其分子式为C14H10O3,并根据AFB1降解后的LC-MS图谱分析以及AFB1降解产物的相关文献对降解途径进行假设。     

中国被毛孢降解黄曲霉毒素B1的特性研究

目的 分析中国被毛孢（Hirsutella sinensis）8#菌株降解黄曲霉毒素B1 (AFB1)的能力。方法 考察该菌株培养液、菌丝体悬液和上清液去除AFB1的能力;利用洗脱和萃取法区分生物降解和可逆吸附AFB1;研究不同初始AFB1浓度、温度、pH和金属离子对其降解能力的影响;对AFB1降解液进行高效液相色谱和薄层色谱分析。结果 H.sinensis培养液和菌体降解效果显著（P<0.05）,96 h后对初始浓度100 ng/mL的AFB1降解率分别是96.90%±4.39% 和 97.93%±2.92%。磷酸盐缓冲液洗脱液和甲醇萃取液均未检测到AFB1,证实了该菌生物降解AFB1。菌株AFB1降解效果与初始浓度密切相关。当反应温度25 ℃,pH 7.0时,培养液作用72 h后降解率为99.90%±0.18%。同时,反应液中加入Fe2+有利于降解,而Mg2+却起到了抑制作用。高效液相色谱和薄层层析对产物分析表明,该菌株可将AFB1降解为至少为1种产物。结论 中国被毛孢8#菌株对AFB1有良好的降解作用,可用于生物降解真菌毒素的潜力菌株。     

重组漆酶降解黄曲霉毒素B1分子对接分析及产物结构解析

以重组漆酶lac3基因同源性最高的3KW7作为模板进行同源模建,采用分子对接预测漆酶与黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）的结合模式,结果显示漆酶与AFB1可以相互作用,氢键是其关键作用力,漆酶可用于黄曲霉毒素的降解。随后,通过实际的降解实验进行验证,响应面优化获得AFB1降解率最优的条件为底物AFB1 1 μg、孵育时间15 h、孵育温度34 ℃、酶活力2 U,降解率可达91.08%。在此条件下利用超高效液相色谱-飞行时间串联质谱分析AFB1降解产物结构,发现4 个主要降解产物,根据其二级质谱信息和精确分子质量,推测出降解产物的分子式分别为C16H22O4、C14H16N2O2、C7H12N6O和C24H30O6。     

降解黄曲霉毒素B1菌株的发酵条件优化及降解机制

目的：鉴定一株降解黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）的霉菌HSK8,通过优化其发酵条件提高AFB1降解率,并初步探索其降解机制。方法：通过形态学和内部转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）、18S rRNA和26S rRNA序列分析对该菌株进行鉴定,并通过单因素试验对发酵条件进行优化,采用薄层层析对AFB1降解产物进行研究。结果：经鉴定该株霉菌为夏孢生枝孢（Cladosporium uredinicola）。其发酵条件经优化确定为：发酵温度28 ℃、装液量75 mL/250 mL、接种量15%、发酵时间36 h、初始pH 8.0。薄层层析观察到一个不同于AFB1的荧光斑点。结论：发酵条件优化后,AFB1降解率从40.68%提升到68.96%,提高了69.52%;AFB1降解产物能在365 nm波长处发出蓝色荧光。     

施氏假单胞菌F4对黄曲霉毒素B_1的酶解作用及其降解产物的初步分析

施氏假单胞菌F4能高效降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)。研究了F4的AFB1降解活性、降解动力学以及蛋白酶K和SDS对其降解性能的影响。F4细胞悬液与毒素共培养72 h后降解率达80.03%;蛋白酶K处理对降解率没有影响,SDS处理的细胞悬液基本丧失了降解活性。不同时间点的降解液上清液仍能有效降解残留AFB1,其中以60 h的降解液上清液活性较好,与残留AFB1继续作用48 h后降解率达84.30%;而经蛋白酶K处理后降解率仅为45.42%。低浓度AFB1诱导对菌体的降解活性没有影响。上述结果提示,F4通过胞内酶作用降解AFB1。高效液相色谱对产物分析表明,F4可将AFB1酶解为至少2种产物。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及降解酶挖掘

目的 筛选、鉴定一株高效降解黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1, AFB1)菌株,并对其降解特性和降解酶基因进行分析。方法 通过形态学观察、生理生化鉴定及同源性分析,对具有高效降解AFB1能力的菌株进行鉴定。通过菌株发酵液、上清液、细胞悬液、胞内提取物对AFB1降解能力的不同确定降解活性部位,使用冷冻干燥方法探索其粗酶制剂对AFB1降解效果。结合全基因组分析进行降解酶基因的挖掘。结果 通过鉴定,菌株HNGD-B3为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),菌株上清液对AFB1降解效果最好,72 h降解率为88.24%±2.02%。上清液蛋白酶K处理后,对AFB1降解效果大幅下降,热处理后上清液降解效果基本无变化,判断其降解活性成分为胞外酶。粗酶制剂可显著提高AFB1降解效率,结合全基因组分析与Blastp比对筛选得到3条具有AFB1降解潜力的候选基因序列。结论 菌株HNGD-B3对AFB1具有良好降解效果,在生物降解真菌毒素具有较大潜力。     

黄曲霉毒素B1降解菌株的鉴定及降解产物研究

为开发有效降解黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁,AFB₁)的生物菌剂,筛选降解率高的菌株进行分离鉴定,并分析降解产物,以前期筛选到AFB 1降解率高达83.5%的菌株WTX1为研究对象,通过形态学、生理生化特征及菌株16S rRNA基因测序对菌株进行鉴定,通过超高效液相色谱-串联四级杆质谱(ultra-performance liquid chromatography-MS/MS,UPLC-MS/MS)测定菌株各组分降解率,将降解液产物质谱图与软件中标准质谱库比对,分析菌株降解AFB₁产物结构。菌株WTX1被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。菌株降解AFB₁起主要作用的是生长过程产生的次级代谢产物。菌株WTX1降解AFB₁机制是破坏AFB₁的毒性结构即呋喃环二氢双键,香兰素内脂环结构,达到脱毒效果。较目前筛选到降解AFB₁的菌株,菌株WTX1更具有食品安全优势。     

降解黄曲霉毒素B1土曲霉发酵工艺优化的研究（网络首发、推荐阅读）

对黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)降解菌土曲霉（Aspergillusterreus）HNGD-TM15降解AFB1发酵工艺进行优化。在单因素实验基础上,运用Box-Behnken设计原理,对降解AFB1影响显著的HNGD-TM15发酵工艺参数碳源（葡萄糖）、pH和温度设计响应面实验,结果表明：模型（P=0.002 8）在1%水平上具有极显著性,失拟项不显著（P=0.063 5>0.05）,其R2=0.929 9,R2Adj=0.839 9,说明该模型拟合程度良好,可以模拟92.99%的AFB1降解率变化,其中pH对AFB1降解率的影响最大。确定HNGD-TM15发酵主要参数：葡萄糖0.7%,发酵液起始pH为3.0,发酵温度为34 ℃,接种量为0.006%的菌悬液,装液量为100 mL/250 mL,发酵时间为72 h。优化后AFB1降解率从接种量为5%的98.30%提高到接种量为0.006%的99.94%。     

黄曲霉毒素B1 降解产物及降解 安全性评价研究进展

为推动黄曲霉毒素B1(AFB1)降解技术的应用,寻求高效、快捷、安全的AFB1降解技术,促进食品中黄曲霉毒素的防治工作,对AFB1降解技术（物理降解技术、化学降解技术、生物降解技术）产生的降解产物以及降解后食品安全性评价研究的现状进行了论述,概括了降解技术的不足之处,并对降解技术的发展趋势进行展望。物理降解技术较适合大规模应用,但微波、脉冲电场、低温等离子体等技术仍处于研发阶段,无法确保该技术的安全性与可靠性。化学降解技术的研究比较常见,但存在食品感官品质变差,营养成分损失或破坏,易引入新的化学残留等不足。生物降解技术具有性质温和,不造成食品中营养成分大量损失且绿色环保等优点,但仍处于实验室研发阶段。在今后的研究中,应加强寻找新型纳米材料发展光降解技术、或各种技术联合使用、或利用基因工程联合酶法脱毒等新型技术,同时应更深入地研究降解机制、降解产物、降解路径以及降解产物的安全性。     

紫外光照射和γ射线辐照对大豆中黄曲霉毒素B1降解的比较研究

以新鲜大豆为原料,通过标准液添加获得黄曲霉毒素B1(AFB1)含量分别为0.1、0.5和1.0 mg/kg的染毒大豆,考察了紫外光照射、γ射线辐照及其联合技术对大豆中AFB1的降解效果。结果表明,利用紫外光照射降解大豆中AFB1时,紫外光照射强度对大豆中AFB1的降解具有显著影响(P0.05),而大豆中水分含量和AFB1含量对AFB1降解率的影响并不显著(P0.05),紫外光照射前10 min内,大豆中AFB1的降解率随光照时间的增加而增加,但是当照射时间超过10 min后,紫外光照射对大豆中AFB1降解率的影响并不显著(P0.05)。利用γ射线辐照降解大豆中AFB1时,大豆中AFB1降解率随γ射线辐照剂量和大豆水分含量的增加而增加,随大豆中AFB1含量的增加而降低,γ射线辐照剂量、水分含量和AFB1含量对大豆中AFB1的降解均具有显著影响(P0.05)。同时,研究还发现紫外光照射和γ射线辐照对大豆中AFB1的降解具有耦合增效作用。     

嗜盐四联球菌对黄曲霉毒素B1生物降解的研究

该实验主要研究了嗜盐四联球菌（Tetraphylococcus halophila）对黄曲霉毒素B1（AFB1）的降解。研究嗜盐四联球菌不同接种量及不同浓度AFB1对降解效果的影响,检测嗜盐四联球菌上清液不同处理条件及金属离子对AFB1降解效果的影响,并利用扫描电镜（SEM）观察了嗜盐四联球菌在AFB1毒素环境中的微观形态。结果表明,嗜盐四联球菌接种量为1%,发酵72 h时对AFB1的降解率可达到70.11%,降解活性物质主要存在于上清液中,且具有一定的耐热性。Ca2+抑制上清液对AFB1的降解,AFB1降解率降至40.32%;Zn2+促进上清液对AFB1的降解,AFB1降解率提高至75.52%,扫描电镜结果表明,与AFB1共培养72 h后,嗜盐四联球菌细胞壁褶皱转好。     

鼠李糖乳杆菌对黄曲霉毒素B1的降解及对 肝损伤的保护作用

目的分析鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)对黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)的降解能力,阐述LGG对由AFB_1引起的肝损伤的保护作用。方法利用LGG培养液、LGG上清液组、LGG菌体、热处理后上清液和热处理后LGG菌体处理AFB_1,利用高效液相色谱法测定AFB_1的残留量,分析LGG对AFB的降解能力。利用低、中和高剂量的LGG菌液灌胃由AFB_1引起肝损伤的大鼠,并以空白和阳性作为对照组,测定大鼠的血清肝功能及肝组织抗氧化指标,分析LGG对肝损伤的保护作用。结果 AFB_1降解实验表明LGG菌液对AFB_1具有显著的降解作用(P0.05),36 h能够降解(92.01±2.02)%的AFB_1。降解作用是由菌体和LGG的代谢产物共同作用的结果。大鼠血清肝功能及肝组织抗氧化指标结果表明低、中和高剂量的LGG灌胃给药均能显著改善因AFB_1引起的大鼠肝功能和肝组织抗氧化指标异常(P0.05)。结论 LGG对AFB_1具有良好的降解作用,且能够有效抑制因AFB_1引起的肝损伤。     

Biological degradation of aflatoxin B1 by Rhodococcus erythropolis cultures

Aflatoxin contamination of food and grain poses a serious economic and health problem worldwide, but particularly in Africa. Aflatoxin B(1) (AFB(1)) is extremely mutagenic, toxic and a potent carcinogen to both humans and livestock and chronic exposure to low levels of AFB(1) is a concern. In this study, the biodegradation of aflatoxin B(1) (AFB(1)) by Rhodococcus erythropolis was examined in liquid cultures using thin layer chromatography (TLC), high performance liquid chromatography (HPLC), electro spray mass spectrometry (ESMS) and liquid chromatography mass spectrometry (LCMS). AFB(1) was effectively degraded by extracellular extracts from R. erythropolis liquid cultures. Results indicated that the degradation is enzymatic and that the enzymes responsible for the degradation of AFB(1) are extracellular and constitutively produced. Furthermore, the biodegradation of AFB(1) when treated with R. erythropolis extracellular fraction coincided with a loss of mutagenicity, as evaluated by the Ames test for mutagenicity.     

Aflatoxin B1 degradation by flavobacterium aurantiacum in the presence of reducing conditions and seryl and sulfhydryl group inhibitors

This study was undertaken to determine the effects of reducing conditions (L-cysteine) and seryl (phenylmethylsulfonyl fluoride) and sulfhydryl (divalent cadmium) group inhibitors on aflatoxin B1 (AFB1) degradation by Flavobacterium aurantiacum. High-performance liquid chromatography was used to determine AFB1 concentrations in 72-h cultures of F. aurantiacum. The addition of 0.1, 1, or 10 mM L-cysteine did not have any significant effect on AFB1 degradation by these cultures after incubation for 4, 24, or 48 h (P > 0.05). The addition of 0.1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride did not significantly decrease AFB1 degradation (P > 0.05), but 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride significantly decreased AFB1 degradation after 4, 24, and 48 h of incubation (P < or = 0.05). No significant difference in AFB1 degradation was obtained with 0.1 mM Cd2+ after 4, 24, or 48 h of incubation (P > 0.05). The addition of 1 and 10 mM Cd2+ significantly decreased AFB1 degradation compared with the cells containing AFB1 alone after 4 and 24 h (P < or = 0.05). The addition of chelators, 1 mM EDTA and 1 mM o-phenanthroline, did not result in removal of inhibition of AFB1 degradation observed with 1 and 10 mM Cd2+. Higher concentration of chelators (>1 mM) are necessary to overcome the inhibitory effect. Further work on the cellular fractions and/or crude enzyme preparations is necessary to determine if indeed sulfhydryl and seryl groups of the enzymes are involved in AFB1 degradation (by maintaining either the structure or function of the enzyme).     

花生中的物质成分对低温射频等离子体降解黄曲霉毒素B1的影响

研究采用低温射频等离子体技术处理黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）,通过高效液相色谱分析其中AFB1的降解率,探究花生中的蛋白质、脂肪酸、维生素和水分对低温射频等离子体去除AFB1的影响。结果表明,添加花生蛋白和玉米蛋白后,在不同的等离子体处理功率条件下,AFB1的降解率明显下降。在相同处理条件下,添加花生蛋白比添加玉米蛋白后的降解率低;添加油酸和亚油酸后,在不同的等离子体处理功率条件下,AFB1的降解率明显下降。在相同处理条件下,油酸和亚油酸的AFB1降解率基本相同;添加VE后,AFB1的降解率先高于空白组,后低于空白组。在相同处理条件下VE的含量越多,AFB1的降解率越低。说明低温射频等离子体技术降解AFB1时,花生中的成分对降解有影响。     

黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选及鉴定

该研究以香豆素为唯一碳源,从豆类发酵食品、土壤、动物肠道及其内容物中筛选黄曲霉毒素B1（AFB1）降解菌株;然后通过复筛,从中筛选出AFB1降解能力较好的菌株,并对其降解作用与吸附作用进行区分;最后,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定。结果表明,共筛选得到9株AFB1降解菌株,其中菌株YC2的AFB1降解能力最强,AFB1降解率达到90.7%,并确定菌株YC2通过降解作用去除AFB1。最后,菌株YC2被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。     

The influence of divalent cations and chelators on aflatoxin B1 degradation by Flavobacterium aurantiacum

The influence of divalent cations (Mg2+ and Ca2+) and chelators (EDTA and 1,10-phenanthroline) on aflatoxin B1 (AFB1) degradation by Flavobacterium aurantiacum was determined in an effort to elucidate the possible manner by which this organism degrades AFB1. AFB1 (10 microg/ml) was added to 72-h cultures of F. aurantiacum that had been washed and resuspended in phosphate buffer (pH 7.0). High-performance liquid chromatography was used to determine AFB1 concentration in these cultures. Incubating cells with 0.1, 1, and 10 mM Ca2+ for 48 h significantly increased AFB1 degradation by 11.8, 13.5, and 14.0%, respectively, compared with F. aurantiacum cells alone. Likewise, incubation with 0.1, 1, and 10 mM Mg2+ for 48 h significantly increased AFB1 degradation by 13.8, 13.3, and 13.1%, respectively. Incubating the bacterium with either divalent cation for 16 and 24 h did not significantly affect AFB1 degradation (P < or = 0.05). Addition of 0.1, 1, and 10 mM EDTA and 0.1 and 1 mM 1,10-phenanthroline resulted in significant increases in AFB1 degradation after 24 h. Significantly less AFB1 degradation was observed using 10 mM 1,10-phenanthroline after 24-h incubation. These results suggest the involvement of Mg2+ and Ca2+ cations in AFB1 degradation by F. aurantiacum.     

低温等离子体降解呕吐毒素效果评价及降解规律解析

小麦赤霉病导致的真菌毒素污染是影响小麦质量安全的关键因素,如何削减呕吐毒素(DON)污染是当前的急迫需求.本研究利用等离子体处理技术可降解乙腈水溶液中的DON,并通过胶体金定量试纸条和液质联用仪进行了分析.通过高分辨质谱测定分析,推导出12种降解产物.进一步对去环氧基降解产物质谱碎片峰进行匹配并推导其裂解途径.结果表明...